肺癌患者外周血淋巴细胞亚群与性别、年龄及临床分期的关系

目的探讨肺癌患者外周血淋巴细胞亚群与性别、年龄及临床分期的关系.方法四色免疫荧光标记流式细胞仪分析.结果(1)肺癌组与正常对照组比较CD3+、CD3+CD4+及CD3-CD16+CD56+细胞百分数明显下降,而CD3+CD8+和CD3+CD16+CD56+细胞无显著变化;(2)女性CD3+CD4+细胞明显多于男性,而CD3-CD16+CD56+细胞明显少于男性;(3)51-60岁年龄段患者CD3+CD4+细胞百分数明显低于$50岁和≥61岁年龄段患者的CD3+CD4+细胞百分数,而CD3+CD8+细胞百分数明显高于$50岁和≥61岁年龄段患者的CD3+CD8+细胞百分数;50岁年龄段患者CD3+CD16+CD56+细胞百分数明显少于51-60岁和≥61岁年龄段患者的CD3+CD16+CD56+细胞百分数;(4)随着临床分期愈晚免疫指标变化愈明显,Ⅰ期与Ⅱ期之间差异不明显.结论肺癌患者外周血淋巴细胞亚群多项指标发生明显改变,且与性别、年龄及临床分期关系密切.     

人脐血贴壁层细胞对脐血造血细胞体外扩增的作用

实验于2004-10/2005-06在吉林省肿瘤防治研究所和吉林医药学院病原教研室完成。脐血采自长春市妇产医院健康产妇,知情同意,足月顺产,待胎儿娩出后,无菌经脐静脉穿刺取血,枸橼酸钠抗凝。Ficoll-paque淋巴细胞分层液(相对体积质量:1.077±0.22)密度梯度离心法分离出脐带血单个核细胞后,采用长期液体培养法培养脐带血贴壁层细胞,并与脐带血单个核细胞共同培养,观察细胞生长形态并通过流式细胞仪分析细胞周期。结果显示,脐带血贴壁层细胞与脐带血单个核细胞共培养7d后,与无贴壁层细胞培养的脐带血单个核细胞的细胞周期相比,贴壁层细胞能明显促进细胞的增殖,S G2 M期细胞百分数明显增高,差异具有显著性意义[(42.7±1.1)%,(35.5±2.8)%,P<0.05]。脐血贴壁层细胞能促进脐血单个核细胞进入细胞周期,体外扩增后的脐血单个核细胞集落形成能力明显大于无贴壁细胞[(57.7±4.7)个/5×104,(40.3±5.1)个/5×104,P<0.01]。     

脐血贴壁层细胞和骨髓基质细胞对脐血单个核细胞增殖能力的影响

目的:比较脐血贴壁层细胞和骨髓的基质细胞对脐血单个核细胞增殖能力的影响.方法:实验于2005-02/07在吉林省肿瘤防治研究所完成.①对象:正常足月顺产儿脐带由长春市妇产医院提供;肋骨取自吉林省肿瘤医院外科手术患者,排除血液疾患.产妇及外科手术患者对治疗及实验均签署知情同意书,实验经医院医学伦理委员会批准.②实验方法:采用红细胞裂解法制备有核细胞,以Ficoll-paque淋巴细胞分层液按密度梯度离心法分离出脐血单个核细胞,体外培养24 h后去除悬浮细胞,收集脐血贴壁层细胞,加入到24孔板中,2×106 L-1/孔,再加入含12.5%马血清、12.5%胎牛血清、1×10-7 mol/L氢化考地松的IMDM培养体系1 mL.将肋骨剪成3 cm小块,冲洗髓腔收集细胞悬液,用淋巴细胞分层液分离出骨髓单个核细胞,同法进行骨髓基质细胞的培养.分别将两种细胞于37 ℃、体积分数为0.05的CO2条件下培养3周后,各自加入到24孔板,2×106 L-1/孔,同时每孔再加入1×106 L-1脐血单个核细胞,培养7 d.以未添加脐血贴壁层细胞及骨髓基质细胞的脐血单个核细胞作为空白对照.③实验评估:倒置显微镜下观察脐血贴壁层细胞与骨髓基质细胞的生长状态.采用流式细胞仪测定脐血单个核细胞周期分布.甲基纤维素半固体培养法测定脐血单个核细胞混合集落形成单位情况. 结果:①脐血贴壁层细胞与骨髓基质细胞的形态:培养2周时,多数脐血贴壁层细胞呈大小不等的圆形、椭圆形,少部分呈不规则形;骨髓基质细胞主要为梭形,细胞排列成漩涡状、辐射状或相互缠绕成束状.②细胞周期:与空白对照相比,经脐血贴壁层细胞、骨髓基质细胞干预的脐血单个核细胞S G2 M期所占比例均显著升高(P < 0.05).③混合集落形成单位:经脐血贴壁层细胞、骨髓基质细胞干预后的脐血单个核细胞,其混合集落形成单位的数量显著高于空白对照(P < 0.05).结论:①脐血贴壁层细胞与骨髓基质细胞在形态上具有一定差异,但均能提高脐血单个核细胞体外增殖能力.②脐血贴壁层细胞可替代骨髓基质细胞作为脐血造血细胞体外扩增的辅助条件.     

