骨髓间质干细胞抑制大鼠肝纤维化形成的可能性受体肝内干细胞存活时间、肝星状细胞活化程度及生存分析的7周观察

目的观察在体外培养条件下,具有强大的增殖和分化为肝细胞能力的骨髓间质干细胞输注治疗肝纤维化模型大鼠对其肝纤维化形成的影响及肝功能和生存分析,并对治疗组、空白对照组和病理对照组7周内的相关情况予以对照比较.方法实验于2003-08/2004-10在中山大学基础医学院病理学于病理生理实验室完成.①动物分组选用雄性6周龄Wistar大鼠5只为供体,供分离骨髓间质干细胞;雌性6周龄Wistar大鼠60只,其中50只被造成肝纤维化模型,在首次用二甲基亚硝胺处理后的第10天,将造模大鼠随机分为2组骨髓间质干细胞治疗组10只(为受体),于治疗39 d后结束实验,取材分析病理对照组40只.另10只作为空白对照组(仅静脉注射生理盐水).②肝纤维化模型制作在实验的当天,给予10g/L二甲基亚硝胺溶液(生理盐水配置)1 mL/kg,腹腔注射,每周连续3次,共6周.③骨髓间质干细胞治疗组每只大鼠输注3×106个骨髓间质干细胞;病理对照组使用等体积生理盐水代替骨髓间质干细胞.④动物的一般生活状态每天观察饮食、活动、二便、体质量、皮毛、呼吸情况等.⑤肝脏的组织细胞形态结构将肝组织以苏木精-伊红染色后观察.⑥肝星形细胞及其活化程度检测前者检测肝脏α-平滑肌肌动蛋白含量,用免疫组织化学染色法,后者以德国IBAS2.5图像分析软件半定量分析.⑦肝脏胶原分布的相对含量检测采用Masson三色染色法,从而反映肝纤维化程度.⑧肝脏羟脯氨酸含量测定采用氯胺T法.⑨血清总胆红素和谷丙转氨酶水平检测采用全自动生化分析仪.⑩血清层粘蛋白和透明质酸水平测定采用放射免疫法.11雄性大鼠骨髓间质干细胞在雌性大鼠肝内的Y染色体性别决定区基因的表达检测采用聚合酶链式反应.12统计学分析两组样本均数比较采用t检验;多组样本均数比较采用方差分析,两两比较采用q检验;生存分析采用K,plan-Meier法.结果雌性大鼠60只进入结果分析.①实验动物生存状况造模6周后,骨髓间质干细胞治疗组生存率为80%,而病理对照组生存率为10%,空白对照组生存率为100%,说明骨髓间质干细胞治疗可能通过阻止肝纤维化发展,从改而善大鼠的生存率.②肝脏组织学显示,骨髓间质干细胞治疗组的肝脏结构明显改善,炎症减轻、假小叶结构减少或消散.相反,病理对照组出现广泛的肝脏结构重塑,包括增厚的纤维间隔形成和明显的桥接坏死.半定量分析胶原染色,骨髓间质干细胞治疗组较病理对照组显著减低(8.12±1.98,15.71±2.13,t=6.11,P＜0.05).③肝脏星状细胞活化的标志α-平滑肌激动蛋白的阳性表达空白对照组仅见血管壁有少量α-平滑肌激动蛋白的阳性表达,而病理对照组和骨髓间质干细胞治疗组可见在纤维间隔、肝窦和汇管区内明显表达.半定量分析α-平滑肌激动蛋白的阳性染色,骨髓间质干细胞治疗组较病理对照组显著减低(11.06±2.03,18.50±3.87,t=4.47,P＜0.05).④Y染色体性别决定区基因的表达经雄性Wistar大鼠(供体)骨髓间质干细胞治疗39 d的雌性大鼠,肝脏DNA经聚合酶链式反应检测结果显示,Y染色体性别决定区基因的表达阳性,而空白对照组和病理对照组则无此阳性信号.说明骨髓间质干细胞移植后,能够在受体肝内存活5周以上.⑤反映肝脏纤维化程度的肝脏羟脯氨酸含量及血清层黏蛋白和透明质酸水平骨髓间质干细胞治疗组明显高于空白对照组(P＜0 05)但明显低于病理对照组(P＜0.05),说明骨髓间质干细胞治疗后能够减少肝脏胶原蛋白的含量,从而减少肝纤维化的形成,使肝纤维化得到控制.⑥反映肝功能的血清总胆红素、谷丙转氨酶水平骨髓间质干细胞治疗组明显低于病理对照组(P＜0.05),接近空白对照组.说明了骨髓间质干细胞治疗有助于改善肝功能状态.结论①二甲基亚硝胺能成功诱导大鼠肝纤维化模型的建立.②骨髓间质干细胞可改善肝纤维化大鼠的生存状况和肝功能.③骨髓间质干细胞能够减少肝脏胶原蛋白的产生,抑制肝纤维化形成.④肝纤维化发生发展过程中活化态的肝星状细胞数量减少可能是骨髓间质干细胞抑制肝纤维化形成的原因之一.⑤雌性大鼠肝脏内存在雄性供体Y染色体性别决定区基因的信号说明骨髓间质干细胞能够在受体肝内存活5周以上.     

