正常猕猴与人的视网膜电图及视觉诱发电位对比研究

目的 研究正常猕猴与人视网膜电图(FERG,PERG)及视觉诱发电位(FVEP,PVEP)的异同.方法 选取通过眼底照相及光学相干断层扫描(OCT)等眼科相关检查确定眼部没有明显异常的正常成年猕猴3只(6眼)及健康成年人8例(16眼),对其FERG、PERG、FVEP、PVEP进行检测和记录,导出数据后运用SPSS 13.0软件行统计学分析.结果 暗适应0.01ERG的b波及暗适应3.0ERG的a波,b波猕猴与人相比峰时明显较短,振幅明显较低(P＜0.05).暗适应Ops的OS2波猕猴与人相比振幅明显较低(P＜0.05).明适应3.0ERG的a波,b波峰时和振幅,明适应30 Hz震荡电位振幅两者差异无统计学意义.FVEP的P2波猕猴与人相比峰时明显较短,振幅明显较高(P＜0.05).PERG猕猴与人相比P50及N95波振幅明显较低(P＜0.05).PVEP的P100波峰时猕猴与人差异无统计学意义,P100波振幅猕猴与人相比较低(P＜0.05).结论 视网膜电图及视觉诱发电位可对猕猴行视功能评价,作为评估人视网膜功能的参照.     

3T3-fGFP细胞摄取神经干细胞胞外泌囊泡的途径

目的 以超速离心方案提取胞外囊泡的鉴定为基础,初步探求小鼠神经干细胞C17.2胞外囊泡与小鼠胚胎成纤维细胞3T3-fGFP细胞之间的通讯交流通路.方法 分别用超速离心法获得胞外囊泡(EV)和Total Exosome Isolation Kit试剂盒获得外泌体(EXO);用透射电镜和原子力显微镜分别对两种样品进行形态学比较;用SDS-PAGE和Western blot分别对两种样品进行生物化学比较;用染料标记超速离心法获得胞外囊泡;将标记的胞外囊泡与3T3-fGFP细胞共孵育,对3T3-fGFP细胞摄取胞外囊泡进行研究;通过药理实验筛选3T3-fGFP细胞摄取胞外囊泡的主要通路.结果 C17.2细胞生长良好,形态规则未出现明显分化现象.在透射电镜下两种样品均观察到圆形双层膜结构和“杯状”外形的囊泡,直径分布多集中在300 nm以内,并且发现胞外囊泡的平均直径大于外泌体.原子力显微镜的结果显示,两种样品的高度分布多集中在2～20 nm以内,直径分布多集中在300 nm以内,并且外泌体的平均高度和平均直径均大于胞外囊泡.SDS-PAGE结果显示两种样品所含蛋白种类、表达丰度接近.在相同上样量下HSP70的表达强度两者接近,但CD63、CD9和CD81 3种蛋白在胞外囊泡中表达更强.摄取实验表明C17.2细胞胞外囊泡可以被3T3-fGFP细胞内化,被包裹在囊泡内,转运到细胞核周围的区域,并且摄取数量随着时间延长而增加(P＜0.05).通过药理实验确定网格蛋白(Clathrin)介导的内吞通路为3T3-fGFP细胞摄取C17.2细胞胞外囊泡的主要通路.结论 小鼠神经干细胞外泌体可能主要经网格蛋白介导的通路参与了神经干细胞与3T3-fGFP细胞的通讯.     

GCaMP基因工程化的C17.2神经干细胞的钙离子成像研究

目的 研究GCaMP(属于基因编码钙指示剂/蛋白钙指示剂)基因工程化的C17.2神经干细胞的钙离子成像.方法 用慢病毒转染C17.2细胞,获得稳定表达GCaMP基因的C17.2-GCaMP细胞.Real-time PCR定量检测C17.2细胞及C17.2-GCaMP细胞中神经干细胞标志物巢蛋白(nestin)的表达情况.将C17.2细胞(Fluo-4 AM染色后)和C17.2-GCaMP细胞置于定制数字荧光显微镜下进行钙离子荧光检测.结果 Real-time PCR检测结果提示C17.2细胞及C17.2-GCaMP细胞中nestin表达差异无统计学意义(P＞0.05).C17.2-GCaMP细胞较Fluo-4 AM染色C17.2细胞钙离子荧光锐波(spike)波形持续时间长且相对荧光强度强(P＜0.05),在Fluo-4 AM染色C17.2细胞中能观察到钙离子荧光慢波(wave)波形,而C17.2-GCaMP wave波形不典型.结论 C17.2-GCaMP细胞在保持神经干细胞干性的同时能够监测细胞内钙离子变化,能够运用于神经干细胞移植治疗视网膜色素变性功能整合的研究.