急性淋巴细胞白血病的免疫分型和基因的研究

目的:回顾性分析30例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者的免疫分型,融合基因及基因突变的分子生物学检测结果,并探讨其与临床治疗效果及预后的关系。方法:选取哈尔滨市第一医院血液肿瘤研究中心2015年8月到2016年6月经过骨髓细胞形态学、免疫表型、细胞遗传学、分子生物学等检查确诊的ALL患者30例,按照FAB标准分类,27例为B系ALL,3例为T系ALL。分析ALL患者白血病细胞膜表面及胞浆内分化抗原,并且对所有患者都进行43种融合基因定性筛查(BCR-ABL,AML1-ETO,PML-RARα等)和ALL基因突变(IKZF1,TP53,PAX5,JAK1,JAK2,CRLF2,PHF6,NOTCH1,FBXW7,PTEN)的二代测序(NGS)检测。结果:30例ALL患者中男性14例,女性16例,年龄2-74岁,中位年龄11.5岁。30例ALL中B-ALL发病率(90.00%)明显高于T-ALL(10.00%)。27例B-ALL患者主要表达CD19、CD22、CD10和CD34等。CD19和CD22是B-ALL最具有诊断价值的抗原;3例T-ALL主要表达cCD3、CD7、CD10和cTDT等,CD7和cCD3是T-ALL最具有诊断价值的抗原。30例ALL患者的43种融合基因定性筛查发现,BCR-ABL、TEL-AML1、E2A-PBX1、MLL-AF6、MLL-AF4和SIL-TAL融合基因阳性各1例,ALL相关基因突变的NGS检测结果表明,3例B-ALL患者发生TP53突变,1例B-ALL患者发生TET2 I1762V突变;3例患者(2例T-ALL,1例B-ALL)发现NOTCH1基因突变。1个疗程后成人B-ALL的治疗效果(28.57%)明显差于儿童B-ALL(95.00%),截止至2017年7月10日儿童B-ALL的生存率明显优于成人B-ALL,其差异都具有显著性意义。结论:白血病免疫分型技术及分子生物学检测技术在白血病的诊断、治疗方案的选择及疗效评价方面具有重要指导作用,是骨髓细胞形态学诊断的补充。     

TFAR19蛋白协同米非司酮对前列腺癌PC-3M细胞凋亡的影响

目的初步探讨TFAR19协同米非司酮(MIF)对前列腺癌PC-3M细胞凋亡的影响。方法构建TFAR19真核表达载体,用脂质体介导的方法转染PC-3M细胞。MTT法检测5、10、20、50和100μmol·L-1MIF作用于前列腺癌PC-3M细胞24~96h的吸光度(A)值。在转染TFAR19的细胞中加入20mol·L-1MIF培养24、48h,MTT比色法检测细胞增殖,原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡率,透射电镜进一步观察细胞超微结构的改变。结果构建了PCI-neo-TFAR19真核表达载体并在转染的PC-3M细胞中得到了瞬时表达。MTT实验表明,与对照组相比,5、10μmol·L-1MIF组的A值差异无统计学意义(P>0.05),20、50和100μmol·L-1MIF组的A值差异有统计学意义(P<0.01),MIF对前列腺癌PC-3M细胞的抑制作用呈时间、剂量依赖性;转染PCI-neo-TFAR19并加入20 mol·L-1MIF后,与对照组及单独应用MIF组相比,细胞生长明显受到抑制(P<0.01),细胞凋亡率明显增加(P<0.01),透射电镜观察到典型的细胞凋亡特征(细胞体积缩小,核皱缩、碎裂,染色质呈块状边集等)。结论TFAR19蛋白能够协同米非司酮促进前列腺癌PC-3M细胞凋亡,有望成为前列腺癌的辅助治疗药物。     

