超重人群皮下和网膜脂肪组织中脂联素基因表达的研究

目的:探讨脂联素(APN)在皮下(SC)和网膜(OM)脂肪组织中的mRNA表达水平与肥胖的关系。方法:实时荧光定量PCR法检测48例超重[体质量指数(BMI)≥25kg/m2)]和40例正常体质量人群(BMI<25kg/m2)腹部SC和OM脂肪组织中APN mRNA的表达,并测定血糖、胆固醇和HOMA-IR等生化指标。结果:在整体人群中,OM脂肪组织APN mRNA表达量均明显高于SC脂肪组织(P<0.05);OM脂肪组织APN mRNA表达量与BMI、腰臀比(WHR)和胆固醇(TC)水平呈负相关(r分别为-0.249、-0.143、-0.148,P<0.05);SC脂肪组织APN mRNA表达量与BMI、WHR、TC和三酰甘油(TG)水平呈负相关(r分别为-0.281、-0.180、-0.247、-0.172,P<0.05),并与同一个体的OM脂肪组织APN mRNA表达量呈正相关(r=0.192,P<0.05)。结论:APN的基因表达量内脏高于外周,提示循环APN可能主要来源于内脏脂肪组织。     

原代培养的人皮下和网膜前脂肪细胞分化特性比较

目的探讨原代培养的人皮下和网膜前脂肪细胞在体外以无血清培养基诱导分化条件下细胞特性的差别。方法选择8例行择期电切开手术的健康成年女性腹部皮下和网膜分离前脂肪细胞,进行原代培养。细胞在无血清培养基诱导分化的条件下体外培养14d。观察分化后不同部位来源细胞的细胞内脂质含量和前脂肪细胞分化标志物——甘油-3-磷酸脱氢酶的活性。细胞的胰岛素敏感性通过葡萄糖消耗试验进行测定。结果诱导分化后,人皮下和网膜前脂肪细胞的胰岛素敏感性指标葡萄糖消耗量和细胞晚期分化指标G3PDH活性差异均无统计学意义（P〉0．05）。网膜来源的前脂肪细胞分化后脂质含量指标油红O高于皮下来源细胞（t=2．506,P=0．025）。结论在同等分化条件下,网膜前脂肪细胞较之皮下来源细胞的脂肪含量增加,提示前脂肪细胞的分化存在部位特异性。     

pcDNA3.1/hTSHR_(1043～1354 bp)重组体的构建及在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

目的构建重组体pcDNA3.1/hTSHR1043～1354bp及在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)表达hTSHR膜外区氨基酸314～418蛋白分子。方法提取人正常甲状腺组织总RNA,反转录后进行聚合酶链反应(PCR),将纯化的扩增产物hTSHR1043～1354bp与表达载体pcDNA3.1连接后转化TOP10E.coli感受态菌。经PCR、HindⅢ酶切和核苷酸序列测定方法鉴定插入序列和方向正确的重组质粒转染CHO细胞,并用Westernblot方法鉴定表达的蛋白。结果PCR扩增得到hTSHR膜外区C端312bp的基因片段hTSHR1043～1354bp。该片段与表达载体pcDNA3.1的连接后转化TOP10E.coli感受态菌。重组质粒经PCR、HindⅢ酶切和核苷酸序列测定方法鉴定证实hTSHR1043～1354bp片段插入序列和方向正确。重组质粒转染的CHO细胞裂解液经Westernblot可以检测出15900的蛋白条带,与预期的蛋白相对分子质量相符。结论成功构建了重组体pcDNA3.1/hTSHR1043～1354bp,其转染CHO细胞后表达159000的目的蛋白(hTSHR氨基酸314～418蛋白片段)。     

替米沙坦对OLETF大鼠自发性2型糖尿病的干预作用

目的：探讨替米沙坦对早期高脂喂养自发性2型糖尿病OLETF大鼠游离脂肪酸（FFA）、空腹血糖（FBG）、胰岛素（FINS）、血清单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）及睾周脂肪组织MCP-1表达的影响。方法：OLETF大鼠30只,8周龄开始高脂喂养,22周龄根据OGTT 2 h血糖和体重将未发生糖尿病的大鼠随机分为替米沙坦组（T）、二甲双胍组（M）和高脂对照组（O）。LETO大鼠12只为对照组（NC）。48周龄检测睾周脂肪组织MCP-1 mRNA的表达,测定血清MCP-1、FFA、FBG、FINS水平,并计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）。结果：MCP-1 mRNA表达量T组（0.20±0.12）、M组（0.17±0.19）分别与O组（1±0.3）比较有统计学意义（P〈0.01）;同时T组血清MCP-1、FFA、FBG及HOMA-IR均明显低于O组（P〈0.05）。结论：替米沙坦可能通过减少脂肪组织MCP-1的表达改善早期高脂喂养OLETF大鼠的胰岛素抵抗,从而起到早期预防糖尿病的作用。     

