基于液态活检的4种甲基化检测方法的比较及临床应用价值评价

目的 基于分泌卷曲相关蛋白2(secreted frizzled-related protein 2,SFRP2)基因,评价荧光定量法(Methy Light)、微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)、核酸质谱、靶向亚硫酸氢盐二代测序4种甲基化检测方法。方法 对4种甲基化检测方法的检测限(limit of detection, LOD)、定量限(limit of quantitation, LOQ)及稳定性方面进行比较,其中稳定性用变异系数(coefficient of variation,CV)来评估。结果 SFRP2基因在Methy Light、ddPCR、核酸质谱和靶向亚硫酸氢盐二代测序中的LOD分别为1.2500ng/孔、0.0625ng/孔、0.0625ng/孔、1.2500ng/孔,在LOD方面,ddPCR和核酸质谱的表现较好;SFRP2基因在MethyLight、ddPCR、核酸质谱和靶向亚硫酸氢盐二代测序中的LOQ分别为0.800%、0.032%、4.000%、0.032%,在LOQ方面,ddPCR和靶向亚硫酸氢盐二代测序的表现较好;SFR...     

尿液中GSTP1基因甲基化数字PCR方法的建立和优化

目的 基于微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)建立一种检测前列腺癌(prostatic cancer, PCa)尿液谷胱甘肽硫转移酶P1(glutathione S-transferase pi-1,GSTP1)基因甲基化的方法,并对其进行优化。方法 本研究收集20例前列腺癌尿液样本,设计并筛选引物和探针,通过调整亚硫酸氢盐转化时间及ddPCR反应体系中引物浓度、探针浓度、退火温度、循环次数、变性时间和退火延伸时间对ddPCR检测方法进行优化。结果 尿液DNA亚硫酸氢盐转化的最佳时间是2h 10min,最佳引物浓度是700nmol/L,最佳扩增温度为58.3℃,最佳循环次数是50次,最佳变性时间是30s,最佳退火延伸时间是60s,本研究范围内探针浓度对ddPCR影响不大,可根据实验自行调整探针浓度。结论 本研究建立并优化了ddPCR检测前列腺癌尿液样本GSTP1基因甲基化方法,提高了ddPCR检测尿液中痕量DNA的性能。     

质谱分析及第二代测序技术检测白血病微小残留病的研究进展

白血病是一种造血干细胞异常增殖与发育的进行性恶性疾病,其治疗的选择性十分有限,而微小残留病(MRD)已成为白血病复发的直接原因,也是患者生存的重要预后因素,因此MRD的检测有利于对白血病患者进行疾病状态评估、疗效判定、指导治疗及预测复发.临床广泛使用流式细胞术对MRD进行检测,但其检测能力较低,而新兴技术的快速发展则有...     

5-α还原酶抑制剂联合治疗良性前列腺增生的研究进展

<正>良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)是老年男性下尿路症状(lower urinary tract symptoms,LUTS)的最常见原因^[1],其中70%以上的患者接受药物治疗。目前,α肾上腺素能受体拮抗剂(α-adrenergic receptor blockaders,α-ARB)与5-α还原酶抑制剂(5α-reductase inhibitors,5-ARI)是治疗BPH的一线药物^[2,3]。但单药治疗往往难以取得满意的疗效,且5-ARI治疗也会引起一系列不良反应,包括性欲下降、男性乳房发育和勃起功能障碍^[4]。有研究发现,联合治疗可补充彼此的药理作用,不但疗效满意还能抑制疾病进展及提高患者治疗依从性^[5]。本文对5-ARI与磷酸二酯酶-5抑制剂(phosphodiesterase type 5 inhibitor,PDE5I)、α-ARB、抗胆碱能药物、植物类药物及手术等方法的联合治疗进行综述,旨在为治疗良性前列腺增生提供借鉴...     