TFARl9蛋白协同米非司酮对前列腺癌PC-3M细胞凋亡的影响

目的初步探讨TFARl9协同米非司酮（MIF）对前列腺癌PC-3M细胞凋亡的影响。方法构建TFARl9真核表达载体，用脂质体介导的方法转染PC-3M细胞。MTT法检测5、10、20、50和100μmol&#183;L^-1 MIF作用于前列腺癌PC-3M细胞24～96h的吸光度（A）值。在转染TFARl9的细胞中加入20mol&#183;L^-1 MIF培养24、48h，MTT比色法检测细胞增殖，原位末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡率，透射电镜进一步观察细胞超微结构的改变。结果构建了PCI-neo-TFARl9真核表达载体并在转染的PC-3M细胞中得到了瞬时表达。MTT实验表明，与对照组相比，5、10μmol&#183;L^-1 MIF组的A值差异无统计学意义（P〉0．05），20、50和100μmol&#183;L^-1MIF组的A值差异有统计学意义（P〈0．01），MIF对前列腺癌PC-3M细胞的抑制作用呈时间、剂量依赖性；转染PCI-neo-TFARl9并加入20mol&#183;L^-1 MIF后，与对照组及单独应用MIF组相比，细胞生长明显受到抑制（P〈0．01），细胞凋亡率明显增加（P〈0．01），透射电镜观察到典型的细胞凋亡特征（细胞体积缩小，核皱缩、碎裂，染色质呈块状边集等）。结论TFARl9蛋白能够协同米非司酮促进前列腺癌PC-3M细胞凋亡，有望成为前列腺癌的辅助治疗药物。     

郝智治疗脑卒中后肌张力增高的疗效观察

目的观察郝智治疗脑卒中后肌张力增高的疗效及不良反应。方法脑卒中后合并肌张力增高者76例,随机分为治疗组和对照组。治疗组给予郝智口服,对照组给予安定口服,每周评定疗效1次,共观察两个月。肌张力测定采用Ashworth评分方法。结果治疗组38例,显进15例,进步17例,无效6例;对照组38例,显进1例,进步6例,无效31例。治疗组中,4例头晕,2例行走不稳,1例胃痛,1例全身不适,经减量及对症治疗好转,未影响治疗。结论郝智治疗脑卒中后肌张力增高安全、有效。     

靶向ADAM17基因siRNA对前列腺癌PC-3细胞增殖能力的影响

目的:探讨靶向抑制ADAM17基因对雄激素非信赖性前列腺癌PC-3细胞增殖的影响。方法:应用ADAM17 siRNA转染PC-3细胞后,通过RT-PCR、Western印迹方法分别检测ADAM17 mRNA和蛋白表达变化;MTT、BrdU掺入法检测下调ADAM17对PC-3细胞的增殖和DNA合成能力的影响;流式细胞术检测ADAM17 siR-NA对PC-3细胞细胞周期的影响;Western印迹检测下调ADAM17对PC-3细胞增殖相关基因表达的影响。结果:两对ADAM17 siRNAs均可有效地降低PC-3细胞ADAM17 mRNA和蛋白的表达;MTT结果显示与对照组(0.80±0.51)相比,两对ADAM17 siRNAs均可显著抑制细胞的生长(0.43±0.57、0.44±0.64,P均<0.05);Br-dU掺入实验显示与对照组(0.79±0.72)相比,ADAM17 siRNAs均能显著下调DNA的合成能力(0.48±0.43、0.54±0.59,P<0.05);流式细胞术结果显示,与对照组(41.38±1.53)%相比,ADAM17 siRNAs可显著增加G1期细胞数量[(61.83±2.41)%、(59.78±1.92)%,P均<0.05]、降低S期细胞数量[从(33.51±1.47)%减少到(23.64±2.56)%、(25.24±1.86)%,P均<0.05],同时伴随着cyclin D1蛋白的表达下降而p21蛋白的表达升高。结论:ADAM17 siRNA可以通过下调cyclin D1、上调p21的表达而抑制前列腺癌PC-3细胞增殖,ADAM17可能成为前列腺癌基因治疗的靶点。     

醋酸奥曲肽在肝硬化合并上消化道出血临床治疗中的应用评价

目的:观察并分析醋酸奥曲肽在肝硬化合并上消化道出血临床治疗中的应用效果.方法:在本院2014年6月-2017年1月间接诊的肝硬化合并上消化道出血患者中随机选取80例纳入本次研究,并对80例病患实施分组治疗,对照组采取生长抑素进行治疗,观察组则采取醋酸奥曲肽进行临床治疗,各40例.结果:观察组临床治疗总有效率约为95.0%,较之对照组提高程度显著(P<0.05).比较两组止血时间、不良反应发生几率,结果提示观察组有显著缩短及降低(P<0.05).结论:使用醋酸奥曲肽治疗肝硬化合并上消化道出血可有效提高临床治疗效果,且更为安全,故值得推广.     

