膦丝菌素乙酰转移酶的表达及单克隆抗体制备

目的 表达有生物活性的膦丝菌素乙酰转移酶(PAT),制备PAT蛋白单克隆抗体(mAb).方法 通过PCR克隆bar基因编码区全长,将bar基因与原核表达载体pET28a(+)连接,构建重组质粒pET28-bar并转化大肠杆菌菌株BL21 (DE3),经IPTG诱导目的蛋白表达,利用镍离子亲和层析纯化PAT蛋白,分析PAT蛋白活性.免疫BALB/c小鼠,取免疫后的小鼠脾脏与Sp2/0细胞融合,经间接ELISA筛选分泌抗PAT蛋白抗体杂交瘤细胞.结果 在大肠杆菌中以可溶形式表达出重组PAT蛋白,纯化的重组PAT蛋白具有乙酰转移酶活性,制备了9株抗PAT蛋白mAb.结论 表达的PAT蛋白可以用于除草剂解除剂研究,制备的mAb可能用于转基因产品的检测研究.     

PBOO对豚鼠膀胱卡哈尔间质细胞形态结构的影响

目的探讨豚鼠膀胱流出道梗阻(PBOO)对膀胱卡哈尔间质细胞(ICC)形态结构的影响。方法建立雌性豚鼠PBOO模型,并根据尿动力学检测结果将模型分为PBOO后逼尿肌不稳定(DO)组和PBOO后逼尿肌稳定(DS)组,以假手术组作为对照,饲养4周后取膀胱组织,制成全层组织铺片和冰冻组织切片,c-kit免疫荧光染色分别观察各组膀胱肌层和黏膜下ICC的形态和分布情况。结果PBOO4周后,DO组豚鼠膀胱出现排尿频率、排尿压力的增加(n=12,P<0.05),并且观察到明显的储尿期膀胱不稳定收缩。对照组、DS组和DO组豚鼠膀胱均观察到c-kit染色阳性且呈典型长梭形有突起的ICC,主要分布于平滑肌肌束间和黏膜下层;在DO组豚鼠的膀胱中c-kit染色阳性的ICC分支突起增加且互相连接呈网络状,而在对照组和DS组中ICC呈散在分布,细胞之间联系较松散。结论在PBOO所致DO豚鼠膀胱中ICC发生了形态和结构的变化,相互之间连接呈网络状,ICC的形态和结构的变化可能是逼尿肌不稳定的重要发病基础。     

三维塑形个体化颅骨修补材料的临床应用

目的探讨三维塑形个体化颅骨修补材料的临床应用价值。方法回顾性分析91例颅骨缺损患者的临床资料,其中普通钛网颅骨修补术43例,三维塑形钛网个体化成形颅骨修补术48例,比较两组患者术后外观、手术时间、手术费用及术后并发症发生率。结果三维塑形个体化成形颅骨修补术组较普通钛网颅骨修补术组外观佳;手术时间短,手术费用低,并发症少,差异均有高度统计学意义（均P〈0.01）。结论三维塑形钛网个体化成形在颅骨修补手术中具有重要临床应用价值。     

牵张负荷对豚鼠膀胱ICCs细胞内钙波的影响

目的 探讨牵张负荷对豚鼠膀胱起搏细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)兴奋性的影响.方法 胶原酶消化豚鼠膀胱,于特制的牵张培养皿中体外培养膀胱起搏细胞,激光共聚焦技术检测Fluo-4负载的起搏细胞在牵张负荷下Ca2 信号的变化.结果 以豚鼠膀胱组织铺片及体外培养细胞中观察到c-kit染色阳性及长梭形有突起的细胞鉴定为膀胱起搏细胞,即ICCs细胞.细胞于牵张膜上培养4～5 d后,予Fluo-4钙负载染色,激光共聚焦下检测,无应力状态时,ICCs细胞可观察到周期性的"钙波",且其平均荧光强度显著强于平滑肌细胞(P＜0.05).当牵张膜被动拉伸延长20%时,ICCs细胞先于平滑肌细胞发生钙波增强现象.结论 静息状态下ICCs细胞可出现周期性钙波,牵张负荷可兴奋ICCs细胞.     

牵张负荷对大鼠膀胱ICCs细胞数量及c-kit表达的影响

目的 探讨牵张负荷条件对膀胱Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)数量及c-kit蛋白表达变化的影响,阐明牵张负荷对膀胱ICCs细胞兴奋性的调控作用.方法 构建大鼠不稳定逼尿肌模型,以光镜计数及免疫组化法检测牵张负荷下逼尿肌稳定组和逼尿肌不稳定组与正常对照组膀胱ICCs细胞数量及酪氨酸激酶受体(c-kjt)在蛋白水平表达的差异.结果 逼尿肌稳定组和逼尿肌不稳定组ICCs细胞数量与c-kit表达量较正常对照组均有增高(P＜0.01),逼尿肌不稳定组较稳定组升高显著(P＜0.01).结论 牵张负荷对ICCs细胞有调控作用;ICCs细胞数量及c-kit表达增多可能是其机制之一.     

