神经调节因子Neuregulin-1(Nrg1)调节U87-MG细胞的黏附分子L1表达及促迁移作用

目的研究神经调节因子Neuregulin-1(Nrg1)对人胶质母细胞瘤U87-MG细胞中细胞黏附分子L1表达及细胞迁移的影响。方法给予U87-MG细胞重组Nrg1α(rNrg1α,2.5 nmol/L)24和48 h,RT-PCR观察L1 mRNA表达;给予细胞rNrg1α或rNrg1β(2.5 nmol/L)48 h,Western blot检测L1蛋白水平。用Nrg1 siRNA处理细胞,Western blot观察L1蛋白水平,用细胞划伤实验观察细胞迁移。结果 Nrg1α可促进L1 mRNA表达;与0 nmol/L组相比,Nrg1α及Nrg1β(2.5 nmol/L)均可显著增加L1蛋白水平(P<0.01,P<0.05)。与对照siRNA相比,Nrg1 siRNA明显降低Nrg1表达,并伴有L1表达下降。Nrg1 siRNA处理细胞划伤16 h,划伤边缘细胞Nrg1α、Nrg1β及L1荧光信号降低,细胞迁移减弱。结论 Nrg1可调节U87-MG细胞L1表达,其参与细胞迁移可能与提高L1表达有关。     

他克莫司局部缓释用药对大鼠胫神经损伤的疗效

目的:观察大鼠胫神经损伤后局部短暂应用他克莫司(FK506)纳米微球缓释颗粒对神经再生的影响。方法:Wistar大鼠36只,随机分为实验组(n=24)和对照组(n=12),实验组根据释放用药时间不同分为10 d亚组和15 d亚组各12只,建立左侧胫神经切断的端端缝合模型。于术后2周、3周分别取缝合口远侧端神经干进行变性轴索、变性髓鞘染色,观察其变性轴索、变性髓鞘、再生髓鞘纤维数。结果:术后2、3周,实验组缝合口远侧端神经干内变性轴索数少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);变性髓鞘数少于对照组,有显著性差异(P<0.01)。术后3周,10 d亚组髓鞘数多于15 d亚组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:局部短暂少量应用FK506纳米微球缓释颗粒,能缩短损伤远侧端神经溃变时间,利于药物充分吸收,减少用药部位结缔组织对局部药物缓释时的影响。     

Caspase-3参与缺血性神经元凋亡通路的研究

Caspase-3是胱冬肽酶家族中的重要成员,它通过介导和执行死亡指令在缺血性的神经元凋亡过程中发挥重要作用。Caspase-3参与脑缺血神经元凋亡通路,包括caspase-3的激活途径、主要的调控机制以及它和另一个与细胞死亡密切相关的蛋白酶卡配因的关系。明确caspase-3在缺血性神经元凋亡通路中的作用,深入探讨其激活和调控机制,对脑缺血神经元的保护具有重要意义。     

RNA干扰细胞黏附分子L1表达逆转胶质瘤U251细胞多药耐药

背景与目的：细胞黏附分子L1（cell adhesionmoleculeL1,L1CAM）是一种跨膜黏附蛋白,在神经系统发育及肿瘤发生中发挥重要作用。本研究运用RNA干扰（RNAinterference,RNAi）技术抑制L1CAM表达,并探讨其对胶质瘤U251细胞多药耐药的逆转作用及相关分子机制。方法：将针对L1CAM的小干扰RNA（siLl）和阴性对照siRNAfsiCon）转染人胶质瘤U251细胞。实验分3组：空白对照组（胶质瘤U251细胞）、阴性对照组（转染siCon的胶质瘤U251细胞）、实验组f转染siLl的胶质瘤U251细胞）。蛋白质印迹法（Westernblotting）~U251细胞中L1CAM、MRPl、pAKT及pERK1／2等蛋白表达。细胞增殖实验检测L1CAM对顺铂（cisplatin）和P13K／AKT抑制剂LY294002抑制U251细胞增殖的影响。免疫荧光染色法检测抑制LICAM表达对U251细胞系中AKT磷酸化情况的影响。结果：实验组L1CAM、pAKT．pERKl／2蛋白表达量明显低于阴性对照组和空白对照组（P〈0．01）,但实验组多药耐药蛋白MRPl表达量以及Bcl-2cdBax与阴性对照组和空白对照组相比无明显变化。实验组顺铂和LY294002对U251细胞增殖的抑制率高于阴性对照组和空白对照组,提示抑制LICAM表达后细胞对顺铂和LY294002的敏感性增加。免疫荧光结果显示,与阴性对照组和空白对照组相比,实验组细胞内AKT磷酸化信号明显降低。结论：RNAi抑制L1CAM表达能增强顺铂和LY294002对U251细胞增殖的抑制作用,并可抑制P13K／AKT和MAPK信号激活．一定程度上可逆转胶质瘤细胞的多药耐药性。     

