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人类睾丸生精细胞凋亡相关基因TSARG3的克隆 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:克隆人类睾丸生精细胞凋亡相关基因TSARG3。方法:从已获得的小鼠稳睾和正常睾丸对照中表达量有明显差异的表达序列标签片段(BE644537)入手,构建人同源表达序列标签重叠群,应用基因特异性引物和载体特异性引物,在睾丸cDNA文库的DN或进行巢式PCR扩增、测序,对测序结果进行生物信息学分析。结果:从睾丸cDNA文库中分离出人类睾丸凋亡相关基因的5’末端而获得全长cDNA,命名为TSARG3,GenBank登录号为AF419291(保密期为1年),同时应用相同方法克隆了该基因在小鼠中的同源基因,GenBank登录号为AF419292。结论:获得人类睾丸生精细胞凋亡相关基因TSARG3,该基因可能与人类睾丸生精细胞凋亡有关。 相似文献
2.
β1肾上腺素能受体基因多态性及其甲基化修饰对美托洛尔降压疗效的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的研究β1肾上腺素能受体基因多态性及其甲基化修饰对美托洛尔降压疗效的影响。方法入选300例高血压病患者,给予相同剂量美托洛尔降压治疗,同时用聚合酶链反应限制片长多态性法检测其基因型,比较不同基因型高血压患者血压下降水平;用甲基化特异性聚合酶链反应法检测相同基因型高血压患者和正常血压者β1肾上腺素能受体基因甲基化修饰情况。结果美托洛尔治疗后,Arg389Arg型患者舒张压较Gly389Arg型和Gly389Gly型患者明显下降(降幅8.0%±1.3%比4.0%±1.5%和3.0%±1.1%,P<0.05);三种基因型患者收缩压下降幅度差异无显著性。所有研究对象外周血中β1肾上腺素能受体基因均存在甲基化修饰。结论β1肾上腺素能受体的Gly389Arg基因多态性与美托洛尔降压疗效相关;外周血β1肾上腺素能受体基因甲基化修饰未发现与美托洛尔降压疗效相关。 相似文献
3.
【目的】探讨湖南中部娄底和湘潭地区高血压人群CYP2D6和β1肾上腺素能受体(β1-AR)基因多态性分布。【方法】湖南中部地区高血压患者403名,采用聚合酶链反应(PCR)和聚合酶链反应-限制性片断长度多态性方法(PCR-RFLP)进行CYP2D6和β1-AR基因分型。【结果】403例高血压患者中CYP2D6检测出CYP2D6的*1、*2、*5、*10四种等位基因,频率由高到低依次为*10(67.5%)、*1(17.5%)、*2(9.2%)、*5(5.8%),突变基因型频率最高为CYP2D6*10*10(47.4%)。β1-AR 49位Ser和Gly等位基因频率分别为83.9%和16.1%;Ser/Ser、Ser/Gly和Gly/Gly基因型分布频率分别为68.7%、30.3%和1.0%。β1-AR 389位Arg和Gly等位基因频率分别为76.1%和23.9%,Arg/Arg、Gly/Arg和Gly/Gly基因型分布频率为55.3%、41.4%和3.2%。各基因型及等位基因频率在不同性别中分布无差异(均P〉0.05)。【结论】湖南中部地区高血压人群CYP2D6和β1-AR基因多态性分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡,其中CYP2D6*10和β1-AR 389位基因突变率最高,可能成为影响β受体阻滞剂降压疗效的显著因素之一。 相似文献
4.
