膝关节周围骨肉瘤保肢手术疗效及预后分析

目的探讨膝关节周围骨肉瘤保肢手术的临床疗效及患者预后生存状况。方法回顾性分析1998年至2008年间保肢手术治疗的120例膝关节周围骨肉瘤患者临床资料,其中男75例,女45例;年龄5~48岁,平均18.9岁。股骨下端骨肉瘤78例,胫骨上端骨肉瘤42例,规范化疗85例,不规范化疗35例。应用统计学方法处理记录患者的资料,分析手术疗效及患者预后生存情况。结果所有患者均获得随访,随访时间6~144个月,平均56.8个月。120例患者5年总生存率61.8%,12例患者再次截肢,规范化疗患者5年总生存率71.6%,不规范化疗患者5年总生存率40%,两者差异有统计学意义(P0.01)。骨与软组织肿瘤协会(musculoskeletal tumor society,MSTS)肢体功能评分平均25.47分,股骨下端和胫骨上端骨肉瘤保肢术后膝关节活动度两者差异无统计学意义,但膝关节伸直缺失胫骨上端较股骨下端肿瘤术后发生率高,差异有统计学意义(P=0.03)。结论保肢手术联合新辅助化疗是目前治疗膝关节周围骨肉瘤比较理想的选择,可以较好的保留部分关节功能和肢体外观,但并发症发生率较高,肿瘤局部复发和假体感染是导致再次截肢的主要原因。     

Ezrin蛋白mRNA的一、二级结构分析和反义技术作用靶点设计

目的 分析肿瘤远处转移相关蛋白Ezrin Mrna的一、二级结构,寻找其各种反义技术作用的靶点.方法 利用RNAdraw和RNAstructure两种计算机程序对Ezrin Mrna进行分析计算,得到其一、二级结构信息,选择两种程序计算出的共同的连续4个以上碱基未配对的单链成环区作为反义技术的靶区域,设计反义寡核苷酸(AsODNs)、核酶(Ribozyme)、脱氧核酶(DNAzyme or Deoxyribozyme)和小干扰RNA(SiRNA)等4种常用反义技术的作用靶点,再通过计算机程序OligoWalk利用最低自由能原则进行筛选,最后得到各反义技术的作用靶点.结果 各反义技术的靶点数目分别为:AsODNs17个,Ribozyme5个,DNAzymel5个,SiRNA10个;其中AsODNs靶点中较为理想的为G1749-A1771和C1777-G1794,Ribozyme为A2359-G2360,DNAzyme为A1789-U1790、A1756-G1757及A1784-G1785,SiRNA为G802-G808、G1749-A1771及A2354-G2360,并且A2354-G2360是所有4种反义技术共同的作用区域,可以作为一个通用靶点.结论 正确的靶点设计为应用反义技术抑制Ezrin表达从而控制恶性肿瘤的远处转移提供了有效的指导作用.     

槲皮素对人骨肉瘤细胞U-2OS/MTX300增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的:研究槲皮素(quercetin,Qu)对骨肉瘤细胞系U-2OS/MTX300增殖和凋亡的作用及其机制。方法:MTT法观察细胞增殖活性;Annexin V/PI染色检测凋亡;线粒体膜电位及细胞色素C的Western blot检测线粒体凋亡途径;持续活化Akt瞬时转染、Western blot检测Akt通路相关蛋白表达水平变化。结果:槲皮素可明显抑制耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞U-2OS/MTX300生长,并呈时间和剂量依赖性;Annexin V/PI可明显检测到细胞凋亡;进一步发现其作用机制是通过下调线粒体膜电位,促进细胞色素C向胞浆释放及抑制Akt磷酸化来实现。结论:槲皮素可显著抑制耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞系U-2OS/MTX300细胞增殖并诱导其凋亡,其机制与线粒体凋亡途径及抑制Akt活性有关。     

带血管蒂腓肠肌内侧头肌瓣转移重建髌腱的长期随访

目的 总结胫骨近端侵袭性骨肿瘤广泛切除假体置换手术,应用带血管蒂腓肠肌内侧头肌瓣转移重建髌腱的长期随访结果.方法 胫骨近端肉瘤广泛切除后,应用带血管蒂腓肠肌瓣转移重建髌腱附着,长期随访及评估伸膝动力和并发症.结果 临床治疗69例,对45例生存患者平均随访68.6(24～128)个月,局部复发率8.7%(6/69),伸膝肌力平均4.2级(3.6～5.0),膝关节屈曲平均95°(75°～135°),伸膝平均-2°(0°～12°),5例膝关节不能完全伸直;患肢MSTS功能评分为77%(23.1/30),外观正常.结论 在胫骨近端侵袭性骨肿瘤保肢术中,应用带血管蒂腓肠肌瓣转移重建髌腱,能够恢复伸膝力量,改善软组织覆盖和患肢功能.     