Journal Club（杂志沙龙）与神经生物学理论、方法讲授联合运用初探

我们尝试将神经生物学理论与方法知识融入到杂志沙龙中,以研究生陈述文献为主体,教师引导为主线,通过对文献构思的解析,文献中所涉及的基础知识解读和文献讨论,培养研究生对神经生物学理论和研究实践的兴趣,强化神经生物学科研设计。     

大鼠模型示教辅助脑血管病临床教学

脑血管病是神经系统常见病和多发病,具有高发病率和死亡率的特点,有必要在短时间内让学生准确和系统掌握从脑血管病发病机制、临床表现到治疗的相关知识。目前临床教学中病人资源有限,尚不能充分适应上述要求。该文以蛛网膜下腔出血为例阐明在脑血管病临床教学实践中引入脑血管病动物模型的重要性和可行性。     

隔日禁食对MPTP诱导帕金森病小鼠的保护作用研究

目的探究隔日禁食(ADF)对MPTP诱导的帕金森病(PD)小鼠的保护作用;方法 44只C57BL/6雄性小鼠随机均分为:生理盐水+自由饮食(NS+AL)、生理盐水+隔日禁食(NS+ADF)、MPTP+自由饮食(MPTP+AL)、MPTP+隔日禁食(MPTP+ADF)4组。隔日禁食方案以2d为一周期,D1完全禁食,D2自由摄食,共17个周期,期间记录小鼠体质量。自第12个周期始,小鼠接受每日1次、连续5 d的MPTP腹腔注射,建立亚急性PD小鼠模型。实验结束后收集小鼠粪便,用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)检测粪便中短链脂肪酸(SCFAs)含量;收集小鼠新鲜纹状体组织,用高效液相色谱法(HPLC)检测神经递质及其代谢物,通过WB检测酪氨酸羟化酶(TH);收集小鼠全脑组织制备冰冻切片,用免疫荧光染色检测黑质区多巴胺能神经元及神经胶质细胞的数量;结果 ADF限制小鼠体质量的增加。ADF能提升PD小鼠纹状体内多巴胺(DA)与5-羟色胺(5-HT)的含量,降低其代谢,并提升TH表达。ADF可增加黑质区多巴胺能神经元数量,并抑制神经胶质细胞的增生与激活。此外,ADF还抑制PD小鼠粪便内SCFAs...     

神经调节蛋白2高表达于不同级别胶质瘤组织并通过Akt信号调控胶质瘤细胞GFAP表达

目的 探讨神经调节蛋白2（NRG2）在胶质瘤中的表达及其在胶质瘤发生发展中的作用。方法 通过GEPIA数据库比较分析与人正常对照组相比,低级别胶质瘤（LGG,n=518）和胶质母细胞瘤（GBM,n=163）样本中NRG2和GFAP基因表达水平变化,并分析LGG和GBM样本中两个分子与患者生存率的关系,以及两个分子表达相关性。获取人胶质瘤组织芯片样本,包含癌旁正常组织10个、LGG组织48个、GBM组织20个;使用免疫组织化学染色观察不同级别人胶质瘤组织芯片样本中NRG2表达水平变化情况,并使用免疫荧光双标法观察NRG2与GFAP的共定位情况。采用Western blot检测Akt抑制剂Perifosine对NRG2调控GFAP表达的影响。结果 NRG2在LGG和GBM样本中均存在高表达,以LGG较为显著（P<0.01）。GBM样本中, 低NRG2水平患者的总体生存率在30月之后略高于高NRG2水平患者。 在LGG样本中,NRG2与GFAP基因表达水平呈负相关（P<0.01）,而在GBM样本中则呈正相关（P<0.01）。免疫荧光染色显示LGG样本中NRG2与GFAP多共定位于同一肿瘤细胞,而在GBM样本中则多表达于不同肿瘤细胞。NRG2促进U-87 MG胶质母细胞瘤细胞中GFAP表达,该作用可被Akt抑制剂Perifosine显著抑制（P<0.01）。结论 NRG2可高表达于不同级别胶质瘤组织中,可能部分通过Akt信号调控胶质瘤细胞GFAP表达,影响患者生存率。     

腹腔注射乙烯雌酚大鼠垂体前叶非组织特异性中性半胱氨酸蛋白酶u-及m-calpains的活性及时相变化

Little is known about changes in calpain activity in the pituitary gland.In the present study,μ-and m-calpain activity changes were detected in the rat anterior pituitary following intraperitoneal injection of diethylstilbestrol.Double-immunofluorescence labeling confirmed colocalization of μ-and m-calpain in prolactin-secreting cells(lactotrophs).Western blot analysis revealed significantly increased expression of both calpains,which accompanied upregulated cytosol and membrane zymographic activities at 12 weeks following diethylstilbestrol injection,compared with rats injected with sunflower oil.Moreover,following estrogen injection,pituitary gland pathological damage gradually worsened with increasing time.Results demonstrated that estrogen regulated calpain expression and activity,and both calpains participated in the pathophysiological processes of the pituitary gland.Ubiquitous calpain expression could serve as an effective target for anti-estrogen drugs.