脉冲磁场逆转乳腺癌细胞多药耐药性的作用研究

目的：研究脉冲磁场（Pulsed Magnetic Fields，PMF）对乳腺癌耐药细胞株MCF-7／ADR的逆转作用。方法：采用MTT实验方法，分别检测不同频率及不同磁场强度条件照射下的MCF-7／ADR细胞的耐药倍数和逆转倍数。用流式细胞术检测经脉冲磁场照射后MCF-7／ADR细胞中Rh123药物蓄积量变化。用流式免疫荧光技术检测膜经脉冲磁场照射后MCF-7／ADR细胞膜表面P-糖蛋白（P-gP）和多药耐药相关蛋白（MRP1）表达情况。采用半定量RT—PCR（逆转录-聚合酶链反应）检测经脉冲磁场照射后MCF-7／ADR细胞中MDR1和MRP1基因表达情况。建立人乳腺癌耐药细胞株MCF-7／ADR裸鼠移植瘤模型，通过测量肿瘤体积及重量观察PMF对肿瘤细胞的体内逆转作用。结果：脉冲磁场能有效逆转乳腺癌耐药细胞株MCF-7／ADR对阿霉素产生的耐药性（P〈0．01），其中110Hz，40mT照射条件逆转效果最好，可达5倍左右；脉冲磁场能提高罗丹明123在细胞内的蓄积量，其中110Hz，40mT照射奈件下可有效提升20％左右药物蓄积量；细胞经脉冲磁场照射后，膜表面耐药蛋白P糖蛋白表达量明显下降，MRP1蛋白表达量变化不明显；编码上述两种耐药蛋白的耐药基因表达量均明显下降；此外，脉冲磁场联合阿霉素可有效逆转裸鼠移植瘤的生长增值（P〈0．01）。结论：PMF具有逆转体外和体内乳腺癌细胞多药耐药性的作用。     

9401号药对小鼠皮肤放射反应试验

研究目的：烟酰胺是近年来国内外研究较多的放射增敏剂,经研究发现,它对体外培养的恶性肿瘤细胞以及对人类恶性肿瘤移植瘤均有明显的放疗增敏作用,而且毒性低。9401号是以烟酰胺为母体化合物合成的烟酰氨基酸类化合物,其放射增敏作用比母体化合物烟酰胺效果更好,而且毒性更低。为了观察9401号对正常组织是否有增敏作用,我们研究了9401号对小鼠皮肤的放射增敏作用。材料与方法：实验动物：选用ICR小鼠,由中国医学科学院实验动物研究所提供,体重18—22g。许可证号：SCXK京2004—0001。药物：9401号（N-烟酰基-亚氨基二乙酸）,为白色粉状晶体,含量大于99％,熔点182～191℃。由中国医学科学院放射医学研究所药物室合成。照射方法：照射采用。Coγ射线垂直照射,剂量率81．79cGy／min。一个剂量点一次照射4只小鼠,将小鼠放入特制的有机玻璃模型内固定,仅照射小鼠后腿,其它部位用铅快保护。采用Denekamp9单次照射法。实验动物分组：实验分为单纯照射组和加药照射组。动物给药剂量为1000mg／kg体重（半数致死量的四分之一）,药物浓度为100mg／ml,于照射前2-3小时一次腹腔给药。照射剂量分别为1Gy,2Gy,3Gy,4Gy,5Gy和6Gy,每-剂量组8只小鼠。     

用流式细胞仪检测脉冲磁场对HL-60细胞程序性死亡及周期的影响

目的：研究脉冲磁场（ＰＥＭＦ）对人早幼粒白血病（ＨＬ－６０）细胞程序性死亡（ＰＣＤ）及周期的影响。方法：以ＨＬ－６０细胞为研究对象，用流式细胞仪进行分析。结果：以ＰＥＭＦ频率为２５０Ｈｚ，场强为５ＭＴ照射ＨＬ－６０细胞，流式细胞仪分析的结果表明，ＰＣＤ呈时间依赖性增加。作用后８ｈ，ＰＣＤ增加到３８．８６％，明显高于对照组。ＰＥＭＦ对ＨＬ－６０细胞周期有影响，随着磁场作用后时间的延长，Ｇ０／Ｇ１期细胞逐渐减少，Ｇ２／Ｍ期细胞逐渐增加。磁场作用后８ｈ，Ｇ０／Ｇ１期细胞减少到４７．４４％，磁场作用后１６ｈ，Ｇ２／Ｍ期细胞增加到４６．５５％。结论：ＰＥＭＦ诱发ＨＬ－６０细胞ＰＣＤ可能与ＰＥＭＦ改变ＨＬ－６０细胞周期有关。     

脉冲磁场对γ射线诱导HL-60细胞凋亡的影响

细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）或程序性细胞死亡（ＰＣＤ），是一种不同于坏死且受基因指导的主动性细胞自我消亡的过程。许多外环境因素都可诱发细胞凋亡，如电离辐射［１１］等。发生凋亡的细胞显示出一系列特征性变化，诸如：染色质凝聚，核固缩，形成凋亡小体，染色...     

