P53基因在电离辐射诱导的非小细胞肺癌细胞死亡中的作用

目的研究p53基因在电离辐射诱导的非小细胞肺癌细胞死亡中的作用。方法选取H1299（p53-/-）,H1299-P53,H1299-175H细胞为研究对象。采用流式细胞术检测细胞凋亡率,WESTERN BOLT方法检测相关蛋白表达情况。结果在H1299（P53-/-）细胞中,4GY、8GY照射后细胞凋亡率分别是假照组的68.4%、50%。在H1299-P53细胞中,4GY、8GY照射后细胞凋亡率分别是假照组的1.7倍、8.1倍。在H1299-175H细胞中,4GY8、GY照射后细胞凋亡率分别是假照组的1.5倍、2倍。LC3蛋白表达在H1299呈现剂量依赖性升高,在H1299-175H呈现剂量依赖性降低,在H1299-P53中,OGY表达最高,4 GY表达最低,8 GY表达低于假照组但比4 GY高。AKT表达在H1299细胞呈剂量依赖性降低,H1299-P53在4GY表达量升高而在8GY又降低但仍高于假照组,在H1299-175H细胞中AKT表达呈剂量依赖性降低。MDM2在H1299的表达呈剂量依赖性升高,在H1299-P53细胞中呈现与AKT相同的变化趋势,在H1299-175H细胞中4GY时表达量最高8GY最低。Caspase-3在H1299细胞中随着照射剂量的增加变化不明显,在H1299-P53细胞中呈现剂量依赖性升高,在H1299-175H细胞中,0 GY表达最高,4 GY表达最低,8 GY低于假照组但高于4 GY组。结论 X射线促进P53（-/-）的H1299细胞时发生自噬,而促进H1299-P53及H1299-175H中发生凋亡。     

电离辐射对卵巢癌细胞SKOV3中Beclin 1基因的影响

自噬(autophagy)是指细胞通过溶酶体对自身结构的吞噬降解,实现细胞的代谢需要和某些细胞器的更新.当自噬调控机制发生异常时,将导致细胞功能改变,甚至引起细胞死亡,即自噬性细胞死亡[1-3].Beclin 1又称BECN1,是最早被发现的哺乳动物调控自噬性死亡的基因,与酵母自噬基因ATG6同源,位于人染色体17q21上,编码一个含有450个氨基酸、相对分子质量为60×103的蛋白质[4].Beclin 1是自噬调节通路中重要的自噬调节基因,是一种双等位抑癌基因,与传统的抑癌基因不同,只有在双等位基因都表达时才能够发挥抑癌作用,其杂合性缺失可明显导致肿瘤的发生[5].有研究表明,Beclin 1在人类散发性前列腺癌中下降40％,在乳腺癌中下降50％,在卵巢癌中下降达到了75％[6].本实验中,通过基因工程的方式构建Beclin 1基因的过表达模型和干扰模型,在基因水平改变Beclin 1的表达,通过检测电离辐射后Beclin 1的表达变化,探讨其在自噬中的作用,从而为辐射联合基因治疗提供理论依据.     

分割剂量电离辐射对卵巢癌细胞多药耐药的影响

目的 研究不同分割剂量电离辐射方案对卵巢癌细胞多药耐药性的影响.方法 采用卵巢癌亲本细胞SKOV3及其耐药细胞株SKVCR,分别进行假照射、单次照射(10 Gy)、常规分割照射(2 Gy ×5)和超分割照射(1 Gy×2 ×5).MTT方法检测细胞对4种化疗药物硫酸长春新碱( vincristine,VCR)、依托泊苷(etoposide,VP-16)、盐酸吡柔比星(pirarubicin,THP)和顺铂(cisplatin,DDP)敏感性的变化.Western blot检测P-gp蛋白表达量.结果 与SKOV3相比,SKVCR倍增时间增加为1.8倍,P-gp糖蛋白表达增高,4种药物对SKVCR的IC50浓度明显增加(P＜0.05).在SKOV3中,与假照组相比,单次照射后细胞对THP、DDP药敏性降低,常规分割照射后细胞对VCR、THP、VP-16药敏性降低,超分割照射使VP-16药敏性降低;在SKVCR中,与假照组相比,3个照射组对VCR、VP-16的药敏性增高,对DDP的药敏性无明显改变,单次和分割照射均可降低P-gp表达.结论 单次、分割和超分割照射在SKOV3亲本细胞中诱导多药耐药,在耐药株SKVCR中逆转对VCR、VP-16的耐药性.     

Gadd45与基因组稳定性

Gadd45基因是生长抑制及DNA损伤诱导基因家族中的一员,是电离辐射效应基因之一,在细胞周期调控、DNA损伤修复及细胞凋亡过程中发挥重要作用,这使它成为维持基因组稳定性的重要基因,在肿瘤细胞存活、凋亡信号通路中发挥错综复杂的作用,从而参与肿瘤的发生和发展.     

