肥胖与PPARγ及脂肪因子的研究进展

肥胖，即脂肪细胞数量的过度增加和体积的过度增大，并以体脂的形式储存过多摄入的能量，它是糖尿病、冠心病、高血压、高脂血症等许多严重疾病的共同危险因素。肥胖的发生除与不良生活习惯有关外，遗传因素和胰岛素抵抗是导致肥胖的最主要原因。过氧化物酶体增殖物激活受体（PPARγ）是脂肪细胞基因表达和胰岛素细胞间信号传递的主要调节者，参与脂肪细胞分化和脂代谢调节，与肥胖密切相关。因此，涉及脂肪细胞的过度增殖和分化而造成生成过多脂肪细胞的分子机制，以及脂肪组织分泌的多种细胞因子在机体能量、糖、脂代谢和免疫反应等方面所发挥的调节作用，一直是肥胖和糖尿病研究领域十分关注的问题。     

用聚合酶链反应检测乙肝患者血清中的HBV—DNA

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测了１１４例传梁科门诊病人血清ＨＢＶ－ＤＮＡ，并与ＨＢＶ有关的血清学标志（ＨＢＶＭ）进行了比较。结果证明ＰＣＲ法检测ＨＢＶ－ＤＮＡ较用ＥＬＩＳＡ法检测抗原－抗体更加灵敏、可靠。     

食管癌3p24等位基因LOH及其扩增产物克隆的研究

目的；研究3p24EAβMD位点与食管癌的关系。为寻找该位点附近可能存在的抑癌基因奠定基础。方法：采用PCR—RFLP法检测45例食管癌患者3p24位点杂合缺失情况。并对该片段进行克隆。结果：在22例食管癌信息个体中共检出9例杂合缺失。并通过序列分析可知变化为点突变。结论：3p24EAβMD较高的杂合缺失率显示该位点附近可能存在潜在的抑癌基因。     

异常黑胆质成熟剂及清除剂对氧化应激诱导的淋巴细胞损伤及基因表达影响的比较研究

目的:以H2O2诱导淋巴细胞的氧化应激模型,观察研究异常黑胆质成熟剂及清除剂对活性氧诱导的细胞损伤和Bcl-2蛋白表达的作用效应的差异。方法:用"彗星实验"(SCGE)和MTT法观察异常黑胆质成熟剂及清除剂对氧化应激的淋巴细胞DNA损伤和细胞生长活性的影响;并采用western-blot研究淋巴细胞Bcl-2蛋白的表达。结果:异常黑胆质成熟剂对氧化应激诱导的淋巴细胞DNA和细胞损伤有保护性作用,而清除剂的作用明显不同;异常黑胆质成熟剂能上调Bcl-2蛋白的表达,而清除剂能下调该蛋白的表达,二者的作用相反。结论:异常黑胆质成熟剂及清除剂对氧化应激的淋巴细胞损伤以及细胞凋亡相关基因表达的作用明显不同。     

基质金属蛋白酶-7在哈萨克族食管癌中的表达及其意义

目的 观察哈萨克族食管癌及癌旁组织中基质金属蛋白酶-7的表达,探讨其在哈萨克族食管癌发生、发展,浸润转移中的作用.方法 采用RT-PCR方法检测MMP-7 基因mRNA在20例哈萨克族食管癌组织及其癌旁组织标本中的表达,选取mRNA水平差异组织标本采用Western-bolt方法检测其在蛋白水平的表达情况.结果 20例癌组织中有11例表达阳性,占55%,20例癌旁组织中有8例表达,占40%,其中癌组织表达量明显高于癌旁组织的有8例,占40%;MMP-7蛋白在癌组织中表达高于其相应癌旁组织.结论 MMP-7在哈萨克族食管癌的发生发展中起到一定的作用.     

Survivin基因在哈萨克族食管癌中表达的研究

目的 通过观察凋亡相关基因Survivin在哈萨克族食管癌癌组织及其癌旁组织中的表达来探讨Survivin哈萨克族食管癌发生中的作用.方法采用RT-PCR方法检测Survivin 基因mRNA在20例哈萨克族食管癌组织及其癌旁组织标本中的表达,选取mRNA水平差异组织标本采用Western-bolt方法检测其在蛋白水平的表达情况.结果 Survivin基因mRNA在20例癌组织中有10例表达,阳性率为50%,癌旁组织中仅有4例表达,癌组织与其对应的癌旁组织相比,Survivin基因的表达量均明显高于癌旁组织.Survivin蛋白的表达在癌组织与癌旁组织中无明显差异.结论提示Survivin基因的异常表达主要在转录水平,其对哈萨克族食管癌发生发展过程中的作用有待于进一步研究.     

