阴道毛滴虫Rab11鸟苷三磷酸酶eDNA克隆和序列分析

目的 近年研究表明Rab11鸟苷三磷酸酶在调节各种真核细胞的膜转运通道中发挥着重要作用。但是，对于原生动物毛滴虫膜转运系统的研究仍甚少。本研究旨在克隆和分析阴道毛滴虫Rabll鸟苷三磷酸酶基因，以便进一步探讨其功能。方法 使用SMART cDNA文库构建试剂盒构建阴道毛滴虫cDNA表达文库，用生物信息学进行TvRab11同源分析，鉴定TvRab11基因，用PCR方法扩增基因组DNA，TA克隆TvRab11 cDNA、测序及序列分析。结果 在分离出的cDNA克隆中发现一个Rab11鸟苷三磷酸酶同源基因。该cDNA序列长710bp，读码框含636bp，推测蛋白质序列具211个氨基酸。序列分析表明该基因系Rab11亚家族的同源基因，其推测肽链与拟南芥Rab11c的同源性晟高（一致性60％，相似性79％），与人类Rab11b次之（一致性58％，相似性78％）。该氨基酸序列拥有Rab鸟苷三磷酸酶家族的所有保守结构域和特异性Rab结构域（RabF1-5）。进化树分析也表明该基因系Rab11的同源基因。序列分析还显示该基因的基因组DNA序列与cDNA序列完全一致．提示该基因无内含子。结论分析表明该基因是阴道毛滴虫Rab11鸟苷三磷酸酶同源基因，其功能有待进一步研究。     

阴道毛滴虫Rab1a重组蛋白的表达和细胞内定位

目的制备阴道毛滴虫(Trichomonasvaginalis,Tv)Rab1a重组蛋白及其多克隆抗体,并对TvRab1a蛋白进行阴道毛滴虫的细胞内定位。方法将我们已构建的pQE80L/TvRab1a重组表达质粒转入大肠埃希菌E.coliM15,在IPTG诱导下表达重组蛋白,经Ni-NTA亲和柱层析后获得纯度较高的TvRab1a的重组蛋白;用经复性处理的重组蛋白免疫动物,获得TvRab1a重组蛋白抗血清,免疫印迹WesternBlot鉴定抗血清。采用荧光免疫细胞化学对TvRab1a蛋白进行细胞内定位。结果WesternBlot分析显示,TvRab1a重组蛋白可与豚鼠的抗TvRab1a血清反应,同时该抗血清在滴虫提取蛋白中检测到与预测TvRab1a分子量一致的条带;免疫荧光化学检测发现TvRab1a分布于细胞核周围的高尔基复合体与内质网。结论获得的抗TvRab1a蛋白的多抗血清可用于TvRab1a基因功能的研究;TvRab1a功能场所位于高尔基复合体与内质网。     

阴道毛滴虫Rab1a基因的cDNA克隆及重组表达

目的克隆和分析阴道毛滴虫(Trichomonasvaginalis,Tv)Rab1a基因,构建Rab1a基因表达重组载体并表达其融合蛋白,以进一步探讨其功能。方法提取阴道毛滴虫基因组DNA为模板,扩增TvRab1a基因,用pQE80L载体与TvRab1acDNA克隆构建原核表达重组体并表达融合蛋白,纯化表达产物并由SDS-PAGE鉴定。结果在阴道毛滴虫cDNA文库克隆中发现了Rab1a基因,序列分析显示Rab1a基因的基因组DNA序列含有一个25bp大小的内含子。成功构建了pQE/Rab1a原核表达重组体,并表达出预期大小的重组蛋白质。结论分析表明TvRab1a基因是阴道毛滴虫Rab1鸟苷三磷酸酶同源基因,它含有一个25bp的内含子。获得了该基因的重组蛋白,将对TvRab1a基因的功能进行进一步研究。     

105例潮汕籍汉族恒牙期安氏Ⅱ类错头影测量分析

目的分析潮汕籍汉族恒牙期安氏Ⅱ类错畸形的颅颌特征。方法收集105例潮汕籍汉族恒牙期安氏Ⅱ类错患者X线头颅侧位定位片,采用Downs分析法进行分析,所得数据进行性别比较分析,并进一步与广东地区正常及佛山地区安氏Ⅱ类错人群Downs分析法测量值进行比较。结果获取潮汕籍汉族恒牙期安氏Ⅱ类错患者Downs分析法测量值,男女Downs分析法测量值差异没有统计学意义(P>0.05);与广东地区分析正常Downs分析法测量值比较,潮汕籍女性组上下中切牙角(t=1.19,P=0.240)及上中切牙凸距(t=1.86,P=0.070)差异无统计学意义,其它项目测量值均明显偏离正常值,差异有统计学意义(P<0.05);潮汕籍男性患者的面角(t=7.21,P=0.000)、Y轴角(t=7.37,P=0.000)、下颌平面角(t=2.15,P=0.030)及下中切牙-下颌平面角(t=3.78,P=0.000)与佛山地区男性患者相比差异具有统计学意义,潮汕籍女性患者的面角(t=5.57,P=0.000)、下颌平面角(t=2.50,P=0.015)及Y轴角(t=6.39,P=0.000)与佛山地区女性患者相比差异具有统计学意义。结论潮汕籍汉族恒牙期安氏Ⅱ类错患者具备广东人前突的侧貌特征,同时下颌后缩及向后下生长的趋势更明显。     

