脉冲电刺激联合姜黄素对小鼠足背皮肤黑素瘤的影响

目的观察脉冲电刺激联合姜黄素对小鼠足背皮肤黑素瘤的影响。方法将B16-F10小鼠黑素瘤细胞注射到C57/BL6小鼠足背皮下,制备足背黑素瘤模型;脉冲电刺激、姜黄素独立或联合处理黑素瘤,并观察其对肿瘤大小生长情况及对肿瘤细胞凋亡的影响。结果脉冲电刺激独立或联合姜黄素具有抑制黑素瘤瘤体增大的作用（P < 0.01）,联合疗法更加有效（P < 0.05）,且联合治疗组肿瘤细胞凋亡的数量增加（P < 0.05）。结论足背黑素瘤模型便于观察肿瘤形态和测量体积,具有一定优势;脉冲电刺激联合姜黄素可以通过引起细胞凋亡而抑制黑素瘤的生长,是一种有效的治疗黑素瘤的手段。     

华支睾吸虫CsSCCRO基因的克隆表达和蛋白纯化

目的原核表达华支睾吸虫鳞状上皮癌相关肿瘤基因(SCCRO)全长编码区序列,获得纯化的重组蛋白,为进一步功能研究做好准备。方法用生物信息学方法从华支睾吸虫成虫全长cDNA文库中识别出与人鳞状上皮癌相关基因的同源序列及其全长编码区,将其编码区序列克隆到原核表达载体PET-30a(+),测序鉴定重组质粒,在大肠杆菌BL-21/DE3中用IPTG诱导表达,重组产物用His-镍蛋白纯化柱纯化。结果华支睾吸虫鳞状上皮癌相关基因长度为1 218bp,其全长编码序列长度为780bp,编码259个氨基酸,1-22位为分泌信号肽,在羧基端有一个高度保守的区域。该基因在大肠杆菌中得到了高效的可溶性表达,重组蛋白达总蛋白的39%,纯化后的重组蛋白纯度可达98%。结论鳞状上皮癌相关基因的PET-30a(+)原核重组质粒在大肠杆菌BL-21/DE3中可以稳定高效地表达可溶性蛋白。     

CLIA在肿瘤标志物检测中的应用

化学发光技术是指当基态分子吸收化学反应中释放的能量跃迁到激发态,处于激发态的分子以光辐射的形式返回基态时产生的光称为化学发光。基于化学发光强度和被测物含量之间的关系建立的分析方法叫化学发光分析法,它具有灵敏度高,线性范围宽,仪器简单、操作简便等特点,已广泛地应用于环境、临床、食品和工业分析中。1977年,Tsuji等[1]基于放射免疫分析的基本原理,将酶的化学发光与免疫反应结合起来,发展了化学发光免疫分析(Chemiluminescence Immunoassay,CLIA)方法。它是将发光物质或酶标记在抗原或抗体上,免疫反应结束后,加入氧化剂或酶底物而发光,通过测量发光强度,根据标准曲线测定待测物的浓度。CLIA的主要优点是灵敏度高、线性范围宽、标记物的有效期长、无放射性危害、可实现全自动化等。CLIA具有强大的生命力,在国际和国内倍受临床检验和生物医学工作者的关注。1化学发光免疫分析基本原理化学发光免疫分析包含两个部分,即免疫反应系统和化学发光分析系统[2]。化学发光(Chemiluminescence,CL)是化学物质在特定化学反应中产生的光辐射。通过高能中间体的分解在化学反应中激发单态分子形成,分子被...     

华支睾吸虫CsSCCRO基因的表达和鉴定

目的将目的基因CsSCCRO转染Hela细胞,检测转染效率和表达水平,为进一步在细胞学水平研究编码蛋白的功能提供依据。方法将目的基因CsSCCRO克隆到真核表达载体pEGFP-N1上,通过脂质体方法转入Hela细胞,RT-PCR和荧光观察来鉴定转录和表达水平。结果真核重组质粒pEGFP-N1-CsSCCRO转入Hela细胞后稳定表达荧光蛋白;RT-PCR鉴定转染的Hela细胞,扩增产物约为780bp,与预期值相符。结论CsSCCRO基因能够转染到Hela细胞中,并且能与GFP高效转录和翻译成融合蛋白。     

鼠伯氏疟原虫CSP基因真核表达载体的构建及在Hela细胞中的表达

目的分别构建携带绿色荧光蛋白报告基因的伯氏疟原虫(Plasmodiumberghei)环子孢子(CSP)全长基因和去除中央重复序列的CSP的融合蛋白真核表达质粒,并检测其在Hela细胞中的表达。方法采用PCR技术,从伯氏疟原虫基因组中扩增全长CSP基因,将其定向克隆入pEGFP-N1,构建pEGFP/PbCSP全长基因重组质粒,酶切、PCR及序列分析鉴定;同样,采用PCR技术扩增PbCSP的N端和C端两个片段,先将C端片段定向克隆入pEGFP-N1,构建pEGFP/PbCSP-C重组质粒,再将PbCSPN端片段定向克隆入pEGFP/PbCSP-C,构建pEGFP/PbCSP'重组质粒,酶切、PCR及序列分析鉴定。将pEGFP/PbCSP和pEGFP/PbCSP′分别用脂质体介导转染体外培养的Hela细胞,荧光显微镜及RT-PCR检测融合蛋白的表达。结果PCR、酶切及测序证实目的基因PbCSP全长和片段分别正确连接至pEGFP-N1的多克隆位点,两种重组质粒转染Hela后,荧光显微镜及RT-PCR均检测到目的蛋白在Hela中表达。结论成功构建了携带绿色荧光蛋白报告基因的伯氏疟原虫CSP全长基因和该基因片段的融合蛋白真核表达质粒,并在Hela细胞中获得表达。