脂联素对主动脉平滑肌细胞体外钙化的影响

目的 探讨脂联素对动脉钙化的作用.方法 体外培养脂联素基因敲除(Adiponectin-/-)小鼠主动脉平滑肌细胞(ASMCs),加脂联素干预,采用α-磷酸奈酚法测定碱性磷酸酶(ALP)活性,放射免疫法检测骨钙素含量,Western blot检测Runx2表达变化,1%茜素红进行钙化结节染色.结果 脂联素通过抑制ALP活性、骨钙素分泌、下调Runx2表达,从而抑制细胞钙化结节形成.结论 脂联素抑制ASMCs向成骨细胞表型分化,保护动脉钙化.     

以早发糖尿病首诊的强直性肌营养不良1型1例

强直性肌营养不良1型(myotonic dystrophy type 1,DM1)为罕见的常染色体显性遗传性疾病。中南大学湘雅三医院内分泌科收治1例以早发糖尿病和肌力下降为表现的DM1患者。采集患者外周血提取DNA进行基因检测,发现患者强直性肌营养不良蛋白激酶(dystrophia myotonica protein kinase,DMPK)基因的3’-非翻译区(3’-untranslated region,3’-UTR)的三核苷酸CTG重复大于100次,DM1诊断明确。对于合并肌肉症状等多系统异常的糖尿病患者,应当注意DM1这一罕见疾病的筛查。     

脂联素基因敲除小鼠血管钙化的研究

目的 观察脂联素基因敲除小鼠主动脉组织病理学和组织化学的特性. 方法 SPF级6周龄雄性脂联素基因敲除小鼠纯合子(Adiponectin-/-)30只随机分为5组,第1、2、3组分别给予普通膳食喂养10、20、30周,第4组每2周经颈静脉注射空白腺病毒载体(即β-半乳糖甘酶腺病毒载体)并予普通膳食喂养30周,第5组每2周经颈静脉注射重组脂联素腺病毒载体并予普通膳食喂养30周;另随机选取SPF、级6周龄雄性野生型小鼠(WT)6只为正常对照组,给予普通膳食喂养30周.采用酶法测定血糖浓度,放射免疫法测定血浆胰岛素和脂联素水平.分离小鼠胸主动脉置4%多聚甲醛固定,石蜡包埋,连续切片,行茜素红钙化染色.分离主动脉弓到髂骨分支的动脉,用比色法测定10%甲酸抽提的钙含量.超声破碎胸主动脉,用Bradford法测总蛋白含量,离心后取上清液采用对硝基苯酚法测定ALP活性. 结果经普通膳食喂养的各组脂联素基因敲除小鼠与野生型小鼠在体重、血糖、血胰岛素水平方面无明显区别.与野生型小鼠、喂养10及20周的脂联素基因敲除小鼠相比,喂养30周的脂联素基因敲除小鼠出现了轻度的动脉钙化,其动脉的钙含量及ALP活性升高.通过对脂联素基因敲除小鼠进行外源性脂联素的补充,抑制了动脉钙化的出现及ALP活性升高. 结论在普通膳食喂养30周后,脂联素基因敲除小鼠出现轻度的动脉钙化,其机制可能与动脉中升高的ALP活性有关;外源性脂联素的补充可抑制脂联素基因敲除小鼠动脉钙化的发生,提示脂联素为动脉钙化的保护因子.     

SLC16A1基因新突变致高胰岛素血症家系临床及遗传特征分析

目的先天性高胰岛素血症是一种以难治性低血糖以及与血糖水平不相称的高胰岛素血症为特征的遗传异质性疾病, 目前已报道16种基因与先天性高胰岛素血症相关。本研究对1例以肥胖、高胰岛素血症及餐后低血糖为表现的患者进行全外显子测序, 以进一步明确其遗传病因。方法收集1例高胰岛素血症患者及家属临床资料和外周血, 提取基因组DNA, 采用全外显子组测序筛选出致病基因, 进行Sanger测序和家系验证。结果先证者表现为肥胖、高胰岛素血症、餐后低血糖, 但无运动后低血糖。基因检测发现先证者携带SLC16A1基因c.1259A>G(p.K420R)杂合突变, 家系验证发现其父亲、哥哥均携带该突变, 临床表型均有肥胖及高胰岛素血症, 其母亲和姐姐SLC16A1基因检测及临床表型均正常, 符合常染色体显性遗传模式。检索人类基因突变数据库(HGMD)未见SLC16A1基因c.1259A>G突变报道, 提示为新突变。采用MutationTaster、FATHMM-MKL、PolyPhen-2和CADD软件对对c.1259A>G突变进行功能预测, 结果均提示为有害突变。结论本研究报道了1例SLC1...     