替米沙坦上调内脏脂肪组织的脂联素表达并改善胰岛素抵抗

目的 探讨替米沙坦对体外原代培养的人前脂肪细胞和OLETF大鼠脂肪组织中脂联素表达以及胰岛素敏感性的影响.方法 提取人腹部皮下和内脏的前脂肪细胞,原代培养并传代后接种于无血清培养基,分为对照组（H-N）、吡格列酮组（H-P）和替米沙坦（H-T）组.葡萄糖消耗试验测定细胞的胰岛素敏感性,实时荧光定量PCR（RT-PCR）技术测定细胞脂联素mRNA的表达,放射免疫法测定培养基上清脂联素的分泌量.4周龄雄性OLETF大鼠28只,初始体重150～180 g.高脂喂养,分为对照组（O-HFD组,10只）、吡格列酮组（O-P组,8只）和替米沙坦组（O-T组,10只）.口服葡萄糖耐量实验和高胰岛素-正糖钳夹实验检测胰岛素抵抗指数和60 ～ 120 min葡萄糖输注速度以测定大鼠胰岛素抵抗水平,RT-PCR和Western blotting技术检测大鼠皮下和内脏脂肪组织脂联素的mRNA和蛋白表达.计量资料均数比较应用单因素方差分析.结果 H-T组和H-P组内脏前脂肪细胞的葡萄糖消耗量较之H-N组明显升高[分别为（5.6±1.6）、（4.4±1.6）、（2.0±0.8）mmol/L,F=20.240,P＜0.05].O-T和O-P组大鼠高胰岛素-正糖钳夹实验得到的60 ～ 120 min葡萄糖输注速度明显高于O-HFD组大鼠[分别为（18±5）、（20±4）、（10±3） mg·kg-1·min-1,F=8.136,P＜0.05].O-T和O-P组大鼠的HOMA胰岛素抵抗指数也显著低于O-HFD组大鼠（分别为10.0±8.6、5.5±2.0、17.8±10.1,F=5.784,P＜0.05）.替米沙坦可降低高脂饲养OLETF大鼠升高的腹围、内脏脂肪系数和血清游离脂肪酸水平,并改善大鼠的空腹高血糖,差别有统计学意义[分别为（24.0±2.0）比（26.5±2.7） cm、5.8％±2.4％比8.6％±2.4％、（2.8±0.7）比（5.3±1.8）μg/L、（10±6）比（15±7） mmoL/L,均P＜0.05].H-T较之H-N组原代培养人前脂肪细胞和O-T较之O-HFD组大鼠脂肪组织脂联素的mRNA表达和蛋白分泌量均明显上调（均P＜0.05）.H-T较之H-P组人内脏脂肪细胞和O-T较之O-P组大鼠内脏脂肪组织脂联素mRNA和蛋白表达水平均升高或有上升的趋势（分别为59.9±2.0比6.0±1.6、1.807±0.297比1.332±0.112、4.43±2.57比1.71±0.57、2.6±0.9比1.9±0.5,均P＜0.05）.结论 替米沙坦具有提高OLETF大鼠与人前脂肪细胞胰岛素敏感性、缓解大鼠的内脏性肥胖和改善大鼠糖脂代谢功能紊乱的作用,并很可能通过上调脂肪尤其是内脏脂肪的脂联素表达来完成.     

