HPLC法测定泽泻汤中泽泻醇A、泽泻醇B和23-乙酰泽泻醇B含量

目的:建立高效液相色谱(HPLC)分析方法同时测定泽泻汤中泽泻醇A、泽泻醇B和23-乙酰泽泻醇B的含量。方法:水煎法制备泽泻汤溶液。HPLC法检测泽泻汤中3种有效成分泽泻醇A、泽泻醇B和23-乙酰泽泻醇B的含量,并进行方法学考察。选用Agilent HC-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-水(78∶22)为流动相等度洗脱,柱温30℃,体积流量1 ml/min,紫外检测器检测波长220 nm,进样量10μl。结果:泽泻醇A在8.3～166.0μg/ml、泽泻醇B在5.4～107.0μg/ml、23-乙酰泽泻醇B在9.3～186.0μg/ml范围内线性关系良好。重复性实验(n=6)泽泻醇A、泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇B的相对标准偏差(RSD)分别为2.37%、2.17%、2.16%;稳定性实验RSD均0.2%;日内/日间精密度实验RSD均1.1%;三者的平均加样回收率分别为99.31%、101.52%、101.76%,RSD分别为2.06%、2.79%、1.66%。测定制备的3批泽泻汤溶液中泽泻醇A、泽泻醇B和23-乙酰泽泻醇B的平均含量分别为139.2、615.1、423.9μg/ml。结论:该方法操作简便,重复性和稳定性好,精密度高,适用于泽泻汤中泽泻醇A、泽泻醇B和23-乙酰泽泻醇B的含量测定。     

HPLC法检测茵陈五苓散中3种有效成分的含量

目的:建立高效液相色谱(HPLC)分析方法测定茵陈五苓散中绿原酸、新绿原酸、异绿原酸A的含量。方法:水煎法制备茵陈五苓散溶液。采用HPLC法检测茵陈五苓散溶液中3种成分新绿原酸、绿原酸、异绿原酸A的含量,并进行方法学考察。选用Agilent HC-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,柱温30℃,体积流量1 ml/min,紫外检测器检测波长327 nm,进样量10μl。结果:新绿原酸在0.66～6.56μg/ml、绿原酸在5.61～56.10μg/ml、异绿原酸A在1.22～12.15μg/ml范围内线性关系良好。重复性实验(n=6)新绿原酸、绿原酸、异绿原酸A的RSD分别为2.11%、1.65%、1.84%;日内/日间精密度实验RSD均0.87%;稳定性实验RSD均0.60%;3种成分的平均加样回收率分别为102.66%、101.68%、100.96%,RSD分别为1.30%、1.90%、0.97%,均符合测定要求。测得制备的3批茵陈五苓散溶液中新绿原酸、绿原酸和异绿原酸A的平均含量分别为30.790、120.104、51.812μg/ml。结论:该方法操作简便,重复性和稳定性好,精密度高,适用于茵陈五苓散中以上成分的含量测定。     

基于尿液代谢组学的土三七诱导大鼠肝损伤的机制研究

目的:采用代谢组学技术检测土三七干预后大鼠尿液中内源性代谢物的变化,分析土三七诱导大鼠肝脏损伤的可能机制。方法:12只SD大鼠,随机分为对照组和土三七组,每组6只。土三七组大鼠灌胃给予7.5 g·kg-1·d-1土三七水煎液,对照组大鼠灌胃给予等体积纯净水,连续给药14 d。末次给药后,代谢笼收集大鼠尿液,并分离大鼠血清和肝脏组织。生化分析仪检测血清ALT、AST、TBIL和TG水平; HE染色后光镜下观察肝组织病理形态学变化。液质联用(LC-MS)技术检测尿液样本,主成分分析评价组间代谢谱差异,筛选并鉴定差异性代谢物,分析代谢通路。结果:与对照组比较,土三七组大鼠血清ALT、AST和TBIL水平显著增高(P0.05,P0.01); HE染色结果显示,土三七组大鼠肝组织结构破坏,细胞排列紊乱,有炎性细胞浸润。代谢组学分析显示,组间代谢谱差异明显,尿液样本中共鉴定出马尿酸、苯丙氨酸、N-甲基烟酰胺、氧化三甲胺等40个差异代谢物,涉及缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸生物合成,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成,苯丙氨酸代谢,烟酸和烟酰胺代谢,Vit B2代谢等主要代谢通路。结论:土三七诱导大鼠肝脏损伤,其机制可能与苯丙氨酸生物合成和代谢、烟酸和烟酰胺代谢、Vit B2代谢等有关。     

花旗松素预防CCl_4致大鼠急性肝损伤的代谢组学研究

目的从代谢组学的角度探讨预防给药花旗松素对CCl_4造成的大鼠急性肝损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法Wistar大鼠30只,随机分为正常组、模型组和花旗松素组,每组10只。正常组和模型组灌胃给予浓度为0.5%的CMC-Na溶液,花旗松素组每天灌胃给予含花旗松素(150μg/g)的CMC-Na溶液,连续灌胃给药14天。末次给药后2 h,模型组和花旗松素组腹腔注射CCl_4造成大鼠急性肝损伤,造模后24 h取血及肝脏,计算肝指数,测定大鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST),测定大鼠肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量,并进行病理组织学观察,采用液相色谱-质谱联用技术(LC/MS)分析其代谢谱变化,并鉴定差异性代谢物。结果与正常组比较,模型组大鼠的肝指数增加(P0.01),ALT、AST增高(P0.01),SOD活性降低(P0.01),MDA水平增高(P0.05),肝组织的损伤明显。与模型组比较,花旗松素组肝指数降低(P0.01),ALT、AST水平降低(P0.01),SOD活性升高、MDA水平降低(P0.05),肝组织的损伤程度减轻。与正常组比较,模型组中存在差异性代谢物12种:牛磺胆酸、胆酸、去氧胆酸、苏氨酸、焦谷氨酸、谷氨酸盐、PE(16∶0)、二十二碳五烯酸、PE(18∶1)、PE(18∶2)、PS(18∶1)和PS(18∶2),给药花旗松素后这些差异性代谢物有回调趋势。结论花旗松素对CCl_4造成的化学性肝损伤具有保护作用,其机制可能与抗脂质过氧化,调节胆汁酸代谢、氨基酸代谢、脂肪酸代谢和甘油磷脂代谢紊乱有关。     

