弓形虫新基因表位疫苗质粒的构建及鉴定

目的构建两个弓形虫新基因2B9G1、7C3-C3的表位疫苗质粒,为阐明表位疫苗的保护性奠定基础。方法采用生物信息学方法对新基因2B9G1、7C3-C3进行表位预测,PCR扩增基因中编码3个表位的片段W2b、W2a和W4a,连接入pcDNA3,转入DH5α,挑阳性菌落进行PCR、酶切和测序鉴定;同法将W2a、W4a分别克隆入pcDNA3-W2b载体中W2b片段下游,再将W4a克隆入pcDNA3-W2b2a载体中W2a片段下游。结果经PCR、酶切鉴定及序列测定,W2b、W2a和W4a 3个片段分别插入pcDNA3预期位置;W2a和W4a片段分别插入pcDNA3-W2b预期位置;W4a片段插入pcDNA3-W2b2a预期位置。结论成功构建单表位、双表位、多表位疫苗质粒pcDNA3-W2b、pcDNA3-W2a、pcDNA3-W4a、pcDNA3-W2b2a、pcDNA3-W2b4a、pcDNA3-W2a2b4a。     

两种免疫调节剂增强弓形虫W2b2a表位疫苗的小鼠保护作用

目的:探讨匹多莫德、沙利度胺增强弓形虫W2b2a表位疫苗刺激机体产生免疫应答和保护免疫的效果。方法:将匹多莫德、沙利度胺分别与弓形虫W2b2a表位疫苗混合肌注免疫小鼠,检测其细胞免疫和体液免疫,并观察其受到弓形虫攻击感染后的生存时间。结果:pc DNA3-W2b2a加匹多莫德组、pc DNA3-W2b2a加弗氏佐剂组、pc DNA3-W2b2a加沙利度胺组小鼠血清IFN-γ水平显著高于pc DNA3-W2b2a组(P0.05);pc DNA3-W2b2a加匹多莫德组、pc DNA3-W2b2a加弗氏佐剂组Ig G抗体水平、CD4+/CD8+比值、T细胞增殖活性显著高于pc DNA3-W2b2a组和pc DNA3-W2b2a加沙利度胺组(P0.05);小鼠攻击试验表明,免疫组小鼠存活时间明显长于对照组(P0.05)。结论:匹多莫德、沙利度胺可增强弓形虫W2b2a表位疫苗免疫小鼠的保护作用。     

弓形虫真核表达质粒pcDNA3/wx2的构建与鉴定

目的构建弓形虫新基因wx2的真核表达质粒,以其做为弓形虫DNA疫苗研究其保护性。方法PCR扩增出编码新基因wx2ORF,用EcoRI/XhoⅠ分别对扩增产物和pcDNA3进行双酶切,将wx2ORF定向克隆到pcDNA3的EcoRI/XhoⅠ位点,对重组质粒进行PCR,双酶切初步鉴定后做序列测定。结果特异扩增出预期的wx2ORF片段,大小为570bp左右,扩增产物经双酶切后成功连接到pcDNA3中,经PCR,双酶切及序列测定表明重组质粒中含有wx2读框。结论成功构建弓形虫真核表达质粒pcDNA3/wx2。     

桂油生产工艺的探讨

本文研究了在桂油生产中,不同工艺条件对桂油出油率和桂油质量的影响。主要研究了原料状态(切碎与不切碎)、蒸馏速率(35kg/m~2·h、70kg/m~2·h、105kg/m~2·h、140kg/m~2·h和蒸馏方式(水上蒸馏与水中蒸馏)等三因素进行试验。试验结果表明:上述诸因素对出油率均有显著的影响。其中以水上蒸馏效果最显著,不但提高出油率,缩短蒸馏时间、而且桂油质量也较高;原料切碎优于不切碎;蒸馏速率四个水平以70kg/m~2·h为最佳。     

弓形虫酵母表达质粒pPIC9K-GRA1的构建及鉴定

目的构建弓形虫致密颗粒抗原-1（GRA1）的酵母表达质粒,为进一步研究GRA1蛋白功能奠定基础。方法PCR扩增编码GRA1目的基因,用EcoRⅠ/NotⅠ分别对扩增产物和酵母表达质粒pPIC9K进行双酶切,将GRA1定向克隆到pPIC9K的EcoRⅠ/NotⅠ位点,对重组质粒进行PCR,双酶切初步鉴定后做序列测定。结果特异扩增出预期的GRA1片段,大小为573bp,扩增产物经双酶切后成功连接到pPIC9K中,经PCR,双酶切及序列测定证明重组质粒中含有GRA1读框。结论成功构建弓形虫GRA1酵母真核表达质粒。     

脑出血患者血清HCY、hs-CRP联合检测的临床研究

目的探讨脑出血患者血清超敏C反应蛋白（hs-CRP）和同型半胱氨酸（HCY）水平变化与其病情轻重及预后的关系。方法分别应用胶乳免疫比浊法和循环酶法测定120例脑出血患者及80例健康对照组血清中的hs-CRP和HCY水平,并且观察2个指标与病情、预后的关系。结果脑出血患者hs-CRP和HCY水平都显著高于健康对照组（P〈0.01）。不同病情程度脑出血患者血清hs-CRP和hcy水平比较,高危组〉中危组〉低危组;hs-CRP和hcy水平正常组好转率高于异常组。结论血中hs-CRP和HCY水平升高与脑出血的发生有着密切的联系,其水平有助于评估脑出血病情及预后。     