脉冲电磁场对大鼠破骨细胞功能分子的影响

目的研究脉冲电磁场(puslsed electromagnetic fields,PEMFs)对大鼠破骨细胞的作用。方法取10w龄雌性SD大鼠随机分为三组:PEMFs组、Control组和Sham组;其中PEMFs组、Control组进行双侧卵巢切除手术,Sham组不切除卵巢。术后12w对PEMFs组大鼠进行PEMFs作用(70Hz,2mT),Control组和Sham组不进行PEMFs作用。作用结束后,取大鼠股骨骨髓,进行体外破骨细胞诱导培养。7天后分别进行破骨细胞的抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)检测和整合素αvβ3、NF-κB受体激活子(receptor activator of NF-κB,RANK)、组织蛋白酶K(cathepsin K)免疫荧光染色检测。结果经PEMFs作用后,TRAP检测显示破骨细胞形态;免疫荧光染色显示阳性破骨细胞也明显减少。结论 PEMFs对破骨细胞功能分子的表达有抑制作用,提示PEMFs作用可以抑制SD大鼠破骨细胞的骨吸收活性。     

脉冲磁场对高三尖杉酯碱诱导白血病细胞凋亡的影响

目的观察脉冲磁场(PMF)对高三尖杉酯碱(HHT)诱导白血病细胞凋亡的影响.方法以人早幼粒白血病细胞(HL-60)为实验对象,采用细胞计数、细胞形态学及流式细胞仪进行分析.结果HHT可诱导HL-60细胞凋亡,PMF能明显增加HHT诱导HL-60细胞凋亡.结论PMF通过对HL-60细胞周期的影响促进HL-60细胞凋亡从而增加对化疗药物的敏感性,表明PMF对治疗白血病具有潜在的应用价值.     

脉冲电磁场对大鼠成骨细胞作用的研究

目的:研究脉冲电磁场(PEMFs)对大鼠成骨细胞的作用。方法:取新生SD大鼠头盖骨,通过骨组织块培养法分离、培养成骨细胞。取传代第3代细胞分为5组,1-70组、2-70组、3-70组、4-70组、对照组,其中前4组为作用组,接受频率为70Hz,峰值磁场分别为1、2、3、4mT的PEMFs作用,对照组不接受PEMFs作用。按照分组剂量进行离体PEMFs作用(0.5h/d,连续作用4d),作用结束后,对各组分别进行细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,核结合因子α1(cbfα1)表达,体外成骨能力指标—骨结节形成能力检测。结果:经PEMFs作用后,与对照组相比,成骨细胞ALP活性降低,cbfα1表达增多,骨结节数量显著增多。结论:PEMFs作用成骨细胞可促进成骨细胞功能分化,增强成骨细胞的细胞外基质矿化。     

放射增效剂9402号对小鼠小肠隐窝上皮细胞增敏作用的研究

研究目的：9402号是以烟酰胺为母体化合物合成的烟酰氨基酸类化合物，其放射增敏作用比母体化合物烟酰胺效果更好，而且毒性更低。为了观察9402号对正常组织是否有增敏作用，我们研究了9402号对小鼠小肠隐窝上皮细胞的增敏作用。材料与方法：实验动物：昆明种小鼠，由中国医学科学院实验动物研究所提供，体重18-22g。许可证号：SCXK京2004—0001。药物：9402号药（N-烟酰基-L-天门冬氨酸），为白色块状晶体，含量大于99％，熔点182～191℃。由中国医学科学院放射医学研究所药物室合成。照射条件：60Coγ射线，全身照射，剂量率81．79cGy／min。给药及实验分组：实验分为单纯照射组，加药照射组和正常对照组。     

脉冲磁场对多药耐药细胞K562/ADR的逆转作用

目的:研究脉冲磁场(PMF)对多药耐药(MDR)肿瘤细胞K562/ADR的逆转作用及机制。方法:MTT法测定敏感株K562/S和耐药株K562/ADR对多柔比星(ADR)的IC50,观察PMF对肿瘤细胞增殖的影响。测定不同频率PMF照射的K562/ADR耐药细胞株对ADR的IC50,分析PMF的逆转效果。用流式细胞术(FCM)检测细胞内ADR的浓度。结果:K562/ADR细胞的耐药倍数为29.36,PMF对耐药株肿瘤细胞增殖无影响。相同磁场强度、不同频率的PMF对耐药株K562/ADR的IC50影响不同,在相同的时间里,70 Hz的PMF影响作用最明显。70 HzPMF处理的K562/ADR细胞中药物浓度高于对照组。结论:PMF可通过提高细胞内的药物浓度,对肿瘤细胞K562/ADR的MDR具有逆转作用;逆转作用的大小与脉冲磁场的频率有关,低频率的PMF比高频率的PMF的逆转效果更明显。     

9401号对ICR小鼠肝癌（H22）放射增敏效应的研究

研究目的：9401号药是以烟酰胺为母体化合物合成的烟酰胺基酸类化合物,经研究发现,9401号药对体外培养的恶性肿瘤细胞有明显的放射增敏作用。本文采用动物肿瘤模型将进-步观察9401号药的放射增敏效应。材料与方法：动物及模型：选用ICR小鼠,鼠龄7—8周,体重18—20克,雌雄各半。瘤株为移植性实验肿瘤肝癌（H22）。常规方法将瘤体从荷瘤小鼠体内取出,制成瘤细胞悬液,按细胞数1×10^6接种于小鼠右腿外侧皮下,每鼠0．2毫升,待肿瘤生长至250±50mm3时开始分组试验,一般移植后7—10天即可。药物：9401号（N-烟酰基-亚氨基二乙酸）,为白色粉状晶体,含量大于99％,熔点182-191℃。由中国医学科学院放射医学研究所药物室合成。动物给药剂量为1000mg／kg体重（半数致死量的四分之一）,药物浓度为100mg／ml,于照射前2—3小时-次腹腔给药。照射方法：照射采用。Coγ射线垂直照射,剂量率81．79cGy／min。一个剂量点一次照射4只小鼠,将小鼠放入特制的有机玻璃模型内固定,仅照射荷瘤后腿,其它部位用铅块保护。