一个新的人信号识别微粒受体基因APMCF1的克隆、表达和抗体制备

目的：克隆人类新基因APMCF1，原核表达并制备其特异性多克隆抗体．方法：运用5’末端快速扩增方法，结合Genbank数据库进行电子拼接，完善APMCF1的5’端序列；利用RT-PCR方法，扩增出APMCF1的蛋白编码cDNA序列，克隆入pGEX-KG中，构建APMCF1的原核表达载体，在大肠杆菌中诱导表达后获得了GST-APMCF1融合蛋白，以此融合蛋白为免疫原制备兔抗血清，用Western blot鉴定抗体特异性．结果：通过RACE及电子拼接，完善了APMCF1的5’端序列，其cDNA长度为1745bp，与鼠信号识别微粒受体β亚基序列同源性较高，染色体定位于3q22．2；克隆了APMC2F1 816bp的开放读框序列并表达了GST-APMCF1融合蛋白．制备了特异性兔抗GST-APMCF1多克隆抗体．结论：APMCF1可能是编码人类信号识别微粒受体β亚基的基因．该分子多克隆抗体的初步制备，为进一步研究APMCF1的功能提供了必要工具。     

兔抗人PDGF-A抗体的制备与鉴定

血小板衍生的生长因子(platelet—derived grovdh factor，PDGF)是由A、B链通过二硫键连接而形成的二聚体有研究表明，PDGF—A参与创伤愈合过程中的炎症反应、肉芽组织和瘢痕形成。另外，PDGF—A对雄性小鼠生殖系统的发育也起着决定性的作用，提示其对于生殖系统某些疾病的诊断和治疗可能具有重要意义。为此，我们制备了免抗人PDGF—A的抗体，为进一步研究PDGF—A的功能提供有用的试剂。     

心脏术后患者并发精神异常的护理

随着人工心肺机装置。灌注技术及心内直视操作的不断改进，尤其在术中使用微泡氧合器和在体外循环管道中装配微孔过滤器排除心腔残留气体后，心脏术后脑损害的发病率显著下降。但由于ICU的特殊环境，疼痛、失眠等影响可并发精神障碍。1990年我院行心内直视手术322例，发生精神障碍4例，占1．24％。通过分析其发生的原因，加强预防护理，1996年1～6月行心内直视手术220例，仅发生1例精神异常，发生率降至0．45％。现将护理措施介绍如下。1临床资料322例心内直视手术患者并发精神障碍4例，均为男性，平均年龄42．5岁。换双瓣3例，左室室壁瘤…     

双瓶吹水法对先心病患儿术后肺活量的影响

先心病患儿术后易发生肺部并发症，关键因素是惧怕疼痛而致呼吸幅度小，肺少碍不足。双瓶吹水法的实施在一定程度上解决了这个问题。该吹水双瓶结构简单，易于自制。吹水方法简便易行，容易掌握。     

大鼠IL-6受体基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

目的：获取大鼠IL－6受体（IL－6R）的基因并高效表达。方法：用PCR技术，从正常成年大鼠脑的cDNA文库中，获得编码IL－6R基因的序列。测序后，通过PCR扩增和基因重组，分别构建IL－6R基因全长和羧基端部分编码序列的表达载体，并导入大肠杆菌DH5α中，通过IPTG诱导表达重组融合蛋白。对表达的羧基端序列编码的融合蛋白过谷胱甘肽琼脂糖柱进行纯化。结果：获得正常成年大鼠I-6R(98-1493位）的基因，测序结果与已发表的基因序列相一致。重组蛋白以包涵体的形式进行表达。经SDS－PAGE分析，在相对分子质量（Mr)为74000和43000处，各有1条特异的蛋白带。对羧基端基因表达的包涵体形式的蛋白进行变性、重折叠及纯化后，得到了庙纯度融合蛋白。结论：成功地克隆正常成年大鼠IL－6R基因，并在E.coli DH5α中高效表达，为进一步制备抗IL－6R抗体和进行原位分子杂交研究创造了条件。     

大鼠Nogo基因片段的克隆及与GST融合蛋白的表达和纯化

目的: 获取大鼠Nogo基因片段并高效表达纯化. 方法: 用RT-PCR技术,从成年SD大鼠脊髓的总RNA中,获得编码Nogo基因功能片段的DNA. 测序后,通过酶切亚克隆至表达载体pGEX-4T-1,构建重组表达载体,并导入E. coli DH5α中,IPTG诱导表达重组的GST融合蛋白. 对重组融合蛋白过谷胱甘肽琼脂糖柱进行纯化. 结果: 获得成年SD大鼠Nogo(570～691和1028～1089氨基酸残基)的基因,测序结果与已发表的基因序列相一致. 重组GST融合蛋白经SDS-PAGE分析,在相对分子质量(Mr) 39 000和32 000处,有特异的蛋白条带. 重组蛋白经谷胱甘肽琼脂糖柱进行纯化后,得到了高纯度的融合蛋白. 结论: 成功克隆成年大鼠Nogo基因片段,并在E. coli DH5α中高效表达,亲和层析后获得高纯度GST融合蛋白.     

人PDGF-A基因的克隆、表达及表达产物的纯化

目的 克隆血小板衍生的生长因子A链（PDGF-A）的基因，并在大肠杆菌中表达。方法 利用RT-PCR法，从人肝癌细胞系（HHCC）的总RNA中，扩增PDGF-A的全长cDNA，再用PCR法扩增PDGF-A成熟蛋白的全长编码序列，编码序列经测序验证后，克隆入表达载体pGEX-4T-1中，构建PDGF-A的原核表达载体，在大肠杆菌中诱导表达目的蛋白，并进行谷胱甘肽（GST）亲和层析纯化。结果 以RT-PCR扩增的PDGF-A基因的全长为1255bp，以PCR扩增得到其成熟蛋白的编码序列为531bp，构建了PDGF-A基因的原核高效表达载体pGEX-PDGF-A。表达产物主要位于包涵体内，对包涵体蛋白进行变性和复性处理后，利用亲和层析法获得纯化的目的蛋白，结论 成功地扩增到PDGF-A成熟蛋白的编码序列，并在大肠杆菌高效表达，为进一步对PDGF-A功能的研究提供了有利的工具。     

挂式可移动折叠痰架

挂式可移动折叠痰架第四军医大学西京医院韩淑英，费玲玲多年来，病人使用痰缸（杯）吐痰。若消毒不严，极易引起污染，且只能放置于床头柜上，不能随患者体位的改变而移动。针对这种情况，我们于１９９４年２月研制了挂式可移动折叠痰架。经我科近一年半３００例使用，效...