靶向糖原合成酶激酶-3β抗骨肉瘤的实验研究

 目的 研究糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)在骨肉瘤细胞增殖中的作用及相关分子机制,探讨其在骨肉瘤靶向治疗中的价值。方法 Western blot检测人成骨细胞及骨肉瘤细胞p-GSK-3β(Ser9)表达水平,观察GSK-3β抑制剂及siRNA干扰对细胞增殖、凋亡的影响,利用凋亡蛋白芯片筛查并验证GSK-3β调控骨肉瘤细胞的分子机制,通过裸鼠体内实验评估靶向GSK-3β对于骨肉瘤的治疗价值。结果 在骨肉瘤细胞中p-GSK-3β(Ser9)表达水平明显低于成骨细胞。GSK-3β特异性抑制剂及siRNA干扰均可明显抑制骨肉瘤细胞增殖并诱导凋亡蛋白cleave-caspase 3表达量明显上调。通过蛋白芯片筛查显示一组NF-κB调控的靶基因蛋白survivin、cIAP-1、XIAP及Bcl-2明显下调。Western blot验证了上述芯片结果,并发现氯化锂处理后p-IκBα水平下降,核内NF-κB p65表达量下降。NF-κB双荧光素酶报告系统检测稳定过表达持续活化GSK-3β细胞中NF-κB转录活性与空载体组细胞相比明显升高,而稳定干扰GSK-3β的细胞中NF-κB转录活性与空载体组细胞相比明显下降。裸鼠体内动物实验发现稳定干扰GSK-3β和采用氯化锂均可明显抑制骨肉瘤皮下移植瘤的生长。结论 GSK-3β在骨肉瘤中处于相对活化状态,可通过上调NF-κB转录活性调控骨肉瘤细胞增殖;靶向GSK-3β是骨肉瘤潜在的治疗新策略。     

华蟾酥毒基诱导骨肉瘤细胞凋亡的体外实验研究

 目的 研究华蟾酥毒基（cinobufagin）对多种骨肉瘤细胞系的增殖抑制和诱导凋亡作用,并探讨其相关机制。方法 不同浓度的华蟾素毒基分别处理骨肉瘤细胞系U2OS、MG63和SaO2后,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察不同骨肉瘤细胞系的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期的变化,细胞核荧光染色及Annexin V/ PI染色检测细胞凋亡,Western blot检测IAPs和Bcl-2家族凋亡相关蛋白凋亡相关蛋白Bax、cleaved-PARP、xIAP、cIAP-1、survivin及p65的表达。结果 MTT检测显示,华蟾酥毒基可明显抑制骨肉瘤细胞U2OS、MG63和SaO2的增殖,其抑制细胞增殖的作用呈剂量和时间依赖性,其对U2OS、MG63和 SaO2细胞的48 h IC50值分别为（104.83±16.96） nmol/L、（47.07±7.5） nmol/L和（136.72±10.08） nmol/L。100 nmol/L 华蟾酥毒基处理骨肉瘤细胞12 h后,流式细胞仪检测可见骨肉瘤U2OS、MG63和 SaO2的G₀/G₁期细胞比例下降,G2/M 期细胞比例增加,表明华蟾素毒基主要通过将细胞阻滞在G₂/M 期,以抑制骨肉瘤细胞的增殖。进一步Hoechst 33258细胞核染色发现,华蟾素毒基可诱导骨肉瘤细胞产生典型凋亡小体,Annexin V/ PI检测100 nmol/L 华蟾酥毒基作用48 h后,U2OS、MG63和 SaO2细胞凋亡率分别为33.6%±6.4%、36.4%±7.8% 及 29.3%±5.1%。表明华蟾酥毒基的抗骨肉瘤效果是通过诱导骨肉瘤细胞凋亡来实现。在探讨其诱导骨肉瘤细胞凋亡的相关机制中,通过Western blot检测发现其诱导凋亡的作用机制是通过上调IAPs和Bcl-2家族凋亡相关蛋白Bax、cleaved-PARP,下调xIAP、cIAP-1、survivin及p65蛋白来实现。结论 华蟾酥毒基可明显抑制骨肉瘤细胞株U2OS、MG63和 SaO2细胞增殖,阻滞细胞在G₂/M期,并诱导其凋亡,其诱导凋亡的作用机制为调节IAPs和Bcl-2凋亡相关家族蛋白的活性。     

