结核分支杆菌LprG基因的克隆、表达及纯化

目的 在大肠杆菌中重组表达MTB LprG基因,纯化回收,为进一步研究其在结核病诊断中的价值奠定基础.方法 从MTB H37Pv基因组中PCR扩增出MTB LprG基因,克隆到pEASY T1载体中,经序列测定后,再亚克隆到表达载体pET28a( )中,转化入E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,Western-blot分析鉴定,采用Ni-NTA柱纯代LprG蛋白.结果 扩增产物序列无突变,重组表达载体pET28a( )-LprG酶切鉴定正确,LprG蛋白在E.coli BL21(DE3)中的表达量约占菌体总蛋白的38%左右,主要以可溶性形式存在,Western-blot分析在27 kDa处见到目的蛋白条带,经Ni-NTA柱纯化后,得到纯度较高的该蛋白.结论 构建了LprG基因的重组表达载体,获得了纯化的蛋白,为以后研究奠定了基础.     

人CD4+CD25+调节性T细胞系的建立与功能分析

目的：建立可在体外长期培养的人CD4^ CD25^ 调节性T细胞系并研究其免疫生物学特性。方法：用流式分选的方法从健康人外周血淋巴细胞中得到CD4^ CD25^ T细胞，并对其进行体外长期培养、扩增；淋巴细胞转化实验分析其免疫抑制功能，流式细胞法分析其表型。结果：经对人CD4^ CD25^ T细胞的长期培养扩增，获得具有免疫抑制功能的调节性T细胞系。该T细胞系对经TCR的刺激不敏感，且能抑制同一来源或同种异型CD4^ CD25^ T细胞的活化，大剂量IL－2可以逆转其抑制功能。长期培养的CD4^ CD25^ T细胞，膜表面CD25和CTLA－4分子持续高表达，而CD4^ CD25^ T细胞CD25和CTLA－4分子的表达呈周期性变化。结论：将CD4^ CD25^ T细胞体外扩增培养成系，其功能和表型与同一来源的CD4^ CD25^ T细胞显著不同。     

结核分枝杆菌LprG基因的克隆、表达

目的构建结核分枝杆菌LprG基因的融合表达载体,在大肠杆菌中进行表达,为研究其在结核病诊断中的作用奠定基础。方法采用聚合酶链反应(PCR)从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出LprG基因,克隆到pEASY T1中,序列测定正确后,再亚克隆到融合表达载体PET28a(+)中,转化入大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达。结果获得结核分枝杆菌LprG蛋白,凝胶薄层扫描分析表达量在38%左右,主要以可溶性形式存在。结论获得了重组结核分枝杆菌LprG蛋白,为以后研究奠定了基础。     

FGL2拮抗新型冠状病毒鼠株MA17感染北大核心CSCD

目的通过新冠病毒小鼠适应性毒株MA17感染老年WT C57BL/6和Fgl2基因敲除小鼠,鉴定Fgl2基因敲除是否可以拮抗MA17毒株感染。方法使用MA17毒株感染老年WT小鼠和Fgl2基因敲除小鼠,记录生存率及体质量变化,通过H&E染色、免疫组化及Masson染色鉴定感染小鼠的炎性浸润及纤维化形成。结果与WT对照小鼠相比,Fgl2基因敲除小鼠表现出显著的生存率延长,体质量无明显下降,肺组织纤维蛋白原沉积减少以及肺纤维化显著改善。结论Fgl2基因敲除小鼠可以拮抗新型冠状病毒鼠株MA17感染引起的血栓及纤维化形成。