对重型地中海贫血患儿家庭健康教育的意义

目的基于新的健康概念,探讨健康教育对重型地中海贫血(地贫)患儿家庭的作用。方法对64例重型地贫患儿的父母进行地贫认知情况问卷调查和心理分析,并进行相应的心理辅导和地贫知识的健康教育。结果重型地贫患儿的父母大部分缺乏本病的基本知识,存在广泛的心理问题。通过进行地贫知识的健康教育和心理辅导,地贫患儿父母对地贫的认知水平提高,心理问题得到一定的改善。结论开展健康教育有助于提高对本病的认知水平,改善重型地贫血患儿家庭的生活质量。     

骨髓间质干细胞抑制大鼠肝纤维化形成的可能性：受体肝内干细胞存活时间、肝星状细胞活化程度及生存分析的7周观察

目的：观察在体外培养条件下，具有强大的增殖和分化为肝细胞能力的骨髓间质干细胞输注治疗肝纤维化模型大鼠对其肝纤维化形成的影响及肝功能和生存分析，并对治疗组、空白对照组和病理对照组7周内的相关情况予以对照比较。方法：实验于2003-08／2004-10在中山大学基础医学院病理学于病理生理实验室完成。①动物分组：选用雄性6周龄Wistar大鼠5只为供体，供分离骨髓间质干细胞；雌性6周龄Wistar大鼠60只，其中50只被造成肝纤维化模型，在首次用二甲基亚硝胺处理后的第10天，将造模大鼠随机分为2组：骨髓间质干细胞治疗组10只(为受体)，于治疗39d后结束实验，取材分析病理对照组40只。另10只作为空白对照组(仅静脉注射生理盐水)。②肝纤维化模型制作：在实验的当天，给予10g／L二甲基亚硝胺溶液(生理盐水配置)1mL／kg，腹腔注射，每周连续3次，共6周。③骨髓间质干细胞治疗组：每只大鼠输注3&;#215;106个骨髓间质干细胞；病理对照组：使用等体积生理盐水代替骨髓间质干细胞。④动物的一般生活状态：每天观察饮食、活动、二便、体质量、皮毛、呼吸情况等。⑤肝脏的组织细胞形态结构：将肝组织以苏木精-伊红染色后观察。⑥肝星形细胞及其活化程度检测：前者检测肝脏α-平滑肌肌动蛋白含量，用免疫组织化学染色法，后者以德国IBAS2．5图像分析软件半定量分析。⑦肝脏胶原分布的相对含量检测：采用Masson三色染色法，从而反映肝纤维化程度。⑧肝脏羟脯氨酸含量测定：采用氯胺T法。⑨血清总胆红素和谷丙转氨酶水平检测：采用全自动生化分析仪。⑩血清层粘蛋白和透明质酸水平测定：采用放射免疫法。（11）雄性大鼠骨髓间质干细胞在雌性大鼠肝内的Y染色体性别决定区基因的表达检测：采用聚合酶链式反应。（12）统计学分析：两组样本均数比较采用t检验；多组样本均数比较采用方差分析，两两比较采用q检验；生存分析采用Kaplan-Meier法。结果：雌性大鼠60只进入结果分析。①实验动物生存状况：造模6周后，骨髓间质于细胞治疗组生存率为80％，而病理对照组生存率为10％，空白对照组生存率为100％，说明骨髓间质干细胞治疗可能通过阻止肝纤维化发展，从改而善大鼠的生存率。②肝脏组织学显示，骨髓间质干细胞治疗组的肝脏结构明显改善，炎症减轻、假小叶结构减少或消散。相反，病理对照组出现广泛的肝脏结构重塑，包括增厚的纤维间隔形成和明显的桥接坏死。半定量分析胶原染色，骨髓间质干细胞治疗组较病理对照组显著减低(8．12&;#177;1．98．15．71&;#177;2．13，t=6．11，P&;lt;0．05)。③肝脏星状细胞活化的标志α-平滑肌激动蛋白的阳性表达：空白对照组仅见血管壁有少量α-平滑肌激动蛋白的阳性表达，而病理对照组和骨髓间质干细胞治疗组可见在纤维间隔、肝窦和汇管区内明显表达。半定量分析α-平滑肌激动蛋白的阳性染色，骨髓间质干细胞治疗组较病理对照组显著减低(11．06&;#177;2．03，18．50&;#177;3．87，t=4．47，P&;lt;0．05)。④Y染色体性别决定区基因的表达：经雄性Wistar大鼠(供体)骨髓间质干细胞治疗39d的雌性大鼠，肝脏DNA经聚合酶链式反应检测结果显示，Y染色体性别决定区基因的表达阳性，而空白对照组和病理对照组则无此阳性信号。说明骨髓间质干细胞移植后，能够在受体肝内存活5周以上。⑤反映肝脏纤维化程度的肝脏羟脯氨酸含量及血清层黏蛋白和透明质酸水平：骨髓间质干细胞治疗组明显高于空白对照组(P&;lt;0．05)但明显低于病理对照组(P&;lt;0．05)，说明骨髓间质干细胞治疗后能够减少肝脏胶原蛋白的含量，从而减少肝纤维化的形成，使肝纤维化得到控制。⑥反映肝功能的血清总胆红素、谷丙转氨酶水平：骨髓间质干细胞治疗组明显低于病理对照组(P&;lt;0．05)，接近空白对照组。说明了骨髓间质干细胞治疗有助于改善肝功能状态。结论：①二甲基亚硝胺能成功诱导大鼠肝纤维化模型的建立。②骨髓间质干细胞可改善肝纤维化大鼠的生存状况和肝功能。③骨髓间质干细胞能够减少肝脏胶原蛋白的产生，抑制肝纤维化形成。④肝纤维化发生发展过程中活化态的肝星状细胞数量减少可能是骨髓间质干细胞抑制肝纤维化形成的原因之一。⑤雌性大鼠肝脏内存在雄性供体Y染色体性别决定区基因的信号说明骨髓间质干细胞能够在受体肝内存活5周以上。     