目的:研究血小板膜糖蛋白Ⅱb(GPIIb)三种基因多态性之间的关系及GPIIbT13959G在血小板输注耐受中的作用。方法:聚合酶链反应-单链构型多态性分析检测110例正常人GPIIb基因第26和30外显子(Exon26,Exon30)及21内含子(Intron21)基因多态性,进行基因序列分析,研究这些基因多态性是否存在连锁关系;应用Fok1酶切法对147例血液病人人类血小板抗原-3(humanplateletantigen-3,HPA-3)基因进行分型,并与110例正常人进行比较;将接受单采血小板输注的44例血液病人随机分为HPA-3同型输注组和对照组,血小板输注3次以后检测血小板抗体。结果:正常人GPIIb存在基因多态性,表现分别为gDNA13959位点T→G,16977位点C→T,11996~12004位点9个碱基缺失,且三者具有同步性。Fox1酶切分析结果表明,正常人和血液病人的HPA-3a基因频率分别为83.6%(92/110)和81.9%(119/147),HPA-3b基因频率分别为16.4%(18/110)和19.1%(28/147),两者之间差异无统计学意义(P>0.05)。血液病人接受单采血小板输注后,HPA-3同型输注组血小板抗体阴性,而对照组有2例存在血小板抗体,其中1例为HPA-3a抗体。结论:(1)GPIIb基因存在gDNA13959位点T→G,16977位点C→T,11996~12004位点9个碱基缺失,这3个位点的多态性可能存在完全连锁关系;(2)血液病人与正常人的HPA-3基因频率相同;(3)HPA-3系统可能是我国人群产生血小板输注耐受的原因之一。 相似文献
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cDNA微阵列结合信号通路分析喉鳞癌差异表达基因 总被引:1,自引:0,他引:1
cDNA微阵列技术(又称基因芯片)具有信息集约化、平行处理、高效、快速、多参量等特点。运用基因芯片从成千上万个人类基因中筛查出特定的肿瘤相关基因,并用分子生物学方法重点研究和验证被筛选出的基因与肿瘤的关系,是目前肿瘤研究中常用的方法之一,但基因芯片筛选出的基因太多,范围太广,若用RT-PCR, 相似文献
6.
脊髓性肌萎缩症是一种常染色体隐性遗传病,以脊髓运动神经元退化为特征,是由运动神经元存活基因突变引起功能性的运动神经元存活蛋白水平降低所致.该基因及其蛋白功能的阐明为临床基因诊断提供了依据. 相似文献
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目的 探讨CYP3A4*1G、CYP3A5*3和MDR1 C3435T基因多态性对肾移植后高血压人群氨氯地平降压疗效的影响.方法 筛选70名肾移植后高血压患者并给予氨氯地平5 mg/d干预4周,应用PCR-RFLP方法检测相关基因型,根据基因型进行分组,比较不同基因型高血压患者血压下降水平.结果 3例自动退出试验,67例患者完成试验.经氨氯地平治疗后收缩压和舒张压下降值分别为18.8±6.9 mmHg和12.7±5.4 mmHg,差异有统计学差异(P<0.05).CYP3A5*3*3基因型舒张压下降幅度(15.0±5.0 mmHg)显著高于CYP3A5*1*3基因型(11.3±5.3 mmHg)和CYP3A5*1*1基因型(10.0±4.1 mmHg)(P<0.05),但三组间收缩压下降幅度差异无显著性(P>0.05);CYP3A4*1G*1G基因型携带者舒张压下降幅度(8.6±4.1 mmHg)显著低于CYP3A4*1G*1基因型(13.2±5.2 mmHg)和CYP3A4*1*1基因型(13.1±5.5 mmHg)(P<0.05),三组间收缩压下降幅度差异无统计学意义(P>0.05);MDR1 C3435T各基因型在治疗前后收缩压和舒张压下降幅度差异均无显著性(P>0.05);CYP3A4*1G和CYP3A5*3具有连锁性,以GGGG、AAAA、AGAG基因型最常见,其中GGGG基因型治疗前后舒张压下降幅度高于其他三组(P<0.05).结论 在肾移植后高血压治疗中,CYP3A5*3和CYP3A4*1G基因多态性可影响氨氯地平的降压疗效,CYP3A5*3*3基因型的舒张压下降幅度最大,CYP3A4*1G*1G基因型的舒张压下降幅度最小,CYP3A4*1G/ CYP3A5*3组成的单倍体中GGGG基因型对舒张压下降幅度最大,MDR1 C3435T未发现与氨氯地平降压疗效相关. 相似文献
