DSS对血管性痴呆大鼠PSD95表达及功能的影响

【立论依据】 血管性痴呆(VD)是一种由于脑血液循环障碍,进而使神经元损伤出现认知功能缺损的综合征,目前尚缺乏疗效肯定的手段。突触后致密蛋白-95(PSD95)在NMDAR和突触膜表面蛋白(如nNOS)之间起连接作用,对兴奋性信号转导进行整合。NMDAR参与了海马突触可塑性诱导及学习和记忆机制。在慢性脑缺血早期,PSD95过表达介导了谷氨酸兴奋毒性对神经元的损伤;缺血晚期PSD95表达过低,则出现LTP诱导障碍及学习和记忆能力下降。本课题组预实验结果表明,DSS可提高局灶性脑缺血(MCAO)再灌注损伤及2VO大鼠学习记忆能力;另外,DSS可降低MCAO再灌注24 h后大鼠皮层PSD95水平。 【设计思路】 本设计拟采用大鼠双侧颈总动脉结扎(2VO)慢性脑缺血模型,通过检测脑缺血不同时间点PSD95 mRNA和蛋白水平、PSD95与NMDAR不同亚型的相互作用,探讨DSS改善VD大鼠学习记忆的可能机制。 【实验内容】 (1)大鼠2VO模型的制备;(2)水迷宫实验;(3)尼氏染色观察海马CA1区神经元丢失情况;(4)Real-time PCR及蛋白质印迹方法观察海马组织PSD95的mRNA和蛋白水平变化;(5)免疫共沉淀方法检测PSD95与GluN2A及GluN2B的相互作用。 【材料】 220~250 g SD大鼠、抗体、PCR及尼氏染色试剂盒等。 【可行性】 (1)理论:文献及前期结果支持DSS通过调节PSD95蛋白表达及其与NMDAR的相互作用改善学习记忆的假设;(2)模型:2VO模型为建立VD的有效模型 (3)设施:实验室具备相关实验仪器 (4)操作:学生掌握实验相关操作技术。 【创新性】 本项目从临床问题出发,在前期研究的基础上,创新性地从调控PSD95表达及功能的角度研究DSS对血管性痴呆大鼠学习记忆功能的改善作用及机制。本研究可为缺血性脑血管病的新药开发以及临床治疗提供理论和实验依据。     

胱硫醚-γ-裂解酶在过敏性休克死亡小鼠心肌组织中的死后变化

目的：探讨胱硫醚-γ-裂解酶（ cystathionine-γ-lyase,CSE）在过敏性休克小鼠心肌组织中的表达和意义。方法：通过注射卵蛋白（ OVA）制作小鼠过敏性休克模型。将昆明种小鼠60只随机分为4组,即：PBS对照组、OVA模型组、OVA模型﹢炔丙基甘氨酸（ PPG）组、OVA模型﹢硫氢化钠（ NahS）组。各组小鼠致敏第3周诱发过敏性休克致死,未死亡小鼠1 h后颈椎脱臼处死动物。分别于死亡后即时（T1）、死亡后冷冻2 d（T2）和冷冻7 d（T3）三个时间点取心肌组织行免疫组织化学染色检测心肌组织CSE蛋白的表达。结果：对照组小鼠心肌组织中CSE呈弱阳性表达,OVA诱导的过敏性休克模型心肌组织中CSE呈阳性表达。给予外源性NahS后CSE在心肌组织中表达增强,而给予h2 S抑制剂PPG后,CSE在心肌组织中表达减弱较为明显。各组小鼠心肌组织在T1、T2、T3三个时间点CSE的表达变化不明显。结论：过敏性休克小鼠心肌细胞中CSE的表达增强,应用免疫组化染色检查心肌组织中CSE的表达可为过敏性休克死亡的法医学鉴定提供形态学参考指标。