十二指肠钩虫金属蛋白酶组织抑制剂同源物Ad-TIMPL-1基因克隆及其原核表达

目的克隆十二指肠钩虫金属蛋白酶组织抑制剂同源物（TIMPL）Ad-TIMPL-1基因并进行原核表达。方法分别用3’RACE及RT-PCR技术从十二指肠钩虫成虫cDNA中扩增编码Ad-TIMPL-1的cDNA3’末端及5’末端序列;序列经拼接后进行初步生物信息学分析;将Ad-TIMPL-1成熟肽编码序列克隆至原核表达载体pET-32a,构建重组表达质粒;重组质粒转化至大肠杆菌BL21（DE3）后,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达情况。结果成功克隆获得了编码Ad-TIMPL-1的全长cDNA序列并登记到GenBank（accession no.EF495071）;Ad-TIMPL-1完整阅读框为396bp,编码132个氨基酸残基组成的蛋白,含16个氨基酸残基组成的信号肽;成功构建了原核表达重组质粒pET-32a/Ad-TIMPL-1,并在大肠杆菌中得到了表达。结论本研究首先从十二指肠钩虫中克隆到了Ad-TIMPL-1基因并进行了原核表达,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。     

苦艾对伯氏疟原虫的抗疟实验研究

目的观察苦艾对感染伯氏疟原虫小鼠的疗效。方法按“四天抑制法”的d0感染，d0～d3给药，每天1次，d4涂薄血膜检查，并计算每天存活率及d4减虫率。结果不同浓度苦艾组疟鼠累积生存率与对照组比较，0、30g／ml组与0．45g／ml组差异有统计学意义（P〈0．05）；苦艾（0．30g／ml和0．45g／ml）组的d4减虫率与对照组相比差异有显著性；苦艾（0．15g／ml）组的d4减虫率与对照组相比差异无显著性。结论苦艾（0．30g／ml与0．45g／ml）能较好抑制伯氏疟原虫的生长，对小鼠的存活状况有改善作用。     

抗菌肽Cecropin-His-6基因的真核表达及其生物活性研究

目的 研究家蝇幼虫Cecropin-His-6抗菌肽基因生物学功能。方法从家蝇幼虫体内扩增Cecropin-His-6抗菌肽基因，构建pcDNA3．1／Cecropin-His-6重组表达质粒并用脂质体转染CHO细胞中，G418筛选，HisTrap HP亲和层析柱纯化目的蛋白，琼脂糖平板抑菌试验检测目的蛋白的抗菌活性。结果pcDNA3．1／Cecropin-His-6重组质粒成功转染入CHO细胞中，并获得具有抗菌活性的Cecropin-His-6目的蛋白。结论家蝇幼虫抗菌肽哺乳动物型工程细胞表达系统的建立，为进一步制备抗耐药菌的肽类抗生素奠定了基础。     

下肢深静脉栓塞病人的护理

下肢深静脉血栓形成已成为长期卧床患者以及手术病人可能发生的严重并发症，致病因素有血流缓慢，静脉壁损伤和高凝状态三大因素。对于血栓形成的高危病人，应及早预防，一旦深静脉栓塞，应及时发现，及时治疗，本病严重的可导致下肢功能完全或者部分丧失而致残，并可发生致命的肺栓塞。护理人员应有高度的责任心和强烈同情心，密切观察病情，做到精心护理。现将其护理体会总结报告如下：[第一段]     

家蝇幼虫Defensin成熟蛋白序列的克隆及在原核中的表达

目的 克隆家蝇幼虫defensin成熟蛋白编码序列并在大肠杆菌中表达，为进一步的研究该基因的功能奠定基础。方法 以家蝇幼虫cDNA文库为模板扩增出defensin基因的成熟蛋白全长编码序列，构建重组原核表达载体pGEX／MDEF，转化的克隆(质粒)通过筛选并测序鉴定。重组的pGEX／MDEF在大肠杆菌BL21(DE3)中表达，SDS-PAGE鉴定其表达情况和分子质量并用抗鼠GST单抗作western blot杂交进一步鉴定融合蛋白的表达。结果 以家蝇幼虫cDNA文库扩增出一条长约为140bp的cDNA片段，经测序证实其为defensin基因成熟蛋白的编码序列，它编码含40个氨基酸的蛋白质，预测其分子质量单位为4kD。被成功克隆入pGEX-4T-1载体的家蝇幼虫defensin基因的cDNA，在重组大肠杆菌BL21(DE3)中诱导可大量生成相对分子质量30KD融合蛋白。结论 成功构建了家蝇幼虫defensin基因原核表达载体，且其成熟蛋白的编码序列在大肠杆菌高效表达。为下一步表达蛋白纯化，以及研究其生物活性提供了材料。     