血清补体活性和C反应蛋白水平及血小板计数与全身炎症反应综合征的预后

目的　探讨全身炎症反应综合征 (SIRS)患儿血清补体 (C3 、C4 )活性、C反应蛋白 (CRP)水平及血小板计数变化的临床意义。方法　采用前瞻性研究方法 ,用全自动免疫比浊定量分析法和全自动血细胞计数仪测定 6 8例SIRS患儿血清C3 、C4 、CRP水平和血小板计数及其动态变化。　结果SIRS患儿首次测定的血清C3 [(4 0 6± 1 0 9)g/L]、C4 [(1 6 4± 0 89)g/L]、CRP[(5 7± 2 0 )g/L]及血小板计数 [(6 10± 140 )× 10 9/L]均显著高于非SIRS患儿组和正常对照组 (F分别为 2 77 4、10 2 0、2 2 7 0及196 2 ,P <0 0 5或 <0 0 1) ,但非SIRS患儿组和正常对照组四组参数比较差异均无显著意义 (P >0 0 5 )。动态观察发现 :SIRS组病情好转后四项参数均较好转前低 (C3 、C4 、CRP及血小板成对比较的t值分别为 14 9、8 9、14 7及 18 0 ,P <0 0 1) ;而恶化组CRP持续升高、C3 、C4 和血小板计数持续下降 ,明显不同于好转前 (C3 、C4 、CRP及血小板计数的成对比较t值分别为 8 0、4 7、2 4及 11 4,P <0 0 5或 <0 0 1)。而且病情恶化组SIRS患儿病情变化后C3 、C4 和血小板水平均低于好转组 [C3(1 5 4± 0 6 8)g/L与 (0 86± 0 6 7)g/L ,P <0 0 5 ;C4 (0 45± 0 2 3)g/L与 (0 2 5± 0 0 9)g/L ,P <0 0 5 ;血     

骨髓间质干细胞对大鼠移植物抗宿主效应和脾脏结构的影响

【目的】探讨骨髓间质干细胞（MSC）对同种大鼠骨髓移植后移植物抗宿主反应（GVHD）的影响，尤其是MSC对脾脏结构重建的作用。【方法】建立Fischer344（RT-1A1）大鼠至Wistar（RT-1Au）大鼠的同种异体骨髓移植模型，观察移植后大鼠的基本生活情况，病理学分析靶器官皮肤、肝脏、肠道和脾脏的组织学改变，尤其注意MSC对同种骨髓移植后脾脏结构重建的影响。【结果】①在移植后30d的观察期内，共移植组显示较高的生存率。②组织学分析显示：在共移植组，靶器官皮肤、肝脏、肠道的损伤相对较轻。③脾脏组织学分析显示：在骨髓与MSC共移植组，受体脾脏结构接近正常；在单纯骨髓移植组，受体脾脏白髓萎缩，动脉周围淋巴鞘只有少量T细胞，无典型脾小结形成。【结论】MSC与骨髓共移植对GVHD有抑制作用，并显著促进脾脏结构重建。     

