人抵抗素基因全长的体外拼接及真核表达载体的构建

目的:利用合成的寡核苷酸片段,在体外拼接人抵抗素(Resistin,Retn)基因的全长,并构建其真核表达载体。方法:根据已知抵抗素基因(GenBank:AF323081),设计并合成10条寡核苷酸片段,采用降落PCR方法进行拼接,获得预期大小的PCR产物后将其克隆入pSecTag2B载体进行测序确认。结果:降落PCR法扩增的特异条带与目的基因的大小一致。克隆载体测序结果与GenBank中已知序列完全符合。结论:降落PCR成功地拼接和扩增了人抵抗素全长基因,并构建了含有该基因的真核表达载体,为进一步研究该基因的功能奠定了实验基础。     

HBsAg基因与细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4单链抗体的真核质粒载体构建及表达蛋白活性鉴定

目的 构建HBsAg基因(HBV S)与抗鼠细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)单链抗体(ScFv)的真核质粒载体,并检测融合表达蛋白特异性抗原的结合活性.方法 将CTLA-4单链抗体的真核表达质粒pSect2/ScFv4F10及含HBV S基因的质粒pSect2/S分别经SfiI和HindⅢ双酶切后,S基因片段进一步克隆至质粒pSect2/ScFv4F10中.将质粒pSect2/ScFv40、pSect2/S-ScFv4F10转染中华仓鼠卵巢细胞,Western印迹法检测目的蛋白的表达.将表达的蛋白经超滤浓缩与亲和层析纯化后,分别通过竞争抑制ELISA和表面等离子共振(SPR)技术,检测其与重组小鼠CTLA-4抗原的结合活性及亲合常数.采用One-way ANOVA比较组间差异.结果 成功构建可稳定表达S-ScFv4F10蛋白的真核质粒载体pSect2/S-ScFv4F10.十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western印迹法检测表明,其表达蛋白的相对分子质量约为52×103.当将抗鼠CTLA 4的亲本单链抗体4F10浓度固定时,其与CTLA-4纯化抗原混合反应的吸光度(A)570值随ScFv融合蛋白比例的减少而逐步增大;且当ScFv、S-ScFv4F10与4F10单链抗体以摩尔比为2∶1混合时,其对4F10结合抗原的竞争抑制率分别可达到72.6％和64.5％;亲本单链抗体、ScFv4F10、S-ScFv4n0与重组CTLA-4抗原的结合平衡常数KA值分别为7.29×108mol/L、9.52×106mol/L和2.04×106mol/L,解离平衡常数KD分别为1.40×10-9mol/L、1.05×10-7mol/L和4.91×10-7mol/L.结论 成功构建了HBV S基因与CTLA-4单链抗体ScFv4F10的真核表达质粒载体pSect2/S-ScFv4F10,其表达的蛋白与CTLA-4抗原具有一定的亲和活性.     

以提升学生自主学习能力为导向的组织学实验教学模式改革初探

目的：探讨以提升学生自主学习能力为导向的组织学实验教学模式改革.方法：随机选取2011级临床医学本科（五年制）两个班为实验组,另二个班为对照组,实验组采用新教学法,对照组采用传统教学法,两组实验数据用统计学处理.结果：实验组满意度和及格率分别是92.5％和97.01％,对照组的满意度和及格率分别是87.70％和86.15％,实验组及格率和满意度明显高于对照组（P ＜0.05,P＜0.01）.结论：以提升学生自主学习能力为导向的教学模式在组织学的实验教学应用中效果良好.     

诱导型血红素氧合酶-1在溃疡性结肠炎结肠中的表达

目的研究诱导型血红素氧合酶-1(HO-1)在活动性溃疡性结肠炎(UC)患者结肠中的表达,探讨气体信使分子一氧化碳(CO)在UC发病机制中的可能作用.方法采用免疫组织化学SABC染色法,在符合临床和病理诊断标准的33例UC患者肠镜活检标本中分别检测结肠组织的HO-1的阳性细胞,并设立正常对照组.结果HO-1主要表达在结肠黏膜上皮细胞,UC患者表达明显强于对照组(P＜0.01).结论HO-1在UC患者结肠中的异常表达表明气信使分子CO在UC发病机制中可能起重要作用.