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目的了解三亚地区某医院血流感染病原菌分布及其耐药情况。方法回顾性分析该院2013年1月—2015年12月临床送检血培养标本及药敏试验结果。结果 3 195份血培养标本共检出阳性病原菌356株,阳性率为11.14%,其中革兰阴性菌215株(占60.39%),革兰阳性菌122株(占34.27%),真菌19株(占5.34%)。革兰阴性菌分离菌株数较多的是大肠埃希菌(90株,25.28%)、肺炎克雷伯菌(60株,16.85%)及假鼻疽伯克霍尔德菌(24株,6.74%);革兰阳性菌则以金黄色葡萄球菌(42株,11.80%)、凝固酶阴性葡萄球菌(38株,10.67%)及链球菌属细菌(33株,9.27%)居多。大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌对头孢哌酮/舒巴坦、阿米卡星及碳青霉烯类耐药率低于10.00%。假鼻疽伯克霍尔德菌对多数抗菌药物的耐药率低于10.00%。主要革兰阳性菌未检测出耐利奈唑胺及万古霉素的菌株。结论近期该院血流感染病原菌以革兰阴性菌为主,尤其假鼻疽伯克霍尔德菌的分离率较其他地区高,应引起临床重视。 相似文献
9.
目的 原核表达人睾丸生精相关基因SPAG4L,并对重组蛋白进行纯化,为下一步研究SPAG4L的生物学功能奠定基础.方法 运用RT-PCR从人睾丸中扩增编码SPAG4L126-379的基因片段,并将PCR产物克隆至pUCm-T载体.用限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ消化后,将目的 片段克隆至带有6个组氨酸标签的原核表达载体PQE30中.重组质粒PQE-30-SPAG4L经酶切和测序验证后,转化大肠杆菌JM15,IPTG诱导融合蛋白表达.SPAG4L融合蛋白以westernblot进行鉴定,最后用NI-NTA磁性琼脂糖珠进行纯化.结果 成功构建了重组表达质粒PQE-30-SPAG4L,并能够在大肠杆菌JM15中诱导表达,经Westernblot分析证实,IPTG诱导表达的是SPAG4L融合蛋白.建立小规模的SPAG4L融合蛋白表达、纯化系统,获得了带有6个组氨酸标签的纯化的SPAG4L融合蛋白.结论 成功地对人睾丸生精相关基因SPAG4L进行了体外原核表达,获得了纯化的融合蛋白蛋白,为进一步研究该蛋白在精子发生中的生物功能奠定了基础. 相似文献
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目的制备可检测全长SUN5的特异性抗体,并用该抗体检测SUN5蛋白在人类生殖细胞中的表达。方法通过生物信息
学比较SUN5与新剪切体SUN5β之间的差异,在差异区域设计合成短肽,制备SUN5多克隆抗体并纯化。用新制备的SUN5抗
体对Ntera-2细胞中的SUN5蛋白进行Western blotting和免疫荧光检测,验证抗体的特异性;最后,用该抗体对人睾丸细胞涂片
进行检测,观察SUN5 蛋白在人生殖细胞中的表达。结果成功合成了SUN5 短肽,而且用该短肽制备了SUN5 多克隆抗体。
Western blot 结果显示,新制备的SUN5特异性抗体可检测到全长SUN5蛋白。免疫荧光实验结果表明,在Ntera-2细胞中SUN5
蛋白定位在核膜和胞浆。通过对人睾丸细胞涂片的检测发现,SUN5在睾丸精母细胞、圆形精子细胞及精子中均有表达。结论
成功制备了SUN5特异性抗体,该特异性抗体的制备对于深入研究SUN5的功能具有重要的意义。此外,发现SUN5蛋白在精
母细胞、圆形精子细胞及精子中均有表达,提示SUN5蛋白可能在精子发生中发挥着重要的生理功能。 相似文献