腹水中分离出1株反硝化产碱菌

1病例患者,女,38岁。2005年3月,确诊为慢性肾功能不全、尿毒症,住院治疗行CAPD插管术。20 d前出现腹痛、发热、腹透液混浊,当地自行静脉滴注青霉素、头孢菌素治疗>10 d,腹透液变清,停药2 d后,再次混浊,改用左氧氟沙星静脉滴注8 d仍有腹痛。入院时患者慢性肾病面容,左下腹见CAPD插管,腹水征( ),双肾区无叩痛,双下肢浮肿,无恶心、呕吐;T38℃,P100次/min,R18次/min,BP 21/12kPa;血常规WBC 3.0×109/L,L 0.24、N 0.66、Hb 61g/L,RBC1.95×1012/L;腹水淡黄混浊,pH7.0,李凡他试验阳性,细胞数0.09×109/L,多核0.9,单核0.1;C 730μmol/L…     

幽门螺杆菌cag致病岛CagⅠ蛋白的生物信息学分析

目的用生物信息学分析方法对幽门螺杆菌(HP)cag致病岛中的CagⅠ蛋白进行综合分析,推断其结构和功能,并探索其在HP致病中的作用。方法用antherprot V5.0软件和网络数据库等分析预测其结构,BLAST程序搜索其同源序列;用PROSITE SCAN和Fingerprint服务器分析推测其潜在的功能。结果 CagⅠ蛋白有361个氨基酸残基,分子量(Mr)为39 370,理论等电点为5.56;N'端20个氨基酸残基为信号肽,有三段跨膜区,二级结构和三级结构中螺旋结构为主体(约80%);CagⅠ为稳定的疏水蛋白,保守性很强,有N-糖基化作用位点、蛋白激酶C磷酸化位点、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和豆蔻酰化作用位点;存在膜蛋白、菌毛蛋白、转运蛋白、ATP/GTP酶、转录调节因子、分泌系统蛋白等多个蛋白质标签。结论 CagⅠ蛋白定位于HP外膜,是Ⅳ型分泌系统重要组成蛋白质,在信号转导和物质转运过程中充当信使或载体,可能具有水解酶及ATP/GTP酶活性。     

幽门螺杆菌Cag致病岛hp0540基因的克隆表达及其多克隆抗体的制备

目的：构建幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）Cag致病岛（Cag—pathogenicity island,Cag—PAI）编码的hp0540基因的原核表达系统,并制备其多克隆抗体。方法：应用PCR技术从Hp11637基因组DNA中扩增hp0540基因片段,克隆至pMD18-2T载体后,进行序列测定,并对其序列进行生物信息学分析;构建pET-28a—hp0540原核表达载体,转化表达宿主菌BL21DE3;经IPTG诱导表达后,SDS—PAGE法鉴定目的蛋白的表达,并以Ni^2＋-NTA柱分离纯化目的蛋白;将纯化蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体并测定抗体效价。结果：成功克隆了hp0540基因,全长1086bp,编码361个氨基酸,与基因库公布的其他坳菌株基因序列的核苷酸同源性为98％。工程菌诱导后SDS—PAGE显示新生表达蛋白带,相对分子质量约为39000,经Ni^2＋NTA柱纯化后可获得重组蛋白,重组蛋白免疫新西兰大白兔后获得效价为1：160000的多克隆抗体。结论：成功构建了hp0540基因的原核表达系统并制备了其多克隆抗体,为研究该基因的功能奠定了基础。     

幽门螺杆菌cag4蛋白的原核表达、纯化及鉴定

目的:构建幽门螺杆菌cag4蛋白的原核重组体系,表达、纯化融合蛋白。方法:利用PCR技术从幽门螺杆菌NCTC11637中克隆了cag4基因;经T-A克隆,酶切鉴定,构建了原核表达载体pET-28a-cag4;经测序鉴定正确后,转化进入大肠埃希菌BL21(DE3)进行异源表达。利用IPTG体外诱导后,经SDS-PAGE和Western bolt鉴定目的蛋白表达后,采用Ni2+-NTA柱在变性条件下纯化目的蛋白,并对重组蛋白进行透析复性处理。将SDS煮沸法获得的溶壁微球菌肽聚糖掺入SDS-PAGE作为底物,进行酶谱分析。结果:成功扩增了cag4基因基因;重组质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达出pET-28a-cag4融合蛋白;优化了pET-28a-cag4原核表达体系的最适条件;Western bolt分析结果显示表达的基因重组蛋白与目的蛋白相符;酶谱分析显示其具有明显的肽聚糖水解活性。结论:幽门螺杆菌cag4蛋白具有溶菌糖基转移酶活性。     

SELEX技术原理及应用进展

SELEX技术即指数富集配基的系统进化技术（systematic evolution of ligands by exponcntial enrichment）,它应用大容量的随机寡核苷酸文库并结合体外PCR扩增技术.     

亚硒酸钠诱导结肠癌细胞凋亡的实验研究

目的　探讨硒对体外培养的人结肠癌细胞凋亡作用。方法　将不同浓度的亚硒酸钠 (Na2 Se O3)分别加入到接种有体外培养的人结肠癌细胞悬液的培养瓶中 ,于不同时间分别对各组进行流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果　 Na2 Se O3可诱导结肠癌细胞凋亡 ,且该作用与 Na2 Se O3浓度和作用时间有关。结论　 Na2 Se O3有诱导细胞凋亡作用。该作用与时间有关 ,亦与 Na2 Se O3作用剂量有关 ,提示硒可能通过诱导肿瘤细胞凋亡而达到抗肿瘤的作用。