载脂蛋白E基因缺陷小鼠血液生化指标的变化

目的 探讨载脂蛋白E(ApoE)基因缺陷小鼠血液生化指标的变化.方法 选取28周龄雄性ApoE基因缺陷小鼠6只和同性别、同周龄的野生型C57BL/6J(WT)雄鼠10只,采用全自动生化分析仪分别测定其血清中三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C),高密度脂蛋白(HDL-C)、载脂蛋白B(Apo-B)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、游离脂肪酸(NEFA)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、缺血修饰白蛋白(IMA)、骨保护素(OPG)、碱性磷酸酶(ALP)、γ谷氨酰转移酶(γGT)、钙(Ca)和磷(P)的含量.结果 与WT小鼠相比,ApoE基因缺陷小鼠血清中血脂指标TG、TC、LDL-C、ApoB、hs-CRP和NEFA明显升高,而HDL-C明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);心肌酶学指标CK、LDH和IMA与WT小鼠比较,差异有统计学意义(P＜0.05),两组间CK-MB比较,差异无统计学意义(P=0.08).ApoE基因缺陷小鼠血清中骨代谢相关指标OPG水平明显增高,ALP水平明显降低,与WT小鼠比较,差异有统计学意义(P＜0.05),而Ca、P和γGT水平间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 ApoE基因缺陷小鼠血液生化指标的变化与动脉粥样硬化密切相关,且伴随心肌功能的损伤以及骨代谢异常.     

雄性ApoE基因敲除小鼠不同时期骨密度和骨微结构的改变

目的 观察ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠的骨微结构、骨密度、骨矿含量(BMC)的变化,探讨ApoE在骨重建中的作用.方法 15、28和40周龄雄性ApoE-/-纯合子小鼠以及同性别、同周龄的野生型小鼠共48只,应用显微CT测定小鼠右侧股骨远端松质骨和皮质骨的骨微结构参数,双能X线骨密度仪(DXA)测定左侧股骨骨密度.并分析骨微结构、骨密度、BMC相关性.结果 与野生鼠相比,不同时期ApoE-/-鼠的股骨松质骨体积骨密度(vBMD)、组织骨密度、BMC、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)明显增加(P<0.05),骨面积分数(BS/BV)、骨小梁间隔(Tb.SP)和结构模型指数明显减低(P<0.05).股骨皮质骨内径周长、皮质骨外径周长、皮质骨面积、骨髓腔面积、截面总面积和截面惯性矩增加,而皮质骨骨密度、皮质骨BMC和皮质骨厚度变化不明显.DXA测定显示28周龄ApoE-/-鼠的总体骨密度明显高于野生型鼠(P<0.05),15和40周龄ApoE-/-鼠总体骨密度与对照组相比,无统计学差异.28周龄ApoE-/-鼠vBMD与BMC、BV/TV、Tb.Th、BS/BV和皮质骨BMC明显相关,相关系数分别为0.955、0.944、0.834、0.923和0.903,而与其他参数不相关.结论 ApoE-/-鼠表现出骨量增加,提示ApoE在骨重建中起重要作用.     

胰高血糖素样肽-1对高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及相关机制

目的：探讨胰高血糖素样肽-1（glucagon—like peptide-1,GLP—1）对高糖诱导人脐静脉内皮细胞huma numbilica lvein endothelial cells,HUVECs）凋亡的影响及相关机制。方法：HUVECs加入不同处理因素后分组,分别培养48h后,MTT检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞早期凋亡率;Westernl印迹测定细胞P-Akt,p-eNOS水平;NO试剂盒检测NO浓度。结果：高糖（33mmol／L）培养48h后HUVECs细胞活力下降p〈0．05）,细胞凋亡率增加（p〈0．01）,细胞p-Akt,p-eNOS,NO水平均下降（P〈0．05）;高糖条件下加人GLP．1（3nmol／L）培养48h,与高糖组相比较,HUVECs细胞活力增加（P〈0．01）,细胞凋亡率减少（p〈O．05）,细胞p-Akt,p-eNOS,NO水平均增／JH（V〈0．05）;P13K抑制剂wortmannine（100nmol／L）可以阻断GLP-1的抗凋亡作用及其对P—Akt蛋白、p-eNOS蛋白及NO水平的影响;eNOS抑制剂L—NAME（100umol／L）仅能阻断GLP-1的抗凋亡作用及对NO水平的影响,不影响p-Akt蛋白的表达。结论：GLP．1可改善高糖诱导的HUVECs凋亡,该抗凋亡作用可能与P13K／Akt／eNOS通路的上调相关。     

