硫化氢对糖尿病大鼠ED的影响和机制研究

 目的：观察硫化氢（H 2S）对糖尿病（DM）大鼠勃起功能障碍（ED）的影响。方法：将70只SD雄性大鼠分为2组，60只腹腔注射链脲佐菌素（STZ）建立DM大鼠模型，10只注射生理盐水为正常对照。阿朴吗啡诱导勃起后检测DM造模成功大鼠的勃起功能情况，将存在ED的36只大鼠随机分成3组：糖尿病对照组（DM组）、糖尿病+硫氢化钠组（DM+NaHS组）和糖尿病+西地那非组（DM+sildenafil组）。DM+NaHS组每天腹腔注射NaHS （50 μmol/kg），DM+sildenafil组每天给予西地那非（5 mg/kg）灌胃，DM组每日腹腔注射生理盐水，注射体积为0.25 mL。持续饲养12周后，观察各组大鼠勃起功能情况，采集各组大鼠动脉血，测定血液中H 2S含量及各组阴茎海绵体组织胱硫醚γ-裂解酶（cystathionine γ-lyase, CSE）活性及CSE表达水平。结果：STZ诱发的DM造模成功率为81.7%（49/60），DM大鼠发生ED的比例为73.5%（36/49），与DM组比，DM+NaHS组和DM+sidenafil组大鼠勃起功能良好，3个实验组大鼠勃起率分别为(33.3±5.5)%、（54.5±5.3）%和(63.6±9.1)%。与正常大鼠组比，各组DM大鼠阴茎海绵体中CSE活性与表达水平均有下降，其中DM+NaHS组大鼠的CSE活性及表达水平显著低于DM组（P<0.05）和DM+sildenafil组（P<0.05）。结论：STZ诱导的糖尿病大鼠中ED发生率较高，H 2S对糖尿病合并ED大鼠勃起功能有一定的促进作用。外源性给予H 2S可以反馈性抑制大鼠阴茎组织中CSE的活性和表达。     

成人隐匿性自身免疫性糖尿病患者不同治疗方案的疗效探讨

目的通过比较不同的降糖方案（胰岛素和以格列齐特缓释片为主的口服药）对成人晚发性自身免疫性糖尿病（LADA）患者的疗效,探讨LADA的最佳治疗方法。方法把谷氨酸脱羧酶（GAD-Ab）和/或胰岛细胞抗体（ICA）阳性的初诊2型糖尿病患者（98例）作为研究对象,接受胰岛素治疗的患者（52例）予胰岛素降糖治疗,拒绝胰岛素治疗的患者（46例）采用以格列齐特缓释片为主的口服药降糖,随访24个月,比较两组的糖脂代谢,体质量指数,C肽水平及抗体变化。结果两种治疗方法血糖均可达到良好控制,治疗前后体质量指数及脂代谢均无明显变化;但治疗两年后观察发现促泌剂治疗组GAD-Ab滴度及ICA阳性率较前明显升高,C肽水平也较前下降,且差异均有显著性;而胰岛素治疗组GAD-Ab滴度明显下降（〈0.05）,36%的患者ICA转阴;C肽水平较前明显升高（〈0.05）。结论临床确诊为LADA的患者尽量避免使用促泌剂类药物,尽早使用胰岛素治疗以保留残存的胰岛细胞。     

BCL-3基因沉默对BCL-3高表达的人大肠癌RKO细胞增殖和药物敏感性的影响

 目的：构建针对人BCL-3基因的RNA干扰（RNA interference,RNAi）慢病毒载体,观察其对大肠癌细胞株中BCL-3基因的沉默效应,以及基因沉默对细胞生物学行为及药物敏感性的影响。方法：运用RT-PCR及Western blotting方法检测5株大肠癌细胞株中BCL-3的表达状况;构建人BCL-3基因的RNAi慢病毒载体,并转染BCL-3高表达的大肠癌细胞株,运用Western  blotting方法鉴定其对BCL-3基因的沉默效果;BCL-3基因沉默后运用细胞增殖实验及软琼脂克隆形成实验检测其对细胞增殖能力的影响,运用MTT方法检测大肠癌细胞株对化疗药物敏感性的变化。结果：BCL-3高表达于大肠癌细胞株RKO中;成功构建了BCL-3　RNAi慢病毒载体,Western blotting实验显示其可抑制RKO细胞中BCL-3蛋白的表达;抑制BCL-3的表达后,增殖实验表明RKO细胞增殖能力下降,软琼脂克隆形成实验表明RKO细胞的克隆形成率下降;MTT实验表明BCL-3表达抑制后奥沙利铂对RKO细胞的半数抑制浓度（median inhibitory concentration, IC50）显著降低。结论: BCL-3表达抑制后,BCL-3高表达的大肠癌细胞株RKO的增殖能力下降,并且其对奥沙利铂的敏感性增强。     

不同游离脂肪酸通过PI3K/AKT途径对INS-1β细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨饱和脂肪酸棕榈酸(PA)和不饱和脂肪酸油酸(OA)对INS-1β细胞增殖及凋亡的影响。方法INS-1β细胞体外培养,采用MTT法检测细胞增殖,Annexin-Ⅴ/FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡。结果和对照组相比,两种浓度OA均能促进INS-1β细胞生长,其中0.25 mmol/L OA能显著促进细胞生长(<0.05);两种浓度PA对INS-1β细胞生长均有抑制作用,其中0.50 mmol/L PA有显著抑制作用(<0.01)。Z-VAD-fmk能对抗PA对INS-1β细胞生长的抑制作用,LY294002则能促进PA对INS-1β细胞生长的抑制作用,抑制OA对INS-1β细胞生长的促进作用。OA能对抗高糖环境所引起INS-1β细胞的凋亡,而PA能显著增加INS-1β细胞凋亡的比例。结论 PA抑制INS-1β细胞生长并促进其凋亡,而OA对INS-1β细胞则具有保护作用;PA引起的细胞凋亡有依赖Caspase介导的凋亡信号通路,而PI3K/Akt信号通路在胰岛细胞脂性凋亡中对维持应激细胞的生存具有重要意义。