结核分枝杆菌低氧反应蛋白HRP1（Rv2626c）的分泌致病机制初探

  目的  验证结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis, Mtb）基因Rv2626c编码的低氧反应蛋白1（hypoxic response protein 1, HRP1）为分泌蛋白。  方法  从Mtb H37Rv标准毒力株基因组上扩增目的基因并添加His标签;运用扩增产物构建重组质粒,电转入耻垢分枝杆菌（Mycobacterium smegmatis, Ms）（MC2 155）构建重组菌;热诱导重组菌表达蛋白,检测培养滤液及细菌裂解液中蛋白的表达情况,将10 kDa培养滤液抗原（CFP-10）（Ms）和CFP-10（Mtb）设为阳性对照,将胞质蛋白热休克蛋白65（GroEL2）（Mtb）作为阴性对照。  结果  PCR成功扩增 HRP1 、GroEL2（Mtb）、CFP-10（Mtb）、CFP-10（Ms）,并且重组质粒测序峰单一且信号稳定,鉴定重组质粒构建成功。成功构建重组Ms并实现蛋白GroEL2（Mtb）、CFP-10（Mtb）、CFP-10（Ms）、HRP1在Ms中的表达。在重组菌裂解液中和培养基滤液中均检测到目标蛋白HRP1;结果与阳性对照CFP-10一致;阴性对照GroEL2（Mtb）仅在细菌裂解液中检测到,在培养滤液在未检测到。  结论  Mtb基因Rv2626c编码的蛋白HRP1可以通过Ms的分泌系统分泌到细菌外,作为Mtb分泌蛋白,在Mtb致病机制中发挥作用。