染色质免疫沉淀技术在人巨细胞病毒即刻早期蛋白研究中的应用

染色质免疫沉淀(ChIP)技术是目前研究体内DNA与蛋白质相互作用的最好方法,该技术不仅可以检测体内反式因子与DNA的动态作用,还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达的关系。在研究人巨细胞病毒及其他病毒的基因调控和病毒蛋白与宿主细胞DNA相互作用方面,该技术亦有很好的应用前景。利用该技术研究表明,人巨细胞病毒IE1-72和IE2-86蛋白对组蛋白乙酰化的影响可能是调控病毒转录的重要机制之一。     

人类巨细胞病毒感染对人胚肺细胞HOXB1,HOXB5,HOXB6及HOXB9基因表达的影响

目的 :研究人胚肺 (HEL)细胞HOXB1,HOXB5 ,HOXB6及HOXB9基因的表达状态及人类巨细胞病毒(HCMV)感染对上述基因表达的影响。方法 :采用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)技术。结果 :①HEL细胞表达HOXB5和HOXB6 ,但不表达HOXB1和HOXB9;②HCMV感染后 ,HEL细胞HOXB6基因的表达上调 ,且被HCMV诱导表达HOXB9T ,而HOXB5基因的表达无明显改变 ,HOXB1基因仍旧不表达 ;③全反式维甲酸 (ATRA)能上调HCMV感染后HOXB9基因的表达 ,但对HCMV感染晚期HOXB6基因的表达有抑制作用。结论 :HCMV能诱导HOXB6和HOXB9基因表达异常 ,这可能在先天性HCMV感染导致胚胎发育畸形中起重要作用     

人类巨细胞病地人胚肺细胞HOX基因表达的影响

应用半定量ＲＴ－ＰＣＲ技术研究人胚肺（ＨＥＬ）细胞ＨＯＸ基因的表达状态及人类巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）对ＨＥＬ细胞ＨＯＸ基因表达的影响。结果发现：ＨＥＬ细胞表达ＨＯＸＢ７基因;ＨＣＭＶ感染后,其表达上调;用全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）处理ＨＥＬ细胞,ＨＣＭＶ对ＨＯＸＢ７基因表达的上调作用更强。提示ＨＣＭＶ可能通过影响ＨＯＸＢ７基因的表达导致胚胎发育畸形。     

同源盒基因与神经系统发育异常

先天畸形包括人类出生时各种解剖结构畸形、功能缺陷及代谢异常。据WHO 1996年的一项研究,中枢神经系统畸形约占全部先天畸形的17％。同源盒基因(homeodox gene。HOX)在神经系统的早期发育分化中起关键性作用,特别是在决定神经纵轴的前后差异．以及尔后个别神经组织的特异化方面。有研究表明HOX基因突变或异常表达可影响中枢神经系统的正常发育。     

MCF-7耐米托蒽醌细胞株甲基化结合蛋白表达

目的 研究乳腺癌细胞(MCF-7)经米托蒽醌诱导耐药后其甲基化结合蛋白(Methyl-DNA-binding protein,MBD)的表达变化,并分析在MCF-7细胞经诱导产生多药耐药性中与甲基化结合蛋白的关系.方法 利用耐米托蒽醌的MCF-7耐药株,并用未染毒的野生型MCF-7为对照,通过蛋白印迹法检测不同浓度米托蒽醌处理的细胞组乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)和甲基化结合蛋白MBD1、MBD2及MBD4的蛋白表达水平.结果 跟野生型MCF-7比较,随着染毒浓度的增大,乳腺癌耐药蛋白BCRP的表达逐渐增加,而MBD1、MBD2、MBD4的表达均呈降低趋势,且MBD4的降低尤为明显,与对照组比较,其MBD4蛋白表达水平分别为(0.910±0.049)、(0.835±0.065)、(0.708±0.082)、(0.660±0.145)(P＜0.05).结论 在米托蒽醌诱导产生耐药的MCF-7细胞株中,MBDs的表达,尤其是MBD4,有可能参与了肿瘤耐药的形成.     