阴道毛滴虫Rab6鸟苷三磷酸酶同源基因的cDNA克隆和序列分析

Rab鸟苷三磷酸酶是细胞膜转运机制的关键调节分子,与原虫的分泌功能密切相关。本研究旨在克隆和分析阴道毛滴虫Rab6鸟苷三磷酸酶同源基因,以便进一步探讨其功能。作者从阴道毛滴虫cDNA表达文库中分离出2个Rab6鸟苷三磷酸酶同源基因的cDNA克隆,其中1个cDNA序列长658对碱基,读码框含597对碱基,推测蛋白质序列具198个氨基酸。序列分析表明该氨基酸序列与Rab6a蛋白亚家族的同源性最高。另一cDNA序列长764对碱基,读码框含657对碱基,推测蛋白质序列具218个氨基酸。序列比对分析显示该氨基酸序列与Rab6b蛋白有较高的同源性。2个氨基酸序列都拥有Rab鸟苷三磷酸酶家族的所有保守结构域、特异性RabF结构域和典型的异戊烯化结构域。进化树分析提示毛滴虫的这2个基因系Rab6家族的同源基因,在进化上更接近原虫和单细胞的酵母Rab6亚家族。序列分析还显示这2个基因都无内含子,其基因组DNA序列与其cDNA序列完全一致。     

珍香胶囊对大鼠子宫内膜异位症模型病灶的影响

目的研究中药珍香胶囊对大鼠子宫内膜异位症（内异症，endometriosis，EMs）模型内异症病灶的影响。方法自身移植法建立SD大鼠内异症模型，随机分成空白对照组、珍香胶囊低剂量治疗组（0．324g／kg）、珍香胶囊中剂量治疗组（0．648g／k）、珍香胶囊高剂量治疗组（1．296g／k）和内美通治疗组（0．25mg／k）。观察用药后各组模型病灶的大小以及组织学观察子宫内膜的生长形态。结果用药4周后，各组间病灶体积没有明显差异。组织病理学显示用药组的异住内膜生长明显受抑制或变性坏死，病灶组织血供不足。量化分析各用药组内膜平均得分明显低于对照组，但各用药组之间的平均分没有明显差异。结论珍香胶囊能够抑制、破坏异住内膜的增长，其作用与内美通相似。在本次实验的剂量范围内其药物作用没有明显的剂量依赖性。     

白藜芦醇对PC12生长周期停滞的研究

目的 研究白藜芦醇对PC12的细胞周期停滞调节的作用.方法 应用5μmol/L,10μnol/L,20μmol/L和50μmol/L不同浓度的白藜芦醇作用于PC12,用MTT和流式细胞术观察PC12细胞周期的变化.结果 随着白藜芦醇浓度增加细胞存活率降低,流式细胞术检测发现10μmol/LRSV使细胞G0/G1期明显延长(P=0.023).而50μmol/LRSV细胞凋亡增加(P＜0.005).结论 低浓度的RS、,能够诱导PC12细胞周期停滞而高浓度的RSV诱导细胞凋亡.     

白介素-13与造血调控

白介素－13是由Th2细胞分泌的一种细胞因子，具有造血因子超家族类似的基因结构，染色体定位，空间结构及受体结构，通过与受体结合，表成IL－3－受体复合物，使JAK活化，启动JAK－STAT6信号通路，激活有关基因的转录，调节造血前体细胞的功能，本文就IL－13对造血系统的作用，IL－13的受体结构，信号传导的过程作一综述。     

蛋白酶活化受体1介导人胚肺成纤维细胞释放单核细胞趋化蛋白-1

目的：研究蛋白酶活化受体1（PAR1）对凝血酶诱导人胚肺成纤维细胞（HFL-1）释放单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的调节作用。方法：HFL-1用PAR1激动剂凝血酶、PAR1活性肽SFLLR和反活性肽RLLFS进行诱导,并用PAR1阻断剂SCH79797进行阻断后用凝血酶和SFLLR刺激;用ELISA检测MCP-1浓度。结果：凝血酶及SFLLR可引起HFL-1释放MCP-1,而RLLFS不能引起MCP-1的释放增加;SCH79797可阻断凝血酶及SFLLR诱导HFL-1释放MCP-1。结论：PAR1介导凝血酶诱导的HFL-1细胞释放MCP-1。     

探讨肺纤维化时表达单核细胞趋化蛋白-1的主要效应细胞

目的 研究凝血酶对人肺上皮细胞及正常人肺成纤维细胞释放单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的调节作用.方法 人肺支气管上皮细胞(normal human bronchial epithelial cells,NHBE)、人肺癌上皮细胞系A549及正常人肺成纤维细胞(normal human lung fibroblasts,NH-LF)分别培养于96孔或6孔板培养板内,凝血酶诱导4h和24h后,收集上清液及细胞裂解液.ELISA方法检测MCP-1蛋白水平:实时荧光定量RT-PCR技术检测MCP-1 mRNA水平.结果 凝血酶可诱导NHBE、A549及NH-LF细胞释放MCP-1,但NH-LF细胞的MCP-1释放量远远高于NHBE及A549细胞;凝血酶还可诱导NH-LF细胞mRNA表达.结论 人肺成纤维细胞可能是肺内表达MCP-1的主要来源细胞,因此在肺纤维化时可能起重要作用.