罗布麻提取物对动脉粥样硬化早期TNF-α表达的影响

目的：通过观察罗布麻提取物对动脉粥样硬化早期炎症因子肿瘤坏死因子（TNF）-α表达的影响,研究罗布麻抗动脉粥样硬化的作用。方法人 U937单核细胞经佛波脂诱导分化为巨噬细胞,与100 mg/L氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）作用形成泡沫细胞,建立动脉粥样硬化早期模型（ox-LDL组）,加入不同浓度（0．2、0．4、0．8 mg/L）的罗布麻共同孵育48 h（AV1、AV2、AV3组）,ELISA和 RT-PCR方法分别检测细胞上清液中 TNF-α表达水平。结果 ox-LDL组较对照组 TNF-α的表达明显增加,AV1、AV2、AV3组较ox-LDL组 TNF-α明显减少（P＜0．05）。罗布麻浓度的增加与 TNF-α表达水平呈负相关（P＜0．05）。结论 TNF-α是动脉粥样硬化早期重要的炎症因子,罗布麻通过抑制炎症因子发挥抗动脉粥样硬化作用。     

单细胞凝胶电泳用于放射工作者DNA损伤评价的研究

目的 评价不同级别医院放射工作人员的DNA损伤情况,探讨不同工种、工龄与DNA损伤程度之间的关系。方法 用碱性单细胞凝胶电泳技术检测放射组和对照组外周血淋巴细胞的DNA单链断裂水平。CASP软件分析彗星图像,主要观察彗星尾部DNA百分含量(TDNA%)、彗星尾长(TL)、尾矩(TM)和Olive尾矩(OTM)等指标。 结果 放射组的TDNA%,TL、TM、OTM明显高于对照组(F=3.93, P<0.01),不同工种、工龄间均有统计学差异(F=1.83, P<0.05),不同级别医院之间放射工作者上述指标也差异存在统计学意义(F=1.91,P<0.05)。结论 所观察医院的放射工作者外周血淋巴细胞DNA均存在不同程度的损伤,高级别医院略好于低级别医院,而且DNA损伤程度与放射工龄和工种有一定的相关性。     

脱氧胞苷激酶对HeLa细胞放化疗敏感性的影响

目的：研究脱氧胞苷激酶（DCK）对人宫颈癌细胞HeLa药物敏感性与辐射敏感性的影响,为宫颈癌的基因治疗提供理论依据。方法：采用FuGENE 6转染HeLa细胞构建细胞模型,实验分为空白对照组、空载体阴性对照组及DCK基因沉默（siRNA）组,实时荧光定量PCR及Western blotting检测转染前后DCK mRNA及蛋白的表达变化,细胞计数法检测细胞的增殖情况,MTT法检测细胞对阿糖胞苷（AraC）的药物敏感性,克隆形成实验检测细胞的辐射敏感性。结果: 与空白对照组及阴性对照组比较,siRNA转染HeLa细胞后DCK mRNA及蛋白表达水平明显降低 (P<0.05);3组细胞生长曲线无明显差异;siRNA组HeLa细胞对AraC药物的敏感性降低,辐射敏感性增高(P<0.05)。结论：抑制DCK基因表达可以降低宫颈癌细胞对药物的敏感性,增强辐射敏感性。     

单细胞凝胶电泳用于放射工作者DNA损伤评价的研究

目的 评价不同级别医院放射工作人员的DNA损伤情况,探讨不同工种、工龄与DNA损伤程度之间的关系.方法 用碱性单细胞凝胶电泳技术检测放射组和对照组外周血淋巴细胞的DNA单链断裂水平.CASP软件分析彗星图像,主要观察彗星尾部DNA百分含量(TDNA%)、彗星尾长(TL)、尾矩(TM)和Olive尾矩(OTM)等指标.结果 放射组的TDNA%,TL、TM、OTM明显高于对照组(F=3.93.P<0.01),不同工种、工龄间均有统计学差异(F=1.83,P<0.05),不同级别医院之间放射工作者上述指标也差异存在统计学意义(F=1.91,P<0.05).结论 所观察医院的放射工作者外周血淋巴细胞DNA均存在不同程度的损伤,高级别医院略好于低级别医院,而且DNA损伤程度与放射工龄和工种有一定的相关性.     

电离辐射对破骨细胞分化过程中RANK表达的影响及其致骨损伤的分子机制

目的：研究电离辐射对破骨细胞分化过程中核因子κB受体活化因子(RANK) mRNA和蛋白表达的影响,探讨辐射导致骨损伤的分子机制。方法：采用50 μg•L-1 核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导RAW264.7细胞分化为破骨细胞。RQW264.7细胞分为对照组(未处理)、RANKL处理组(50 μg•L-1RANKL处理)、照射处理组(2 Gy γ射线照射)、照射联合RANKL处理组(50　μg•L-1RANK处理+2 Gy γ射线照射)。采用抗酒石酸磷酸酶(TRAP）染色法检测各组破骨细胞的分化状态;采用PCR法检测各组细胞中RANK mRNA的表达水平;采用Western blotting法检测各组细胞中RANK蛋白的表达水平。 结果：RAW264.7细胞经过RANKL诱导7 d后,TRAP染色呈现阳性,表明已经成功分化成为破骨细胞。与对照组比较,RANKL处理组和照射处理组破骨细胞前体细胞中RANK mRNA和蛋白的表达水平上调（P<0.05）;与RANKL处理组比较,照射联合RANKL组破骨细胞前体细胞中RANK mRNA和蛋白表达水平降低（P<0.05）。结论：电离辐射可以促进破骨细胞前体细胞的增殖和成熟,增加其活性,但是对破骨细胞的增殖、成熟与活性却有一定的抑制作用。
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逍遥散加味治疗妇科崩漏的体会

<正> 崩漏,妇女不在行经期间,阴道大量出血,或持续下血,淋漓不断者,是多种妇科疾病所表现的共有症状。是由于情志不舒,脾虚肝郁血热而致冲任损伤,不能制约经血所致。近年来,本人应用逍遥散加味治疗崩漏36例,疗效满意。1.临床资料 已婚经产和未产妇及少数未婚妇女,年龄最大者54岁,最小者20岁。病程最短2个月,病程最长4年。2.治疗方法 崩漏证多为暴崩下血,或淋漓不绝,色紫有块。治疗宜养血清热解郁为主。方用丹栀逍遥散去薄荷、生