TLR7对日本血吸虫感染诱导的脾脏ICOS+CD4+ T细胞的影响

目的 研究日本血吸虫感染小鼠脾脏中Toll样受体7(TLR7)对可表达诱导共刺激分子(ICOS)的CD4⁺ T细胞的含量、表型和功能的影响。方法 使用日本血吸虫分别感染C57BL小鼠和TLR7基因敲除(TLR7 KO)小鼠,并分别设未感染对照组。分离脾脏,制备单细胞悬液,使用流式细胞计数分别检测ICOS⁺CD4⁺ T细胞的含量、ICOS⁺CD4⁺ T细胞活化和功能相关分子的表达情况。结果 与未感染对照组相比,C57BL/6组小鼠脾脏ICOS⁺细胞的比例由(13.7±3.1)%升高至(24.6±4.3)%,差异有统计学意义(P<0.05);感染C57BL/6组小鼠ICOS⁺CD4⁺ T细胞中表达CD69、CD40L和CXCR5分子细胞的比例明显升高,分别达到(32.2±7.1)%、(4.0±1.4)%、(6.1±1.1)%(P<0.05),CD62L⁺细胞的比例明显下降至(20.1...     

TLR7介导日本血吸虫感染C57BL/6小鼠脾脏的T细胞反应

目的 探究日本血吸虫感染后小鼠脾脏TLR7对T细胞反应的调节作用。方法 使用日本血吸虫感染6周的C57BL/6小鼠（WT）和TLR7-KO小鼠,并设立相应对照组。然后观察组织病变情况,分离脾脏淋巴细胞,运用qRT-PCR、流式细胞术检测脾脏中CD4⁺T和CD8⁺T细胞数量改变以及TLR7分子表达;进一步通过流式细胞术检测WT和TLR7-KO小鼠感染前后CD4⁺T和CD8⁺T细胞CD25、CD69、CXCR5、CD40L等活化表型的变化;经PMA和离子霉素的刺激,使用细胞内细胞因子染色的方法检测CD4⁺T和CD8⁺T细胞IFN-γ、IL-4分泌情况。结果 日本血吸虫感染后,小鼠肝脏和脾脏明显增大,脾脏中CD4⁺T和CD8⁺T细胞发生大量聚集;感染后CD4⁺T和CD8⁺T细胞多种活化及功能相关指标均显著上升,且IL-4⁺CD4⁺T...     

感染伯氏疟原虫小鼠外周血淋巴细胞及其表面分子的检测

为探讨C57BL/6小鼠在感染伯氏疟原虫(Plasmodium berghei)后外周血中的免疫细胞及其表面分子变化情况,将C57BL/6小鼠分为感染组和对照组(n=5),分别尾静脉注射伯氏疟原虫混悬液和生理盐水;感染第6天(Day 6,D6)处死小鼠,取外周全血并制备免疫细胞悬液;FACS检测小鼠B细胞、T细胞、CD...     

日本血吸虫感染的小鼠肺脏组织CD69~+TRM细胞免疫学特性的变化

目的探究日本血吸虫感染的小鼠肺脏CD69~+组织定居记忆T细胞(TRM)的表型和功能的变化。方法使用血吸虫感染C57BL/6小鼠,6周后分离感染组及正常对照组小鼠的肺脏组织,制备石蜡切片,使用HE染色,观察肺部病变情况;制备单细胞悬液,用流式细胞术检测CD4~+和CD8~+的CD69~+TRM的含量;使用细胞表面染色方法,观察CD69~+TRM细胞表面CD103、CD62L和CD107a分子的表达情况;使用细胞内细胞因子染色法,检测CD69~+TRM细胞白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)、IL-9和IL-10的分泌情况。结果日本血吸虫感染小鼠肺脏组织出现明显肉芽肿病变;流式细胞术检测结果显示,在CD4~+T和CD8~+T细胞中,感染组CD69的表达比例均高于正常组[(19.02±2.87)%vs.(4.29±0.21)%,(7.61±1.99)%vs.(2.46±0.49)%],差异有统计学意义(P0.05)。在CD4~+T细胞中,CD62L和CD107a分子在感染组小鼠CD69~+细胞的表达比例低于正常组[(6.41±0.47)%vs.(23.95±1.63)%,(30.19±2.70)%vs.(48.15±2.75)%],差异均有统计学意义(P0.05)。在CD8~+T细胞中,感染组小鼠CD69~+细胞表面CD103和CD62L分子的表达比例远低于正常组小鼠[(19.12±0.41)%vs.(44.79±3.64)%,(38.89±4.59)%vs.(58.69±2.12)%],差异均有统计学意义(P0.05)。在CD4~+T细胞中,感染组CD69~+T细胞相比正常组表达较高水平的IL-4[(27.25±0.88)%vs.(14.57±1.36)%],差异有统计学意义(P0.05)。在CD8~+T细胞中,感染组CD69~+T细胞相比正常组表达较高水平的IFN-γ[(45.08±4.25)%vs.(2.75±0.07)%],差异有统计学意义(P0.05)。结论小鼠肺脏组织中存在着一群表达CD69的TRM细胞,在日本血吸虫感染诱导的肺部肉芽肿病变过程中发挥了重要的作用。     

日本血吸虫感染小鼠的脾脏CD8+PD-1+T细胞的功能特性

目的研究日本血吸虫感染后小鼠脾脏CD8+PD-1+T细胞含量及功能的变化情况。方法使用日本血吸虫感染5～6周的C57BL/6小鼠,分离脾脏,制备石蜡切片,HE染色,观察组织病变情况;分离淋巴细胞并计数,运用流式细胞术检测CD8+PD-1+T细胞的含量;使用细胞表面染色的方法观察CD8+PD-1+T细胞的CD25、CD69、CXCR5、CD40L的表达变化;经PMA和离子霉素的刺激,使用细胞内细胞因子染色的方法检测IFN-γ、IL-10和IL-12的分泌情况。结果日本血吸虫感染后,小鼠体质量下降(P0.05),而脾脏质量和体积均明显上升(P0.01);脾脏中CD8+PD-1+T细胞的比例和绝对值数目增加(P0.01);感染组CD8+PD-1+T细胞高表达CD69(P0.05),而感染组CD8+PD-1+T细胞CXCR5分子表达显著下降(P0.05);经PMA与离子霉素刺激以后,CD8+PD-1+T细胞IFN-γ分泌增加(P0.05)。结论血吸虫感染5～6周小鼠脾脏中CD8+PD-1+T细胞为一群主要的活化细胞群可大量分泌IFN-γ,在血吸虫感染疾病发挥重要的免疫调节作用。