趋化因子RANTES在毕赤酵母中的表达、纯化与鉴定

背景：RANTES是典型的趋化性细胞因子，参与很多炎症反应以及器官移植免疫排斥反应。从天然组织中分离RANTES数量有限，难以满足对其生物学功能研究和临床应用的需要：运用基因工程方法生产RANTES具有一定的应用价值。 目的：观察人体趋化因子RANTES基因在毕赤酵母体系中的分泌表达，获得重组RANTES蛋白。 设计、时间及地点：基因水平的实验观察，于2006—07／2007—10在重庆大学生物工程学院313实验室完成。 材料：新鲜人外周血取自志愿者，用以分析人体RANTES基因序列设计引物：质粒pPIC9K、毕赤酵母菌珠Pichia Pastoris GS115均由重庆大学生物工程学院313实验室保存。 方法：将人体趋化因子RANTES基因插入含AOXI启动子和α分泌信号肽序列的酵母表达载体pPIC9K中，用Sal I将重组质粒线性化，电击转化毕赤酵母GS115感受态细胞，筛选阳性整合子进行甲醇诱导表达。 主要观察指标：趋化因子RANTES在毕赤酵母中的表达、纯化与鉴定结果。 结果：人体趋化因子RANTES在酵母培养基BMGY中实现了分泌表达，表达产物经SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳及Western blot鉴定为重组RANTES蛋白。 结论：在毕赤酵母真核系统中实现了人体趋化因子RANTES的分泌表达，为RANTES蛋白进一步的结构和功能研究打下了基础。     

上皮性卵巢癌中ZEB2 和C-myc蛋白的表达及临床意义

目的探讨E盒锌指结合蛋白2（ZEB2）和原癌基因C-myc（C-myc）在上皮性卵巢癌组织（EOC）中的表达情况,并分析其表
达与EOC病理特征和预后的相关性。方法用免疫组化SP法检测191例EOC和13例正常卵巢组织中ZEB2和C-myc蛋白的表
达,并分析ZEB2及C-myc蛋白的表达与肿瘤临床病理特征的相关性。结果EOC和正常卵巢组织中ZEB2蛋白的阳性表达率
分别为49.2%（94/191）和30.8%（4/13）,差异有统计学意义（P=0.007）;C-myc 蛋白的阳性表达率分别为53.9%（103/191）和
15.4%（2/13）,差异有统计学意义（P=0.001）。ZEB2蛋白的表达与EOC病理分型（P=0.003）、FIGO 分期（P=0.028）、T分期（P=
0.002）、淋巴结转移（P=0.04）有关。C-myc 蛋白的表达与EOC中FIGO 分期（P=0.035）、病理学分级（P=0.039）、T 分期（P=
0.002）有关。EOC组织中ZEB2与C-myc蛋白的表达有关联（R=0.358, P<0.001）。同时ZEB2及C-myc的共同表达在T分期和
FIGO分期有关（P<0.001,P<0.008）。结论ZEB2 和C-myc有助于促进EOC的发展、浸润和转移,两者联合检测有望成为EOC
的早期诊断指标。