低剂量亚砷酸及维甲酸方案对儿童骨髓增生异常综合征p15INK4B基因的影响

目的 探讨低剂量亚砷酸及维甲酸双诱导方案对骨髓增生异常综合征(MDS)患儿p15INK44B基因表达的影响及患儿p15INK4B基因甲基化水平的变化.方法 11例MDS患儿接受低剂量亚砷酸及维甲酸双诱导方案治疗,应用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法检测治疗前后p15INK4B基因的表达,应用亚硫酸氢钠修饰及实时荧光定量PCR方法检测p15INK4B基因的甲基化水平.结果 11例MDS患儿经过双诱导方案治疗后,9例获益.治疗后10例患儿p15INK4B基因表达水平显著升高,治疗前后p15INK4B基因甲基化水平分别为(1.68±0.58)％、(1.44±0.65)％,二者差异无统计学意义(t=-0.885,P＞0.05).结论 低剂量亚砷酸及维甲酸双诱导方案治疗儿童MDS疗效较好,该方案的作用机制可能与p15INK4B基因表达升高有关,但p15INK4B基因表达升高与去甲基化无相关性.     

荧光原位杂交及荧光定量PCR技术检测急性早幼粒细胞白血病患者PML-RARα融合基因比较

 目的　比较荧光原位杂交（FISH）及荧光定量PCR技术对急性早幼粒细胞白血病（APL）患者PML-RARα融合基因检测的灵敏度和特异度。方法　选取75例APL患者,同时应用FISH及荧光定量PCR方法检测患者PML-RARα融合基因的表达情况。结果　共检测初发与复发或缓解患者88例次,总相符率为96.59 %;检测初发患者14例,相符率为100 %;检测复发或缓解患者74例次,相符率为95.95 %;检测干细胞来源的标本6例次,相符率为100 %。结论　对于初发的APL患者,FISH与荧光定量PCR的灵敏度相同,FISH技术操作更为简单,省时直观。对于残留的检测,FISH的灵敏度不如荧光定量PCR。     

血液病患者巨细胞病毒和EB病毒定量检测的临床价值

目的 评价实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）对血液系统疾病患者巨细胞病毒（CMV）和EB病毒（EBV）感染的早期诊断价值.方法 应用实时荧光定量PCR检测271例血液系统疾病患者和28名健康对照者血液中CMV DNA和EBV DNA的含量.结果 28名健康对照者CMV DNA和EBVDNA均阴性.271例患者中147例检测EBV,阳性率为24.5％（36/147）;124例检测CMV,阳性率为4.8％（6/124）,DNA介于102～ 106基因拷贝/ml,治疗有效者EBV DNA和CMVDNA均迅速下降,1～3周后转阴.结论 实时荧光定量PCR动态监测血液系统疾病患者CMV DNA和EBV DNA水平对CMV和EBV感染的早期诊断和疗效判断具有重要意义.     

肿瘤坏死因子α转化酶胞内区诱饵质粒的构建及鉴定

目的:构建用于酵母双杂交系统的诱饵质粒载体pGBKT7-TACEc(肿瘤坏死因子α转化酶胞内区),并检测其是否具有自身激活及毒性作用。方法:从BALB/c雄性小鼠睾丸组织提取总RNA,用RT-PCR方法获得TA-CEc,克隆于pGBKT7载体上,酶切鉴定及序列分析,并检测pGBKT7-TACEc在酵母双杂交系统中的自激活和毒性作用。结果:实验成功构建了诱饵质粒载体pGBKT7-TACEc,并证明其在酵母双杂交系统中无自激活及毒性作用。结论:pGBKT7-TACEc可应用在酵母双杂交系统中,寻找小鼠睾丸cDNA文库中与TACEc相互作用的蛋白质,为筛选小鼠睾丸中与TACEc相互作用的蛋白奠定了重要基础。