血小板指数、血沉及CRP在不典型川崎病中的变化及意义

目的探讨不典型川崎病(KD)患儿血小板数(PLT)、血小板平均体积(MPV)、血小板体积分布宽度(PDW)、血沉(ESR)及C-反应蛋白(CRP)的变化。方法取疾病组38例及对照组38例静脉血用自动血液分析仪测定血小板指数、血沉及CRP。结果在不典型KD急性期PLT、MPV、PDW、ESR、CRP均与对照组有显著性差异(p<0.01);急性期中PLT、MPV及血沉与恢复期有显著性差异(p<0.01),CRP与恢复期有差异(p<0.05),PDW与恢复期无显著性差异(p>0.05);恢复期PLT、MPV、PDW、ESR、CRP均与对照组有显著性差异(p<0.01)。结论血小板指数、血沉及CRP对早期诊断、治疗和减少不典型KD并发症有临床意义。     

感觉统合失调儿童的气质特征及中医辨证分型

目的:探讨感觉统合失调(SID)儿童的气质特征与中医辨证分型的关系。方法:对92例SID儿童采用儿童气质量表家长问卷法(PTQ)进行气质分析及中医辨证分型。以41例正常儿童作为对照组。结果:SID组儿童中难养型(D型)气质的比例明显高于正常对照组(34.8%vs 9.8%);从气质纬度上分析可见SID组的规律性、适应性、情绪本质3个因子分值显著低于对照组儿童;而活动水平、反应强度2个因子分值高于对照组儿童;中医辨证分型显示SID组儿童实证与虚证的发生率分别为18.5%与81.5%;进一步分析显示实证组儿童的D型气质比例明显高于虚证组。结论:SID儿童在气质类型及纬度上与正常儿童存在明显差异,中医辨证分型实证与虚证的发生率高,实证型中多为难养型儿童。     

巨核细胞白血病发生与细胞因子网络失衡相关性研究

 目的　了解巨核细胞白血病细胞因子的表达谱系。方法　用RT PCR方法结合Southern印迹检测 4个分化程度不同的巨核细胞株Meg 0 1、Dami、CHRF 2 88 11、与M 0 7e的多个细胞因子表达情况 ,并比较它们之间的差异性。结果　 4个巨核细胞白血病细胞株均表达自分泌生长因子IL 1β、IL 3、IL 6 ,涉及免疫炎症反应的细胞因子IL 1α、IL 5和IL 12 p4 0仅在细胞分化程度高的Meg 0 1中表达 ,而且 4个巨核细胞株也存在不同的细胞因子表达谱系。结论　巨核细胞白血病的发生与细胞因子网络的失衡可能具有密切的关联性 ,值得今后在巨核细胞白血病病人的临床诊疗过程中进一步关注     

综合疗法治疗肾病综合征的临床研究

目的　观察综合疗法治疗原发性肾病综合征 (NS)的临床疗效。方法　治疗组 32例采用中药内服、中药浸浴、中药药膳加用激素的综合疗法治疗 ,对照组 30例单纯采用激素治疗 ,观察 2组疗效。结果　治疗组总有效率 88% ,对照组总有效率为 6 3% ,治疗组明显优于对照组 (P <0 .0 5 ) ;治疗组治疗后 2 4h尿蛋白、血浆白蛋白、总胆固醇、三酰甘油较治疗前及对照组有明显改善 (P <0 .0 1)。结论　综合疗法在改善NS症状、消除蛋白尿、提高血清白蛋白、消除水肿、改善血脂代谢方面具有一定优势 ,为中医药治疗NS提供了新的途径     

巨核细胞的免疫学研究

巨核细胞的免疫学作用鲜被研究,本研究观察巨核细胞的粘附分子和细胞因子表达,以及细胞因子与巨核细胞的相互作用,以了解巨核细胞的免疫学作用。使用流式细胞术,ＥＬＩＳＡ和免疫组化方法,分析粘附分子ＣＤ３６在血小板、骨髓巨核细胞和巨核细胞株（Ｍｅｇ－０１,Ｄａｍｉ,ＣＨＲＦ－２８８－１１和Ｍ－０７ｅ）的表达;使用ＲＴ－ＰＣＲ方法,检测白细胞介素１（ＩＬ－１）至白细胞介素１０（ＩＬ－１０）,ＴＮＦ－α,ＴＮ