基于LC- MS的四氯化碳致大鼠急性肝损伤的脂质组学研究

目的:基于液相色谱-质谱联用(LC-MS)技术从脂质组学的角度探讨四氯化碳(CCl_4)致大鼠急性肝损伤的作用机制。方法:取Wistar大鼠12只,随机分为正常组和模型组,每组6只。模型组大鼠单次腹腔注射50%CCl_4诱导急性肝损伤,给药剂量为1 ml/kg;正常组大鼠腹腔注射等体积橄榄油。给药24 h后,采集血清样本,分离肝大叶。生化分析仪检测血清ALT、AST、TG、HDL和LDL水平;HE染色后光镜下观察肝组织病理形态学变化;LC-MS检测血清样本,采用多元统计分析(主成分分析和正交偏最小二乘法判别分析)比较两组间脂质代谢谱差异,并筛选差异性脂质代谢物。结果:与正常组比较,模型组大鼠ALT和AST水平显著升高(P0.01),TG含量明显降低(P0.05)。HE染色可见模型组大鼠的肝细胞肿大、坏死,伴有明显的炎症浸润。脂质组学分析显示,两组间脂质代谢谱差异明显,共找出80个差异性脂类成分;进一步经S-plot图比对,筛选出34个差异最为显著的脂质代谢物,其中15个属于磷脂酰胆碱类,6个属于三酰甘油类,4个属于磷脂酰乙醇胺类,2个属于溶血磷脂酰胆碱类,2个属于鞘氨醇类,5个属于血小板激活因子。结论:脂质组学研究揭示CCl_4诱导急性肝损伤的机制与磷脂及三酰甘油代谢紊乱相关。     

紫荆皮提取物抗类风湿性关节炎作用的研究

目的研究不同极性紫荆皮提取物对佐剂性关节炎大鼠的抗炎作用。方法分别使用水和不同极性乙醇提取紫荆皮药材粉末,并使用PLC-Q-TOF-MS全扫采集特征图谱。采用小鼠耳肿胀和醋酸扭体实验对提取物抗炎活性进行初筛。采用完全弗氏佐剂(CFA)建立佐剂性关节炎大鼠模型(AA)。将雄性SD大鼠随机分成正常组、模型组、甲氨蝶呤组、紫荆皮水提物组、紫荆皮75%醇提物组。观察大鼠外观变化,测量体质量增长,炎症指数,足肿胀程度,胸腺指数和脾脏指数;用ELISA法测定炎症因子测定TNF-α(肿瘤坏死因子)和白细胞介素IL-1β、IL-6、IL-10水平。结果采用水、75%乙醇和95%乙醇提取得到的浸膏含有量分别为14.28%、20.12%、18.13%,UPLC-Q-TOF-MS特征图谱结果显示,以75%乙醇提取得到的化学成分最多。小鼠耳肿胀和醋酸扭体实验中,模型组小鼠肿胀明显,阳性药吲哚美辛(10 mg/kg)能够有效抑制炎症和疼痛,紫荆皮提取物(5 g生药/kg)以醇提物效果最佳。佐剂型关节炎实验中,模型组大鼠精神萎靡、毛发暗淡、后足红肿,行动受限,体质量增长明显下降(P<0.01),炎症指数升高...     

UPLC-MS/MS同时测定大鼠脑微透析样品中11个神经递质含量北大核心CSCD

应用超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)建立一种测定大鼠脑透析液中乙酰胆碱、谷氨酸、甘氨酸、去甲肾上腺素等11个神经递质的检测方法。取大鼠脑透析液20μL,加入乙腈-水(4∶1)60μL稀释,离心10 min(10000 r·min^(-1)),取5μL进行UPLC-MS/MS分析。选用Waters ACQUITY BEH amide色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),柱温35℃,流动相为乙腈-0.2%甲酸水溶液,采用梯度洗脱法,流速0.35 mL·min^(-1)。离子源为电喷雾离子源,扫描模式为正离子模式,分析时间(duration)为3.5 min,多反应监测模式(MRM)。并应用该方法考察了11个神经递质的体外探针回收率与灌流速度/神经递质浓度水平之间的关系,以及考察葛根素单用及合用冰片后对大鼠纹状体中11种神经递质含量的影响。结果表明该方法线性关系良好,线性相关系数均大于0.99,最低定量限均小于12.5 nmol·L^(-1),11个神经递质的批内及批间精密度RSD均小于9.3%,准确度RE在-8.4%~9.5%。稳定性、回收率和基质效应等均符合生物样品分析要求。实验表明,给于葛根素之后大鼠脑纹状体内的大部分神经递质水平相较空白组发生了明显的改变;而大鼠同时给予冰片及葛根素之后,除多巴胺、去甲肾上腺素外,其余神经递质的变化程度较单用葛根素的变化程度小。该研究建立的UPLC-MS/MS分析方法能够对透析样品中11个神经递质完成定量检测,为考察健康和疾病动物模型中神经递质的变化提供了高效的检测方法。