基础医学实验室仪器设备科学管理的思考

充分发挥基础医学实验室培育人才的重要作用,推动教学科研同步发展,必须不断强化基础医学实验室科学管理,健全仪器设备全生命周期各环节的管理制度,提升实验室仪器设备的使用价值并发挥其效益的最大化。文章结合汕头大学医学院在开展生物化学与分子生物学实验室建设中,强化对本科生人才培养的实践,系统阐述了加强基础医学实验室仪器设备科学管理多个层面上的思考。     

血清DKK1在肿瘤临床应用的价值中

DKK1作为Wnt信号传导通路的拮抗剂,在肿瘤发生发展中发挥重要的作用。近年来的研究表明,DKK1作为一种分泌型糖蛋白,在多种肿瘤患者血清中呈高表达,可能在肿瘤中发挥重要的临床作用。本文就血清DKK1在肿瘤临床应用中的价值作一综述。     

哺乳动物细胞CDK2系列表达载体的构建与表达

目的：构建一系列细胞周期蛋白依赖激酶2（cyclin-dependent kinase 2,CDK2）在哺乳动物细胞的表达载体,为研究CDK2的功能和修饰提供实验材料。方法：从食管癌细胞中提取总RNA,逆转录PCR扩增CDK2编码区,然后将PCR产物克隆到T载体;扩增后的CDK2片段分别亚克隆入pcDNA3、pcDNA4、pNTAP和pEGFP等4种哺乳动物表达载体;最后,将获得的表达载体PEGFP/CDK2转染小鼠成纤维细胞NIH3T3进行初步的CDK2表达分析。结果：RT-PCR扩增获得约900 bp的目的片段,经T载体克隆和DNA序列分析,显示重组片段是人CDK2基因序列;CDK2片段分别亚克隆入上述4种载体后获得相应表达载体;运用构建的PEGFP/CDK2表达载体,在NIH3T3细胞中表达出CDK2蛋白。结论：成功构建了CDK2的哺乳动物细胞系列表达载体,并在NIH3T3细胞中成功表达目的蛋白。     

血清DKK1在肿瘤临床应用中的价值

DKK1作为Wnt信号传导通路的拮抗剂，在肿瘤发生发展中发挥重要的作用。近年来的研究表明，DKK1作为一种分泌型糖蛋白，在多种肿瘤患者血清中呈高表达，可能在肿瘤中发挥重要的临床作用。本文就血清DKK1在肿瘤临床应用中的价值作一综述。     

应用毕赤酵母系统表达人Fascin蛋白

背景与目的:应用酵母表达系统表达人的重要肿瘤分子标志物fascin蛋白。材料与方法:利用分子克隆技术将fascin基因完整编码区克隆至毕赤酵母(Pichia pastoris)分泌表达载体pPIC9中,获得重组质粒pPIC9-fascin;以限制性内切酶MssⅠ进行线性化并转化毕赤酵母GS115菌株,用PCR方法筛选出阳性整合克隆;对阳性克隆进行0.5甲醇诱导表达重组蛋白,银染及Western blot检测培养上清中fascin重组蛋白的表达情况。结果:毕赤酵母能够分泌表达约69kD的fascin重组蛋白,表达量为40μg/L。结论:毕赤酵母可以分泌表达fascin蛋白,但由于分泌表达量较低,尚达不到工程化要求。     

肝右叶（Ⅶ/Ⅷ段）肝癌放疗金标植入下CBCT验证摆位误差的分析

目的 分析测定肝右叶（Ⅶ/Ⅷ段）肝癌患者CBCT图像引导下的分次间的摆位误差,评价采用金标植入对肝右叶（Ⅶ/Ⅷ段肝癌放疗校正摆位误差的必要性。方法 回顾分析2020年2月至2021年12月期间13例首次在我科放疗的肝右叶（Ⅶ/Ⅷ段）肝癌患者。将13例患者分为A、B两组,A组8例均采用金标植入,B组5例均无植入金标。A、B两组均采用SBRT共面照射技术,治疗前利用OBI系统行KV级-CBCT图像引导,测定分次间的平移摆位误差。结果 13例患者共15个病灶（均<3 cm,中位数2.3 cm）进行了65次的CBCT图像引导,测得的分次间的平移摆位误差分别为：A组8例金标植入38组数值为X轴（2.5±1.1）mm,Y轴（4.2±2.1）mm,Z轴（3.0±1.4）mm;B组5例无金标植入27组数值为X轴（2.7±1.2）mm,Y轴（5.6±2.8）mm,Z轴（2.9±1.6）mm（定义左右方向为X轴,头脚方向为Y轴,腹背方向为Z轴）。因均采用共面SBRT照射技术,定义旋转摆位误差为零（包括矢状面,横断面和冠状面）。结论 肝右叶（Ⅶ/Ⅷ段）肝癌由于病变靠近膈肌,受呼吸运动影响大（尤其Y轴头...     

食管癌细胞中fascin基因启动子区的克隆与初步鉴定

目的:对食管癌细胞中fascin基因启动子区进行克隆鉴定. 方法:应用PCR技术从食管癌细胞系EC109中扩增出fascin基因5′侧翼区5段不同长度的片段,并将其克隆至萤火虫荧光素酶报告基因表达载体pGL3-Basic(pGLB)中, 然后将这些质粒与对照质粒pGLB、内参照质粒pRL-TK共转染EC109细胞,48 h后用双荧光素酶检测系统分析这些重组子报告基因转染细胞的相对荧光强度,并结合生物信息学分析,以判断fascin基因启动子区所在位置. 结果:用DNA重组技术成功构建了5个系列缺失重组荧光素酶报告基因表达载体. 相对荧光素酶活性检测表明,与对照组相比,上述一系列重组质粒转染细胞均显示出较高的荧光素酶活性. 生物信息学分析发现,在启动子区(-436～ 1)有标志性调控元件TATA盒(-34～-29). 结论:在食管癌细胞中fascin基因的启动子区可能位于转录起始位点上游约436 bp的区段内.     

两种食管鳞癌细胞系增殖和侵袭能力的比较研究

目的：研究两种来源不同的食管鳞癌细胞系EC109和KYSE510分裂增殖能力和侵袭能力的差异。方法：利用MTT实验和侵袭实验,在体外分别检测EC109和KYSE510细胞的分裂增殖能力和侵袭能力;采用裸鼠皮下接种实验和爪垫皮下接种淋巴结转移模型,比较两种细胞在体内的成瘤能力、局部侵袭能力和区域淋巴结转移能力的差异;免疫印迹检测上皮-间充质细胞转换标志蛋白E-cadherin、γ-cadherin和Vimentin在两种细胞中的表达水平。结果：体外实验表明,EC109细胞的分裂增殖和侵袭能力均明显较KYSE510细胞的强（P〈0.05）;皮下接种和爪垫皮下接种淋巴结转移实验显示EC109细胞的成瘤能力、局部侵袭能力和淋巴结转移能力均较KYSE510细胞的高;免疫印迹检测发现,E-cadherin和γ-cadherin在EC109细胞中的表达水平较KYSE510细胞中的表达低,而Vimentin在EC109细胞中的表达则较KYSE510细胞中的表达高,提示EC109细胞发生上皮-间充质细胞转换的程度较KYSE510的高。结论：EC109细胞的增殖和侵袭能力均较KYSE510细胞的强,上皮-间充质细胞转换可能是导致这种差异的原因之一。