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为探讨赖型钩体抗原基因特点及其表达产物作为疫苗的可行性,采用问号赖型017株钩体经HhaⅠ和AluⅠ限制性内切核酸酶部分消化,行EcoRⅠ限制酶切位点甲基化,加上EcoRⅠ接头与去磷酸化的λgt11DNA-EcoRⅠ臂连接,体外包装后转染E.coliY1090,建成含2.1×106重组子的问号赖型017株钩体基因文库。用抗赖型钩体兔血清从上述基因文库中筛选出一个强阳性克隆,λDL12,亚克隆入pUC18质粒,获重组质粒,pDL121。EcoRⅠ酶切证实该重组质粒含有1kb的外源插入片段。pDL121经IPTG诱导后,在SDS-PAGE上出现23kd特异条带。免疫印迹表明该蛋白带可被抗赖型钩体兔血清识别。 相似文献
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