HCMV IE1和pp65在人神经胶质瘤U251细胞中的时序表达

目的:研究人神经胶质瘤U251细胞对人巨细病毒(human cytomegalovirus, HCMV)的容许性,并探讨病毒蛋白IE1及pp65的时序表达特点.方法:HCMV感染U251细胞,以透射电镜观察U251细胞的形态学改变,以PCR方法检测HCMV核酸,于不同的时间点分别用抗蛋白IE1及蛋白pp65单克隆抗体进行免疫细胞化学染色,检测IE1及pp65的表达水平.结果:受染的U251细胞出现了明显的形态学改变,并用PCR方法检测到了HCMV核酸.免疫细胞化学染色表明,蛋白IE1在感染后30min～2h无表达,4h开始表达,14h达高峰,随后下降;蛋白pp65在感染后1 h为入侵型pp65,4～96h一直呈低水平表达,至120h表达急剧升高.结论:U251细胞是HCMV的容许细胞,HCMV在其中的表达具有时序性,但是其时序表达较在人成纤维细胞中延迟.     

人巨细胞病毒立即早期蛋白功能的研究进展

人巨细胞病毒基因表达分为立即早期、早期和晚期三个时相。立即早期基因的表达在病毒基因和宿主细胞基因的表达和调控方面有重要作用,并能够影响宿主细胞周期进程。本文对立即早期蛋白调节病毒复制以及影响细胞周期进程方面的功能作一综述。     

人白介素－1β水平与人牙周膜细胞OPG表达关系

目的：检测不同浓度重组人白介素－1β（recombinant human interleukin－1β,rhIL－1β）对体外培养人牙周膜细胞（human periodontal ligament cells,HPDLCs）表达骨保护因子（osteoprotegerin,OPG）的影响,研究rhIL－1β水平对牙周膜细胞骨向分化的作用。方法：正畸需要而拨除的健康前磨牙牙周膜,体外传代培养HPDLCs;ELISA法和RT－PCR法测定不同浓度rhIL－1β（0、5、10、15μg／L）下HPDLCs的OPG分泌量及mRNA表达。结果：ELISA和RT－PCR法检测结果显示,5、10、15μg／L rhIL－1β作用于HPDLCs均会下调其OPG蛋白分泌和mRNA表达。同一时间点与0μg／L对照组比较,5、10、15μg／L组OPG蛋白分泌和mRNA表达依此下调,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论：rhIL－1β水平升高会增强对HPDLCs的OPG表达抑制,对牙槽骨健康产生不利影响。     

深静脉血栓患者溶栓前后血栓分子标志物的变化研究

目的观察深静脉血栓（DVT）患者溶栓前后血栓分子标志物水平的变化,以探讨凝血、纤溶活性改变与DVT患者溶栓后高血栓复发率及疗效的相关性。方法采用发色底物法、免疫比浊法和酶联免疫法分别测定55例DVT患者溶栓前后血浆标本的抗凝血酶活性（AT：A）、纤溶酶原活性（PLG：A）、组织型纤溶酶原激活物抗原性（t-PA：Ag）、纤溶酶原活性抑制剂-1抗原性（PAI：Ag）、血浆D-二聚体（D-D）、血管性血友病因子（vWF）、血浆血栓调节蛋白（TM：Ag）、VIII促凝活性（Ⅷ：c）;35例健康体检者作对照。结果AT：A、PLG：A、t-PA：Ag在溶栓前明显低于对照组（P〈0.01）,溶栓后升高（P〈0.05或P〈0.01）,其中AT：A、PLG：A仍低于对照组（P〈0.05或P〈0.01）,而t-PA：Ag无显著性差异（P〉0.05）;PAI：A、D-D、VIII：C、vWF、TM：Ag在溶栓前显著高于对照组（P〈0.01）,溶栓后下降（P〈0.05或P〈0.01）,其中PAl：A、D-D、VIII：C、vWF、TM：Ag仍明显高于对照组（P〈0.05或P〈0.01）。痊愈组AT：A、PLG：A、TM：Ag水平与正常对照组无显著性差异（P〉0.05）,D-D下降幅度最大。结论血栓分子标志物水平可反映患者疗效,凝血系统机能紊乱、纤溶-抗纤溶系统失衡与DVT患者溶栓后血栓的复发可能有密切的关系。