hTSHR胞膜外区片段真核表达载体的构建和表达

目的:构建人类促甲状腺激素受体(hTSHR)胞膜外区氨基端的两个片段hTSHRf(aa29 ～100)、 hTSHRe(aa101～278)的真核表达载体pcDNA3.1-hTSHRf和pcDNA3.1-hTSHRe, 并在CHO细胞中进行表达.方法:RT-PCR法从人甲状腺正常组织的cDNA中扩增hTSHRf和hTSHRe,定向插入真核表达载体pcDNA3.1(D)/V5-His-TOPO中, 经酶切、 PCR和测序鉴定后通过脂质体介导转染至CHO细胞中进行表达, RT-PCR扩增转染细胞的cDNA、 Western blot分别鉴定hTSHR在CHO细胞中mRNA和蛋白水平的表达.结果:RT-PCR分别扩增两个片段的阳性克隆株, 所得片段大小与预期一致, 经Western blot鉴定, 相对分子质量(Mr)分别为11900、 23600左右, 与预期的大小相符.结论:真核表达载体pcDNA3.1-hTSHRf和pcDNA3.1-hTSHRe构建成功, RT-PCR和Western blot检测证实重组质粒能在CHO细胞中高效表达, 为进一步研究pcDNA3.1-hTSHRf和pcDNA3.1-hTSHRe在体内的基因表达, 建立Graves'病的动物模型奠定了基础.     

肾素-血管紧张素系统阻断剂与代谢综合征患者脂联素水平的关系

目的探讨肾素-血管紧张素系统（RAS）阻断剂与代谢综合征（Mets）患者血浆脂联素水平的关系。方法53例Mets患者随机分为3组,ACEI组15例予贝那普利（5 mg/d）,ARB组15例予坎地沙坦（4 mg/d）,对照组23例避免应用影响RAS的相关药物,服药期为4周,检测并比较治疗前后血浆脂联素（APN）、空腹血糖（FBG）、空腹胰岛素（FINS）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、肌酐（CR）、丙氨酸转氨酶（ALT）、胆红素（BIL）和胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）的水平。结果 ACEI组的FBG和LDL-C、ARB组的CR治疗后低于治疗前（P＜0.05）;ACEI组和ARB组APN水平治疗后高于治疗前（P＜0.01）,而3组中FINS、HOMA-IR、TC、ALT和BIL在治疗前后变化差异无统计学意义（P＞0.05）。治疗前CR、TC、ALT和BIL是APN水平的影响因素;治疗后FBG和TC是APN水平的影响因素。结论 APN可能是ACEI和ARB治疗Mets及其并发症的潜在靶点。     

原发性血管内肌周皮细胞瘤1例

正患者女性,54岁,10年前无明显诱因出现间断性右髋部疼痛,加重3年,行贴膏药、针灸等治疗,无明显减轻。专科检查:右大腿近端外侧略肿胀,局部压痛及叩击痛明显,局部皮肤无发红、无破溃、皮温不高、无异常静脉怒张及动脉搏动。右下肢肌力正常。影像学表现:MRI示右股骨大转子外侧皮下、肌间富血供结节影,考虑良性病变;B超示肿物为实性、低回声结节,边界清楚,内部血流信号较丰富。患者入院后完善相关检查及术前准备,在硬膜外麻醉下行"肿物切除术",术中切开     

初发2型糖尿病合并高血压患者血清内脂素、网膜素和TNF-α水平的变化*

【摘要】 目的 探讨初发2型糖尿病（T2DM）合并高血压患者血清内脂素、网膜素和肿瘤坏死因子（TNF）-α水平的变化及意义。方法 初次诊断为T2DM的患者106例,分为T2DM组54例和T2DM合并高血压组（DM+H组）52例。所有受试者测定血压、身高、体质量、血脂、尿酸,并行口服葡萄糖耐量试验与胰岛素激发试验,同时取血测定空腹与服糖120 min 血糖、胰岛素、内脂素、网膜素和TNF-α水平。计算体质指数（BMI）和稳态模型胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）。结果 （1）与T2DM组相比,DM+H组空腹及服糖120 min血清内脂素和TNF-α水平明显升高,网膜素水平明显降低（P < 0.05）。（2）内脂素和TNF-α均与收缩压、腰围、空腹胰岛素和HOMA-IR呈正相关,而网膜素与舒张压、腰围、空腹胰岛素和HOMA-IR呈负相关。（3）多元线性回归分析显示,空腹胰岛素水平是空腹与高糖刺激下内脂素的影响因素,而收缩压则主要影响空腹内脂素水平;空腹网膜素主要受HOMA-IR 和舒张压影响,而腰围、HOMA-IR、血尿酸是高糖刺激下血清网膜素的影响因素;空腹与120 min TNF-α 的影响因素分别为BMI和空腹胰岛素。结论 初发T2DM合并高血压患者血清内脂素、网膜素和TNF-α水平明显改变,其可能通过多种途径参与了糖尿病并发高血压的病理过程。