β2肾上腺素能受体基因R16G多态与哈萨克族男性肥胖的相关性

目的 探讨β2肾上腺素能受体基因R16G多态在哈萨克族人群肥胖发病中所起的作用.方法 应用Taqman技术检测331例哈萨克族正常体重者,380例超重者以及232例肥胖者中ADRB2基因R16G多态性,观察各基因型和等位基因频率在不同BMI水平的分布及其与超重肥胖的关系.结果 哈萨克族正常体重组、超重组与肥胖组组间基因型和等位基因频率的分布无统计学差异,但突变型纯合子基因型频率在哈萨克族超重组及肥胖组有增高趋势;将哈萨克族人群按性别分层并用logistic回归模型校正年龄、血压之后,显示男性组间基因型频率分布存在统计学差异(χ2=8.707, P=0.013),携带突变型纯合子(AA基因型)的个体患肥胖的风险为GG基因型的2.18倍.结论 ADRB2基因R16G多态与哈萨克族男性肥胖相关,AA基因型可能是哈萨克族男性肥胖的风险因子.     

孕血清中早孕因子的分离纯化

目的:通过离子交换层析和亲和层析的分离方法从孕血清中得到纯化的早孕因子(EPF),为进一步制备单克隆抗体做准备。方法:采用依次经过DEAE52阴离子交换层析,SP Sepharose F.F阳离子交换层析,Con ASepharose4B亲和层析和Heparin Sepharose Cl6B亲和层析分离纯化方案,最终得到具有早孕因子活性的Hepa-rin-Ⅱ成分,早孕因子活性采用活性玫瑰花环抑制实验检测,采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定纯化物。结果:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示两条带,相对分子量分别为46.30kDa和10.71kDa。结论:经过四步层析得到较纯的EPF样品,并认为EPF在血清中可以以单体和多聚体形式存在。     

利用染色质隔离子构建人基质金属蛋白酶-12转基因表达载体

目的：在构建巨噬细胞特异表达且带有染色质隔离子的人基质金属蛋白酶-12（hMMP-12）转基因表达载体的基础上构建hMMP-12转基因兔动物模型。方法：首先通过RT-PCR方法扩增hMMP-12基因．产物亚克隆到pGEM—T载体，测序后获得pGEM—T-hMMP-12，然后利用pJC13构建带有染色质隔离子和清道夫受体A增强子、启动子和人生长激素尾的亚克隆pJC13-SR，再利用pGEM-T-hMMP-12和pJC13-SR重组质粒，构建巨噬细胞特异性的转基因表达载体pJCl3-SR．hMMP-12，最后pJCl3-SR—hMMP-12表达载体线性化，显微注射家兔受精卵制备转基因兔，并进行PCR扩增及Southern Blot转基因效果分析鉴定。结果：（1）通过DNA测序和限制性核酸内切酶酶切鉴定证实，hMMP-12成功克隆到所需表达载体中；（2）转基因后获得仔兔36只，以PCR检测结果计算，转基因总效率为1．4％-3．4％，整合率为20％-50％；以Southern Blot检测结果计算，转基因总效率为0．5％．2．2％，整合率为13％～17％。结论：转基图表达载体的成功构建，为hMMP-12转基因兔动物模型的构建和研究MMP-12在动脉粥样硬化的形成和发展中的作用机制奠定了基础。     

哈萨克族食管癌患者3号染色体短臂3p24等位基因杂合缺失的研究

应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术,配合限制片段长短多态现象(restriction fragment length polymorphisms,RFLP)分析,对16例新疆哈萨克族食管癌病人3号染色体短臂3p24等位基因杂合缺失(loss of heterozy-gosity,LOH)进行了测定,并同汉族、维吾尔族食管癌病人3p24杂合缺失进行了比较.结果显示,哈萨克族3p24杂合缺失率为100%(11/11),汉族为42.8%(3/7),维吾尔族为33.3%(1/3).提示3p24EAβMD、EAβH基因座位杂合缺失的检测有可能成为哈萨克族食管癌早期诊断的分子标志.