四肢骨肉瘤保肢术后假体断裂个性化翻修10例报告

目的 报告连续10例四肢骨肉瘤患者保肢术后假体断裂的个性化翻修病例,总结不同类型假体断裂及相应个性化假体翻修手术的结果与体会.方法 2014年6月至2020年8月,本中心收治10例下肢骨肉瘤保肢术后假体断裂患者,男5例,女5例,初次保肢术前均接受新辅助化疗,术后继续完成辅助化疗.本组10例因下肢疼痛、畸形伴活动受限复诊...     

槲皮素诱导耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞系U2-OS/MTX300凋亡

 【目的】 研究槲皮素对耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞株U2-OS/MTX300的增殖抑制和诱导凋亡作用及相关机制。【方法】 以不同浓度槲皮素及甲氨蝶呤处理U2-OS及U2-OS/MTX300。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及平板克隆检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,Hochest 33258 染色及流式细胞仪检测凋亡,Western blot法检测凋亡相关蛋白cleaved-PARP,Bax,Bak,Bcl-2及Bcl-XL表达。【结果】 槲皮素可明显抑制耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞U2-OS/MTX300的增殖,72 h IC50值为(22 ± 4)μmol/L、10、25、50μmol/L可显著抑制U2-OS/MTX300克隆形成数量,且随剂量增加抑制作用明显增强。槲皮素与甲氨蝶呤之间不存在交叉耐药性。槲皮素能诱导U2-OS/MTX300细胞S期阻滞,并可诱导胞内产生典型凋亡小体,流式细胞仪可检测到明显凋亡。其作用机制是通过上调Bax,Bak及下调Bcl-2表达,促进cytochrome C释放及诱发PARP等重要胞内蛋白断裂来实现。【结论】 槲皮素可显著抑制耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞系U2-OS/MTX300细胞增殖并诱导其凋亡,线粒体途径可能是其诱导凋亡的重要机制。     

带血管蒂腓肠肌内侧头肌瓣转移重建髌腱的长期随访

Objective To evaluate the long following-up outcome of the medial gastrocnemius muscle transferring reconstruction the patella tendon after the wide resection of aggressive bone tumors in the proximal tibia. Methods With the 69 patients of the osteogenetic sarcoma in the proximal tibia were treated with the wide resection and reconstruction the patella tendon. After the long following up the knee extensor,function and complications were evaluated. Results With the 69 patients, the 45 survival patients were followed up for the average 68.6 (24-128) months. The local recurrence rate was 8.7%(6/69). The strength of knee extending was in the average of grade 4.2(3.6-5.0), the degree of knee flexion was in the average of 95°(75°-135°), the degree of knee extension was in the average of-2°(0°-12°), the knees of five patients cannot fully extension. The MSTS functional score was in the average of 77% (23.1/30). Conclusion During the limb salvage of the proximal tibial aggressive bone tumors, the medial gastrocnemius muscle transferring reconstruction the patella tendon could offer the knee extension strength; improve the soft tissue coverage and functional results.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂PCI-24781诱导耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞U2-OS/MT300凋亡

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂PCI-24781诱导耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞凋亡的作用及机制。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及平板克隆形成实验检测PCI-24781对骨肉瘤细胞U-20S/MTX300增殖的影响,hochest33258染色检测PCI-24781处理后细胞核形态改变,流式细胞仪检测凋亡,Western blot法检测cleaved-PARP、P53表达量及组蛋白H3、H4乙酰化水平变化。结果PCI-24781对耐甲氨蝶呤U2-OS/MT 300细胞呈剂量依赖性增殖抑制,其48 h IC50值为(0.55±0.03)μmol.L-1,该值与甲氨蝶呤敏感U2-OS细胞IC50值之间无统计学差异(P>0.05)。0.5μmol.L-1PCI-24781可显著抑制细胞克隆形成,其抑制率达(61±7)%。PCI-24781处理48 h后细胞内出现典型凋亡小体,流式细胞仪检测凋亡率达(29±4)%。Western blot检测可见随PCI-24781浓度升高cleaved-PARP,组蛋白H3、H4乙酰化水平及P53显著升高。结论组蛋白去乙酰化酶抑制剂PCI-24781可显著抑制耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制与上调组蛋白乙酰化水平,促进抑癌基因P53表达有关。