青霉素结合蛋白PBP1a的克隆表达和对肺炎链球菌耐药性的影响

目的克隆并表达肺炎链球菌青霉素结合蛋白PBP1a,探讨其对青霉素耐药的影响。方法化学合成肺炎链球菌含STMK区的pbp1a基因片段,PCR扩增后进行1.0%琼脂糖凝胶电泳鉴定。将扩增的pbp1a基因连接pUC19载体,构建重组质粒pUC19-pbp1a,转化DH5α,PCR扩增后进行1.5%琼脂糖电泳分析和DNA测序鉴定。将pUC19-pbp1a转化对青霉素敏感、中度敏感和耐药,并存在不同的pbp1a、pbp2b突变的肺炎链球菌,SDS-PAGE分析PBP1a的表达,并测定青霉素对转化菌的MIC。结果 pbp1a基因扩增产物经琼脂糖凝胶电泳为330bp,大小与预期一致。重组质粒基因全长为360bp,扩增产物约330bp,测序无碱基缺失、插入等突变。重组质粒转化存在不同的pbp1a、pbp2b突变和对青霉素不同敏感性的肺炎链球菌后,大量表达约110ku蛋白,其中对青霉素敏感和中度敏感的无pbp1a突变株MIC无变化,对中度敏感菌中的pbp1a突变株MIC略有变化,对存在pbp1a突变的耐药菌株MIC显著降低(P<0.01)。结论在肺炎链球菌中成功表达了青霉素结合蛋白PBP1a,可使其对青霉素的耐药性显著降低。     

用虚拟实验软件进行医学免疫学和病原生物学实验考试的实践

随着信息科学技术的迅猛发展,计算机、虚拟现实等技术已进入社会的各个领域,产生了巨大的影响。在教育领域,多媒体、虚拟现实等技术已逐渐成为有效的教学媒体和工具,成为实验教学的新手段,使教学模式发生了巨大变化。     

废水中地塞米松污染的探讨

目的探讨废水中地塞米松污染的状况,为治理水环境污染提供依据。方法采集医院、养猪场、城市废水厂废水、街道地表水及江水,采用固相萃取-高效液相色谱法检测其地塞米松含量。结果医院、废水厂处理前后的废水、养猪场的废水、医院旁的街道地表水中含有一定浓度的地塞米松,以养猪场废水池的废水中含量最高,为(1050.90±11.67)ng/L,其次为专科医院处理前的废水,为(452.05±8.10)ng/L,废水中含量的不同可能与地塞米松的应用量有关。结论城市废水中存在不同量的地塞米松,废水处理中应引起重视,并采取相应的措施。     

病原生物学与免疫学实验教学改革探索

为使学生更好地掌握病原生物学与免疫学实验教学的基本技能,并充分利用实验教学的特点,培养其科学素质和创新意识,教研室对病原生物学与免疫学实验教学改革进行探索。将微生物学、寄生虫学与免疫学实验整合为一门实验课程,成立相应的实验室,独立承担实验教学。通过更新实验教学理念,将教学内容进行模块化、个性化设置,建立完整的管理制度,编写匹配的新实验教程,改进教学手段,以及大力开展学生创新实验等措施,提高了学生对实验课的学习积极性和兴趣,增强了其创新能力。     

硫糖铝在体外对抗幽门螺杆菌HpaA IgY的保护作用评价

目的评价硫糖铝对HpaA IgY的保护作用,为制备IgY口服制剂奠定基础。方法大量诱导工程菌DH5α-HpaA-pQE30,制备纯化的重组蛋白HpaA。以HpaA为抗原接种洛曼母鸡,制备纯化的IgY。在不同pH值、含不同浓度胃蛋白酶的HpaA IgY液中加入不同浓度的硫糖铝;将IgY液反复冻融;以ELISA法测定HpaA IgY的剩余抗体活性(AR/AC)。结果在pH 1.5条件下,60%硫糖铝可使IgY抗体剩余活性维持65.8%;在pH 2.0条件下,含30%硫糖铝的IgY可使抗体活性维持85.4%,含50%硫糖铝的IgY可完全维持抗体活性。在pH 3.0条件下,含30%硫糖铝的IgY可使抗体活性维持87.3%,而含40%以上硫糖铝的IgY几乎可完全维持抗体活性。在胃蛋白酶浓度0.02mg/mL条件下,当含10%、30%、50%硫糖铝IgY的剩余活性,在pH值2.0时,分别为62.8%、71.6%、82.5%;在pH值3.0时,分别为75.6%、87.4%、94.5%;反复冻融后,含10%硫糖铝的IgY可使抗体活性提高到70.6%,含30%硫糖铝可使IgY的抗体活性提高到82.7%,50%硫糖铝可提高到89.3%。结论 30%以上的硫糖铝可增强VacA IgY对低pH和胃蛋白酶的耐受能力,抗冻融能力,是较理想的IgY保护剂。