脂联素对小鼠主动脉平滑肌细胞体外钙化作用机制的研究

[目的]探讨脂联素对主动脉平滑肌细胞(ASMCs)体外钙化的作用机制.[方法]体外培养脂联素基因敲除小鼠ASMCs,以α-磷酸奈酚法检测钙化指标碱性磷酸酶(ALP),Western Blot检测脂联素受体(AdipoR)表达及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)激活.siRNA-AdipoR或加用MAPK信号转导阻断剂,观察脂联素对ASMCs钙化作用的变化.[结果]在小鼠ASMCs检测出AdipoR 1表达.脂联素干预后激活p38MAPK.若抑制AdipoR 1表达或使用p38 MAPK信号转导阻断剂SB203580,脂联素抑制ALP活性的作用消失.[结论]脂联素通过AdipoRl/p38信号转导途径抑制小鼠ASMCs体外钙化.     

水飞蓟宾对高脂饮食小鼠胰岛β 细胞的保护作用

目的：研究水飞蓟宾对高脂饮食喂养的C57BL/6J小鼠胰岛β细胞的保护作用及其可能的机制。方法：18 只3周龄雄性C57BL/6J小鼠分为普通饮食组(n=6)、高脂饮食组(n=6)及水飞蓟宾干预高脂饮食组(n=6),干预10周后观 察各组小鼠空腹血糖、胰岛素、血脂、谷丙转氨酶、肌酐、尿素氮变化及胰岛β细胞的脂质含量、抗氧化水平及凋 亡情况,并检测胰腺组织胰岛素诱导基因-1(insulin-induced gene-1,Insig-1)、固醇调节原件结合蛋白-1c(sterol regulatory element binding protein-1c,SREBP-1c)和脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,FAS)的mRNA,以及Insig-1和SREBP-1c蛋 白的表达水平。结果：与高脂饮食组相比,水飞蓟宾干预高脂饮食组小鼠胰岛分泌功能明显改善,血糖水平降低 (P<0.05),胰岛组织脂质含量、氧化应激水平及凋亡水平均降低(均P<0.05);水飞蓟宾能促进胰岛组织Insig-1的表达, 抑制SREBP-1c和FAS的表达(均P<0.05)。三组间谷丙转氨酶、肌酐、尿素氮功能差异无统计学意义(均P>0.05)。结论： 水飞蓟宾对高脂饮食小鼠的胰岛β细胞具有保护作用,其机制可能与调节Insig-1/SREBP-1c途径及增加抗氧化活性有 关,且长期口服水飞蓟宾安全性良好。     

4例Ib型假性甲状旁腺功能减退症的临床和遗传学特征

假性甲状旁腺功能减退症(pseudohypoparayhyroidism,PHP)是一种罕见的常染色体显性或隐性遗传疾病,临床上以低血钙、高血磷及靶器官对甲状旁腺激素抵抗为主要特征。中南大学湘雅三医院收治的4例Ib型PHP患者均存在低血钙、高血磷和甲状旁腺激素抵抗,其中2例患者有促甲状腺激素轻度升高和Albright遗传性骨营养不良症的轻微表现,1例患者合并低钾血症。4例患者全外显子组测序均未发现GNAS(guanine nucleotide-binding protein alpha-stimulating activity polypeptide 1)及低钾相关基因变异。多重连接探针扩增检测提示4例患者均存在GNAS基因上游甲基化差异表达区域的甲基化异常。PHP各亚型之间存在表型重叠,故对临床怀疑Ib型PHP患者进行GNAS甲基化检测有助于本病的诊断及治疗。