共表达siRNA-Stat3与GRIM-19质粒的构建及其功能研究

目的：构建共表达siRNA-Stat3和GRIM-19质粒,观察其对人前列腺癌PC-3M细胞增殖能力的影响。方法：以基因重组技术构建共表达siRNA-Stat3和GRIM-19质粒;应用真核细胞转染技术转染人前列腺癌PC-3M细胞,半定量RT-PCR法检测共表达质粒Stat3和GRIM-19 mRNA水平的变化,细胞增殖实验观察其对前列腺癌细胞增殖能力的影响。结果：酶切鉴定证实成功构建siRNA-Stat3和GRIM-19共表达质粒;与对照组比较,实验组前列腺癌细胞Stat3 mRNA表达显著降低,GRIM-19 mRNA表达显著升高（P<0.01）;实验组前列腺癌细胞增殖率明显降低（P<0.05）。结论：成功构建siRNA-Stat3和GRIM-19共表达质粒,其对前列腺癌细胞株具有显著的生长抑制作用。     

吸烟相关剂量镉对大鼠心肌的损伤作用及其分子机制

目的：建立吸烟相关剂量镉的大鼠模型,研究吸烟相关剂量的镉对大鼠心肌的损伤作用,并进一步探讨其可能的分子机制。方法：建立吸烟相关剂量镉的Wistar大鼠模型作为模型组,同时设立生理盐水对照组,分别于20、36和52周处死大鼠,应用ICP-MS检测心肌组织中镉的蓄积量;绘制脏器系数曲线;生化试剂盒检测心肌组织肌酸激酶（CK）和乳酸脱氢酶（LDH）含量;生化试剂盒检测心肌组织超氧化物歧化酶（SOD）的活性和谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）的含量;病理组织切片观察心肌形态改变;RT-PCR检测凋亡相关基因caspase-3、bcl-2及bax的变化;Western blotting 检测凋亡相关蛋白caspase-3、bax、caspase-9及Fas的变化。结果：与对照组比较,模型组心肌组织镉含量在36和52周蓄积增加,差异有统计学意义（P<0.05）;模型组心肌组织脏器系数在20和36周有略微下降趋势,52周下降明显,差异有统计学意义（P＜0.05）;模型组心肌组织中CK含量在20、36和52周含量均明显增加,差异有统计学意义（P<0.05）;LDH含量在36和52周明显增加,差异有统计学意义（P<0.05）;模型组心肌组织SOD活性分别在36和52周明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）;GSH的含量在20、36和52周明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）;MDA的含量以20、36和52周明显上升,差异有统计学意义（P<0.05）。电镜观察显示,模型组有心肌细胞紊乱、结缔组织局灶性增生等改变。RT-PCR和Western blotting结果显示,与对照组比较,模型组心肌组织caspase-3、bax和Fas的表达明显增加（P<0.05）,bcl-2表达明显减少（P<0.05）。结论：吸烟相关剂量镉通过心肌酶CK和LDH的泄漏,造成心肌组织氧化损伤,对心肌产生毒性作用,并最终导致心肌细胞凋亡的发生。     

肌肽对高糖环境下肾小球系膜细胞增殖的影响及机制

目的探讨肌肽(carnosine)对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞(rat mesangial cells,RMCs)增殖的影响及作用机制。方法以RMCs为研究对象,分别采用MTT法和BrdU-ELISA法观察肌肽对高糖诱导的RMCs增殖的影响;乳酸脱氢酶(LDH)法检测肌肽对细胞的毒性作用;酶生化法测定丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)含量及细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性等。结果肌肽可显著抑制高糖诱导的RMCs增殖,在5～30 mmol/L范围内呈一定的浓度依赖效应,且与其抗氧化作用密切相关。结论肌肽通过抗氧化作用抑制高糖诱导的RMCs增殖,且有浓度依赖趋势。     

糖尿病肾病早期大鼠肾脏中硫氧还蛋白相互作用蛋白的表达研究

目的探讨糖尿病肾病（DN）早期大鼠肾组织中硫氧还蛋白相互作用蛋白（Txnip）表达的变化。方法Wistar大鼠随机分成正常对照组（NC组）、糖尿病模型组（DM组）。腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病模型,4周时取大鼠肾脏,HE染色观察大鼠肾组织的病理变化,免疫组化检测大鼠肾组织中Txnip的表达分布,Western blot和RT—PCR进一步检测Txnip蛋白和基因的表达。结果在DN早期,与NC组肾组织相比,DM组的。肾小管和肾小球中均发现Txnip蛋白和基因的表达增加。结论Txnip表达的变化在大鼠DN早期发挥重要作用。