长沙市城区职业人群血脂紊乱和高血糖、高血压及代谢综合征患病率的调查

目的 了解长沙市城区职业人群血脂异常,高血糖、高血压及代谢综合征(MS)的患病率及其特点. 方法 调查该城区来湖南省马王堆医院体检的公务员、公司职员、教科卫生人员共9 880名的身高、体重和血压、血检测血糖、血脂.采用中华医学会糖尿病学分会(CDS)诊断标准确定MS患者. 结果被调查人群中血脂紊乱的患病率为33.5%(3 310例),符合高血糖诊断标准的共有504例,患病率为5.1%,高血压的患病率15.5%(1 531例),超重肥胖(OB/OW)共检出2 915例,总患病率为29.5%.MS的患病率为11.6%(1 144例),男性患病率(13.5%)高于女性(9.2%),在不同性别组MS患病率均随年龄的增长而上升.调查人群中Ms的4个组分中至少有一项阳性的比例高达55%(5 434例). 结论长沙市城区职业人群中MS的患病率较高,高脂血症的患病率和高血压患病率也比较高,因此在人们生活水平提高的同时,加强膳食平衡的营养教育,使居民的饮食更加合理,并应增加体育运动.     

弓形虫新基因wx2黄色荧光蛋白标记质粒的构建与鉴定

目的 构建弓形虫新基因wx2黄色荧光蛋白标记的黄色荧光超表达质粒,为进一步研究弓形虫新基因WX2的功能提供工具.方法 采用PCR扩增出编码wx2目的 基因,用BglⅡ,AvrⅡ分别对PCR扩增产物和ptubYFP-YFP/sagCAT进行双酶切.将wx2定向克隆到tubYFP-YFP/sag-CAT;对重组质粒进行PCR,双酶切初步鉴定后做序列测定.结果 特异扩增出预计wx2目的 基因片段,大小为558 bp;扩增产物成功连接到ptubYFP-YFP/sagCAT中,经PCR,双酶切及序列测定结果表明重组质粒中含有基因wx2读框.结论 成功构建弓形虫新基因wx2黄色荧光超表达质粒wx2一tub-YFP sag/CAT.     

血清NT-proBNP检测对冠心病诊断及预后评估的价值

目的探讨氨基末端B型钠尿肽原（NT-proBNP）浓度变化对冠心病（CHD）患者诊断和预后的意义。方法采用双向侧流免疫法检测132例CHD患者[按病情严重程度分为无症状组、稳定性心绞痛（SAP）组、不稳定性心绞痛（UAP）组、急性心肌梗死（AM I）组]和30名健康对照者及34例急性冠状动脉综合征（ACS）患者住院后第7天、第15天、第30天血清NT-proBNP和肌钙蛋白I（cTnI）水平。CHD患者同步作心电图检查。所有患者平均随访180 d,观察随访期间发生的主要不良心脏事件（MACE）。结果 CHD不同病变程度各组血清NT-proBNP水平明显高于对照组（P〈0.01）,且随冠状动脉病变程度加重逐渐升高,并与患者心功能分级[美国纽约心脏协会（NYHA）Ⅰ～Ⅳ]呈正相关（r=0.81,P〈0.01）。NT-proBNP〉1 596.63 ng/L的CHD患者NYHAⅢ～Ⅳ级、心电图ST-T改变、随访期内出现MACE的例数明显高于NT-proBNP≤1 596.63 ng/L者（P〈0.01）。ACS患者好转出院组治疗后第7天血清NT-proBNP水平显著降低（P〈0.01）,且随着治疗时间延长继续下降。死亡组治疗过程中血清NT-proBNP水平逐渐升高,治疗后第15天血清NT-proBNP水平明显高于治疗前（P〈0.01）。心力衰竭（HF）恶化组治疗前、后血清NT-proBNP水平差异无统计学意义（P〉0.05）。cTnI阴性死亡组与cTnI阳性死亡组NT-proBNP水平差异无统计学意义（P〉0.05）。结论血清NT-proBNP水平与CHD严重程度密切相关,对CHD患者早期诊断、预后及死亡风险评估有重要的临床价值,可以作为CHD患者危险分层的监测指标。     

血清H-FABP检测对AMI患者诊断及预后和死亡风险评估的价值研究

目的探讨心型脂肪酸结合蛋白（H-FABP）浓度变化对急性心肌梗死（AMI）患者诊断、预后及死亡风险评估的意义。方法采用双向侧流免疫法检测72例AMI患者、44例不稳定心绞痛（UAP）患者、30名健康对照者以及64例AMI患者治疗后第3天、第7天血清H-FABP和心肌肌钙蛋白Ⅰ（cTnI）水平。所有患者平均随访180 d,观察随访期间发生的主要不良心脏事件（MACE）。结果 AMI组血清H-FABP水平明显高于UAP组及对照组（P〈0.01）。血清H-FABP水平与cTnI呈正相关（r=0.53,P〈0.01）。AMI组和UAP组H-FABP阳性率明显高于cTnI（P〈0.05）。治疗前,死亡组与非死亡组血清H-FABP水平差异无统计学意义（P〉0.05）;治疗后第3天,无MACE组血清H-FABP水平明显降低（P〈0.01）且低于正常参考范围,而MACE组和死亡组仍高于正常参考范围;治疗后第7天,MACE组比治疗前显著降低（P〈0.01）,并低于正常参考范围;死亡组血清H-FABP水平与治疗前比差异无统计学意义（P〉0.05）,且仍高于正常参考范围。AMI患者血清H-FABP水平与心功能分级[美国纽约心脏病协会（NYHA）Ⅰ~Ⅳ]呈正相关（r=0.51,P〈0.01）。结论血清H-FABP可作为AMI的一种标志物,对AMI早期诊断有重要临床价值。观察治疗过程中血清H-FABP水平动态变化对AMI患者预后评估有重要意义。