防御素的研究及应用

防御素是一组小分子阳离子抗菌活性肽，富含精氨酸和二硫键，广泛分布于动物、植物和昆虫体内。由于具有广谱抗微生物的特性，防御素在医药、食品和植物转基因工程上将发挥重要作用。文章对不同来源防御素的分子特征、抗菌机制以及应用前景进行综述。     

家蝇幼虫抗菌肽Attacin基因的克隆表达及抑菌生物学活性

目的克隆家蝇幼虫Attacin抗菌肽基因,构建原核融合表达载体,建立Attacin体内抗菌活性检测系统,优化表达和纯化Attacin目的蛋白,并初步研究其抗菌生物学功能。方法以pUCm-T/Attacin重组质粒为模板,设计特异性引物,PCR扩增Attacin编码区序列,分别克隆至原核表达载体pET30a( )和pGEX-4T-1,构建原核重组质粒,转化大肠埃希菌,表达重组Attacin蛋白,并在大肠埃希菌中体内检测Attacin的抗菌活性。利用亲和层析柱纯化重组融合蛋白Attacin,SDS-PAGE进行纯度分析,琼脂糖平板抑菌试验鉴定其生物活性。结果pET30a(a )/Attacin和pGEX-4T-1/Attacin重组质粒分别转化大肠埃希菌后,以IPTG诱导表达,与未诱导对照相比,含有重组质粒的宿主菌生长受到抑制,从pET30a( )/Attacin重组质粒的表达宿主菌中未能获得His-Attacin融合蛋白,而从pGEX-4T-1/Attacin重组质粒转化菌种获得GST-Attacin融合蛋白。SDS-PAGE分析表明Attacin重组蛋白分子量与预期结果一致,琼脂糖平板抑菌试验显示重组Attacin具有抗菌活性。结论Attacin基因在原核系统中成功表达,并且纯化后具有抑菌活性,为下一步研究Attacin的生物学功能及其应用开发奠定了基础。     

Attacin抗菌肽基因体内抗菌活性研究

目的建立Attacin基因体内抗菌活性检测系统,并初步研究其抗菌活性。方法PCR扩增Attacin编码区目的序列,并构建原核表达重组质粒,转化大肠埃希菌,在体内检测Attacin的抗菌活性,同时SDS-PAGE分析融合蛋白表达情况。结果与未诱导对照相比,包含重组质粒的宿主菌生长受到抑制,含pET30a（＋）/Attacin宿主菌诱导表达后,提纯不到His-Attacin融合蛋白,而含pGEX-4T-1/Attacin宿主菌可获得GST-Attacin融合蛋白。结论建立灵敏、简便的Attacin体内抗菌活性检测方法,为下一步研究Attacin的生物学功能及其应用开发奠定基础。     

关于公立医院党风廉政建设的调研分析

公立医院作为我国医疗卫生行业的主体,是全面贯彻执行党和国家在民生领域的各项方针、政策的重要载体和主要阵地,党风廉政建设状况与公立医院各项事业的健康发展直接相关。笔者以苏州市一所三级甲等公立医院为对象,开展党风廉政建设问卷调查,分析目前公立医院党风廉政建设状况和存在问题,结合调查结果对公立医院在新形势下如何以“廉洁文化”为抓手持续推进党风廉政建设,提出对策建议。     

抗菌肽Defensin真核表达载体的构建及其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

目的 构建家蝇幼虫抗菌肽的真核表达载体,并检测它在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的表达情况.方法 以pUCm-T/Defensin为模板,设计带His标签特异引物,扩增C-末端融合6×His标签的Defensin基因的cDNA全长编码区序列,将其克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体.经酶切及测序鉴定后,以阳离子脂质体...