PBOO对豚鼠膀胱卡哈尔间质细胞形态结构的影响

目的探讨豚鼠膀胱流出道梗阻（PBOO）对膀胱卡哈尔间质细胞（ICC）形态结构的影响。方法建立雌性豚鼠PBOO模型。并根据尿动力学检测结果将模型分为PBOO后逼尿肌不稳定（DO）组和PBOO后逼尿肌稳定（DS）组,以假手术组作为对照,饲养4周后取膀胱组织,制成全层组织铺片和冰冻组织切片,c-kit免疫荧光染色分别观察各组膀胱肌层和黏膜下ICC的形态和分布情况。结果PBOO4周后,DO组豚鼠膀胱出现排尿频率、排尿压力的增加（n=12,P〈0.05）,并且观察到明显的储尿期膀胱不稳定收缩。对照组、DS组和DO诅豚鼠膀胱均观察到c-kit染色阳性且呈典型长梭形有突起的ICC,主要分布于平滑肌肌束间和黏膜下层;在DO组豚鼠的膀胱中c-kit染色阳性的ICC分支突起增加且互相连接呈网络状,而在对照组和DS组中ICC呈散在分布,细胞之间联系较松散。结论在PBOO所致DO豚鼠膀胱中ICC发生了形态和结构的变化,相互之间连接呈网络状,ICC的形态和结构的变化可能是逼尿肌不稳定的重要发病基础。     

机械牵张对豚鼠膀胱组织Cajal间质细胞形态学及兴奋性的影响

目的 探讨机械牵张对豚鼠膀胱组织Cajal间质细胞(ICC)形态及兴奋性的影响.方法 建立雌性豚鼠膀胱颈部分梗阻(PBOO)模型作为实验组.并设假手术组作为对照.术后4周取膀胱组织制片,免疫荧光染色观察2组ICC形态和分布情况;胶原酶消化豚鼠膀胱制细胞悬液,免疫荧光标记,流式细胞仪检测2组c-kit阳性细胞比率.在弹性硅胶膜七原代培养膀胱ICC,利用Fluo-4钙荧光指示剂检测机械牵张对ICC钙信号的影响.结果 2组豚鼠膀胱组织铺片均可见c-kit染色阳性典型长梭形有突起的ICC,主要分布于平滑肌肌束间;PBOO组膀胱平滑肌间质增厚,c-kit染色阳性细胞数量及其突起明显增多,互相连接呈网络状;PBOO组c-kit阳性细胞比率为(6.7±1.7)%,显著高于对照组的(1.0±0.5)%,差异有统计学意义(P＜0.05).体外培养的ICC可检测到自发性钙波,机械牵张刺激可诱导ICC发生钙波增强现象.结论 机械牵张可诱导膀胱ICC兴奋性增强;PBOO膀胱组织中ICC数量及相互联系显著增多.ICC可能参与了膀胱牵张感受功能并在长期牵张应力负荷下发生一定的适应性改变.     

牵张负荷对大鼠膀胱Cajal间质细胞超微形态及c-kit基因表达影响

目的 通过研究膀胱Cajal间质细胞(Interstitial cells of cajal,ICCs)超微形态及c-kit基因水平变化,阐明牵张负荷对膀胱Cajal细胞兴奋性的调控作用.方法 结扎膀胱颈,构建大鼠膀胱出口部分梗阻致逼尿肌过度活动模型,通过扫描电镜方法观察牵张负荷条件下逼尿肌过度活动组与正常对照组膀胱ICCs细胞超微形态变化,观察牵张负荷条件下逼尿肌稳定组和逼尿肌过度活动组与正常对照组膀胱ICCs细胞酪氨酸激酶受体(c-kit)在基因水平表达差异.结果 逼尿肌过度活动组ICCs细胞形态和c-kit基因水平表达最较正常对照组有明显改变(P＜0.01).结论 牵张负荷对ICCs细胞有调控作用,可能的作用机制在于改变ICCs细胞形态及上调c-kit表达.     

防范医疗纠纷的几点思考

医疗纠纷是医患间或患院间因医疗事件而发生的矛盾和矛盾激化的表现形式。各种迹象表明,医疗纠纷对当事者等多方构成的危害不言而喻,如医师名誉受损、医院秩序混乱、患者痛苦增加、患属违法闹事、干扰他人就医等。如何降低医疗纠