布洛芬对少突神经胶质细胞生长发育的影响

摘要： 目的 探究布洛芬对少突胶质细胞 （OLs） 生长发育的影响。方法 健康清洁级SD成年大鼠6只, 提取 OLs, 扩增后加入溶血磷脂酸 （LPA） 观察细胞形态变化。使用出生24~48 h的新生鼠6只, 提取少突胶质细胞前体细胞 （OPCs）, 将OPCs接种后随机分为对照组、 LPA组、 布洛芬组、 LPA+布洛芬组。贴壁3 d后观察细胞形态, 对照组加入生理盐水, 其他3组分别加入LPA （1.0 μmol/L）、 布洛芬盐水溶液 （100 μmol/L） 及两者的混合液。药物持续干预7 d 后观察细胞形态, 分别对OPCs特异性免疫标志物血小板源生长因子受体α （PDGFR-α） 和OLs特异性免疫标志物髓鞘碱性蛋白 （MBP） 行免疫荧光染色观察OPCs及OLs形态并细胞计数。使用Western blot法比较各组MBP相对表达量。结果 LPA作用于成熟OLs后细胞突起减少。OPCs贴壁3 d时各组细胞发育良好。药物干预7 d后, 布洛芬组和LPA+布洛芬组中细胞突起明显多于对照组和LPA组。布洛芬组、 LPA+布洛芬组的MBP阳性细胞计数多于对照组和LPA组 （P＜0.01）。Western blot结果显示, LPA组的MBP表达量明显少于其他3组 （P＜0.01）, 布洛芬组表达量明显多于LPA＋布洛芬组 （P＜0.01）。结论 LPA对OPCs的生长发育有毒性作用, 对成熟OLs的正常生长具有抑制作用, 一定浓度的布洛芬能够显著抑制LPA对OPCs及OLs的细胞毒性作用。     

前列腺增生伴逼尿肌活动低下的危险因素分析

目的 探讨良性前列腺增生(BPH)患者合并逼尿肌活动低下(DU)的独立危险因素。方法 回顾性分析2014年1月至2022年5月因下尿路症状(LUTS)于我院行尿动力学检查的患者444例。根据患者尿动力学检查结果中的膀胱收缩指数(BCI),将患者分为DU组(BCI<100,n=150)和非DU组(BCI≥100,n=294)。将单因素Logistic回归分析筛选的与DU相关的变量纳入多因素Logistic回归分析,得出BPH患者合并DU的独立危险因素(P<0.05),并绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估相关变量的预测价值。结果 多因Logistic回归分析提示高龄、较低的尿不尽症状评分、较低的尿急症状评分、较小的前列腺体积(PV)和较低的最大尿流率(Qmax)为BPH患者合并DU的独立危险因素(P<0.05)。由这5个变量组成的DU预测模型的ROC曲线下面积为0.77(AUC=0.77),灵敏度和特异性分别为0.76和0.65。结论 高龄、较低的尿不尽症状评分、较低的尿急症状评分、较小的PV和较低的Qmax为BPH患者合并DU的独立危险因素。     

中老年男性体检人群良性前列腺增生关联因素研究

背景寻找良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)发生的影响因素有助于对BPH进行早期预防。目的 探讨中老年男性体检人群临床指标与前列腺体积的相关性,寻找BPH的关联因素。方法 回顾性分析2021年6月—2023年6月某三甲医院体检中心行健康检查的中老年男性的资料,以前列腺总体积(total prostate volume,TPV)为分组标准,TPV>25 cm³为BPH组,TPV≤25 cm3为健康对照组,采用Spearman相关性分析和多因素Logistic回归分析与TPV相关的因素。结果 共纳入6 732例45～89岁中老年男性,其中BPH组3 972例,健康对照组2 760例。与健康对照组相比,BPH组年龄[M(IQR):56(51～60)岁vs 53(49～58)岁,P<0.001]、体质量指数(body mass index,BMI)[M(IQR):26.41(24.64～28.36) kg/m² vs 25.76(24.06～27.80) kg/m²,P&...     

青少年急性白血病合并噬血细胞综合征5例

背景 近年来,急性白血病(acute leukemia,AL)合并噬血细胞综合征(hemophagocytic syndrome,HLH)确诊病例逐渐增多,特别是青少年确诊病例。目的 探讨青少年AL合并HLH患者的临床特征和诊治方案选择。方法 收集2013年9月-2022年12月就诊于解放军总医院第一医学中心血液科的5例AL合并HLH患者的临床资料,分析其诊断过程、治疗方案和疾病转归。结果 5例患者中,男4例,女1例,年龄14～29岁,其中3例同期确诊AL与HLH。5例患者确诊HLH时均有发热、脾大、外周血两系或三系减低、凝血功能异常、血清铁蛋白增高、外周血EB病毒阴性,3例可溶性CD25 (sCD25)增高,3例自然杀伤细胞(NK细胞)活性降低,3例家族性噬血相关基因阳性或蛋白表达,1例骨髓见噬血细胞,1例三酰甘油升高,1例纤维蛋白原降低。3例于解放军总医院第一医学中心初治患者经白血病化疗达缓解,HLH得到有效治疗,并有1例完成了骨髓移植;1例诱导缓解后复发,患者放弃治疗;1例缓解后未行移植,并发其他肿瘤。1例诱导化疗失败并发HLH,标准治疗疗效不理想。1例诱导缓解后,骨髓抑制期并发...