抗原诱导的人脐血CTL细胞活性的实验研究

目的 因脐血干细胞增殖能力自我更新能力较强，故脐血造血干细胞生物学特性研究已经成为热点。本文探讨观察了所提抗原及其对人脐血细胞（CTL）诱导的特异性抗肿瘤作用。方法 用密度梯度离心法提取人肿瘤抗原，并测定诱导的人脐血细胞CTL活性。结果 肠纤维肉瘤Ag诱导4天后，不同效价实验组CTL活性均有升高，效价1：100的抗原诱导的CTL活性最强。乳腺癌抗原诱导8天后，效价1：100实验组CTL活性显著提高，结论 所提两种抗原效果良好，可明显诱导脐血CTL活性，以效价1：100实验组最佳。     

脐血贴壁层细胞和骨髓基质细胞对脐血单个核细胞增殖能力的影响★

目的：比较脐血贴壁层细胞和骨髓的基质细胞对脐血单个核细胞增殖能力的影响。 方法：实验于2005-02/07在吉林省肿瘤防治研究所完成。①对象：正常足月顺产儿脐带由长春市妇产医院提供；肋骨取自吉林省肿瘤医院外科手术患者，排除血液疾患。产妇及外科手术患者对治疗及实验均签署知情同意书，实验经医院医学伦理委员会批准。②实验方法：采用红细胞裂解法制备有核细胞，以Ficoll-paque淋巴细胞分层液按密度梯度离心法分离出脐血单个核细胞，体外培养24 h后去除悬浮细胞，收集脐血贴壁层细胞，加入到24孔板中，2×106 L-1/孔，再加入含12.5%马血清、12.5%胎牛血清、1×10-7 mol/L氢化考地松的IMDM培养体系1 mL。将肋骨剪成3 cm小块，冲洗髓腔收集细胞悬液，用淋巴细胞分层液分离出骨髓单个核细胞，同法进行骨髓基质细胞的培养。分别将两种细胞于37 ℃、体积分数为0.05的CO2条件下培养3周后，各自加入到24孔板，2×106 L-1/孔，同时每孔再加入1×106 L-1脐血单个核细胞，培养7 d。以未添加脐血贴壁层细胞及骨髓基质细胞的脐血单个核细胞作为空白对照。③实验评估：倒置显微镜下观察脐血贴壁层细胞与骨髓基质细胞的生长状态。采用流式细胞仪测定脐血单个核细胞周期分布。甲基纤维素半固体培养法测定脐血单个核细胞混合集落形成单位情况。 结果：①脐血贴壁层细胞与骨髓基质细胞的形态：培养2周时，多数脐血贴壁层细胞呈大小不等的圆形、椭圆形，少部分呈不规则形；骨髓基质细胞主要为梭形，细胞排列成漩涡状、辐射状或相互缠绕成束状。②细胞周期：与空白对照相比，经脐血贴壁层细胞、骨髓基质细胞干预的脐血单个核细胞S+G2+M期所占比例均显著升高（P < 0.05）。③混合集落形成单位：经脐血贴壁层细胞、骨髓基质细胞干预后的脐血单个核细胞，其混合集落形成单位的数量显著高于空白对照（P < 0.05）。 结论：①脐血贴壁层细胞与骨髓基质细胞在形态上具有一定差异，但均能提高脐血单个核细胞体外增殖能力。②脐血贴壁层细胞可替代骨髓基质细胞作为脐血造血细胞体外扩增的辅助条件。     

无佐剂人用狂犬病疫苗（Vero细胞）接种后安全性与流行病学保护效果的研究

目的观察国产无佐剂人用狂犬病疫苗（Vero细胞）接种后的一般临床反应，同时对近几年观察地区使用人用狂犬病疫苗的预防效果进行了回顾性流行病学调查。方法对292例犬伤者采用暴露后0、3、7、14、28d的免疫程序接种，观察接种后12、24、48和72h的局部与全身一般临床反应及不良反应，对接种地区的人用狂犬病疫苗预防效果进行统计分析。结果接种后的局部一般临床反应率为3．65％，全身一般临床反应率为2．48％，两者无显著差异（P〉0．05），总反应率为3．06％，均为轻型反应，未见严重的不良反应病例报告。通过近几年来的狂犬病疫苗接种，多年无狂犬病病例报告。结论国产无佐剂人用狂犬病疫苗（Vero细胞）接种后安全性良好，临床反应轻微，流行病学预防保护效果可靠。     

热休克处理的肿瘤细胞培养上清对脐血淋巴细胞活性的影响

肿瘤微环境（tumor microenvironment）是肿瘤所处的内环境,由肿瘤局部浸润的免疫细胞、间质细胞及所分泌的活性介质、微血管、组织液等与肿瘤细胞本身共同构成[1,2]。不仅包括肿瘤所在组织的结构、功能和代谢,也与肿瘤细胞自身内环境有关。肿瘤细胞可以通过自分泌和旁分泌,改变和维持自身生存和发展的条件,促进肿瘤的生长和发展。     

贴壁脐血细胞对造血细胞周期及CFU-Mix形成能力的影响

自1989年人们首次开展脐血造血干细胞移植治疗Fanconi’s贫血获得成功之后,国内外学者对脐血生物、生理、免疫学特点及临床应用进行了广泛的研究,证明脐血可以作为骨髓外造血的来源[1,2]。本实验研究了脐血造血环境因素之一———贴壁层细胞形态特点及其对脐血造血细胞细胞周期和CFU-Mix形成能力的影响,以探讨体外扩增脐血造血干细胞的适宜条件,为更好开发利用脐血奠定实验基础。1材料与方法1.1标本来源1.1.1脐血采自长春市妇产医院,健康产妇,足月顺产,待胎儿娩出后,无菌经脐静脉穿刺取血。1.1.2肋骨：取自外科手术患者,排除血液疾患。