丙酸睾酮对大肠杆菌RecQ解旋酶结构和功能的影响

目的研究体外丙酸睾酮对大肠杆菌RecQ解旋酶结构和功能的影响及二者的相互作用机制。方法分别运用荧光偏振技术、ATPase试剂盒和紫外吸收光谱技术分析丙酸睾酮对大肠杆菌RecQ解旋酶活性和DNA结合活性、AT-Pase活性和构象的影响。结果丙酸睾酮能够影响E.coliRecQ解旋酶的活性。低浓度促进解旋酶活性,高浓度抑制;抑制RecQ解旋酶与dsDNA的结合活性,其抑制常数Ki小于7×10-5 nmol.L-1;对与ssDNA结合活性的Ki为7×10-3 nmol.L-1;对ATPase活性抑制作用的时间相关性较弱;影响RecQ解旋酶的构象变化,但峰位无偏离。结论提示丙酸睾酮与RecQ解旋酶具有弱相互作用,二者具有两个结合位点。     

Bloom解旋酶基因RNA干扰载体对前列腺癌PC3细胞的抑制作用

目的 采用RNA干扰(RNAi)技术抑制前列腺癌PC3细胞系中Bloom解旋酶基因的表达,探讨Bloom解旋酶基因表达下调后对PC3细胞的抑制作用.方法 使用实验室前期成功构建的两条针对于Bloom解旋酶基因的RNAi载体shRNA-1和shRNA-2转染前列腺癌PC3细胞,以未转染RNAi载体为对照组,分别在转染24、48、72h后通过MTT法检测细胞增殖情况,转染48 h后通过Transwell小室法检验细胞侵袭、迁移能力,细胞划痕实验检测细胞迁移情况,Hoechst/PI双染法检测细胞凋亡情况.结果 转染RNAi载体后,与未转染对照组相比,各实验时间点的转染组细胞增殖率降低(P＜0.05),Transwell细胞侵袭和迁移实验中穿过室膜的细胞数与对照组比均减少(侵袭:119±24、118±30 vs 227±38;迁移:122±13、121±47 vs 277±32,P＜0.05),划痕愈合率与划痕迁移距离均降低,48 h时差异有统计学意义(P＜0.05),而且细胞凋亡明显增加.结论 以RNAi载体干扰Bloom解旋酶基因的表达可抑制前列腺癌PC3细胞的增殖、迁移和侵袭能力并促进其凋亡,为前列腺癌的靶向基因治疗提供了依据.     

溴化乙锭对布鲁姆综合症解旋酶生物学特性的影响

目的研究溴化乙锭(EB)对BLM解旋酶的生物学特性的影响。方法应用荧光偏振技术研究EB对BLM解旋酶的DNA结合活性与解链活性的影响;应用自由磷检测技术研究EB对BLM解旋酶的ATPase活性的影响;应用紫外吸收光谱法研究EB对BLM解旋酶的构象的影响。结果EB可完全抑制BLM解旋酶的DNA结合活性,当双链DNA与单链DNA作为底物时,Ci值分别为(21.3±0.7)μmol.L-1和(3.3±0.3)μmol.L-1;可完全抑制BLM解旋酶的解链活性,Ci值为(9.0±0.3)μmol.L-1;对BLM解旋酶的ATPase活性有抑制作用,但差异无显著性;可改变BLM解旋酶的构象,最大吸收峰发生红移。结论 EB可以结合BLM解旋酶并改变其构象,抑制其与DNA的结合,从而抑制BLM解旋酶的生物学活性。     

三种癌细胞株中Bloom综合征解旋酶(BLM)的表达水平高于正常细胞

<正>由于Bloom综合征解旋酶(Bloom’s syndrome helicase,BLM)基因缺陷引起的Bloom综合征(Bloom’s syndrome,BS)是一种罕见的常染色体隐性遗传病,BS患者的临床特征表现为严重的生长迟缓、学习障碍、免疫缺陷等[1-2]。BLM解旋酶在睾丸和胸腺中高表达[3],另一方面,BLM基因的突变和高表达与肿瘤发生相关[4],如结肠癌、肺癌、白血     

苯甲酸雌二醇对大肠杆菌RecQ解旋酶生物学活性的影响

 目的 研究体外苯甲酸雌二醇对大肠杆菌RecQ解旋酶生物学活性的影响及作用机制。方法 运用荧光偏振技术和ATPase检测技术分析苯甲酸雌二醇对大肠杆菌RecQ解旋酶活性、DNA结合活性和ATPase活性的影响。结果 苯甲酸雌二醇对RecQ解旋酶活性、DNA结合活性及ATPase活性均有弱抑制作用,对RecQ解旋酶活性抑制常数K_i为5×10-3 nmol·L-1,对dsDNA和ssDNA结合活性的K_i分别为5×10-2和0.5 nmol·L-1。结论 在体外苯甲酸雌二醇对大肠杆菌RecQ解旋酶生物学活性具有弱抑制作用,二者至少有两个作用位点。