α1,3半乳糖基转移酶新等位基因278C＞T的鉴定

目的研究中国汉族人群ABO血型系统中Bw变异型的分子遗传背景，发现并鉴定一个新的ABO等位基因。方法血型血清学方法鉴定1例ABO血型疑难样本，应用聚合酶链反应、逆转录-聚合酶链反应和DNA序列分析等方法对先证者ABO基因转录调控序列和全编码序列进行突变筛选和检测。结果血清学和家系调查鉴定该样本为Bw表型，对gDNA和cDNA研究发现该样本存在第6外显子278C／T杂合，单倍体分析发现一种新的Bw等位基因，该等位基因与B101相比，差异仅在第6外显子的278C〉T错义突变，导致多肽链P93L替换，该突变点位于以前报道的Bw等位基因功能域之外。结论在中国人群中发现一种新的导致Bw变异型的ABO等位基因。     

汉族Rh血型DⅥ表型Ⅲ型的分子结构研究

Rh血型系统的部分D表型（或不完全D表型，panial D phenotype）可以分成D^Ⅱ（D category Ⅱ，D^Ⅱ）-D^Ⅶ（D category Ⅶ，D^Ⅶ）6个表型（D^Ⅰ已经被废除），其中D^Ⅵ（D category Ⅵ，D^Ⅵ）表型临床意义显著。D^Ⅵ表型女性妊娠RhD阳性胎儿可导致严重的新生儿溶血病，如果D^Ⅵ表型患者被误检为RhD阳性而接受RhD阳性血液，产生抗RhD的风险也很高。     

一例产生抗-P的罕见P1+P^K+P-个体的血清学和分子生物学研究

目的研究1例P1+P^K+P-(P1^K)表型个体的血型、抗体及其分子机制。方法采用血清学方法鉴定血型和不规则抗体,采用PCR扩增α-1,4-半乳糖基转移酶基因(α-1,4-galactosyltransferase,A4GALT)和β-1,3-N-乙酰半乳糖氨基转移酶基因(β-1,3-N-acetylgalactosaminyltransferase,B3GALNT1)编码区,并测序分析DNA序列。结果血清学试验鉴定受检者为P1^K表型,血清中含有可与P阳性红细胞凝集并溶血的抗-P,分子生物学技术发现其B3GALNT1基因编码区存在c.202C>T(CGA>TGA)纯合突变。结论受检者为罕见的P1^K表型,血清中存在抗-P,B3GALNT1基因c.202C>T无义突变可能是导致其P1^K表型的分子机制。     

1例类孟买ABmh血型的鉴定

类孟买血型是一种罕见的血型,血清学表现与常规ABO血型有很大差异。在我站无偿献血人群中,1例红细胞与抗A、抗B均不凝集,血清凝集ABO细胞。经进一步检测,证实为类孟买ABmh血型,现报告如下。1材料与方法1.1标本来源献血者,胡某,21岁,籍贯福建蒲田市,在血型鉴定过程中,其正反定型符合O型,但血清凝集O型红细胞。重新采集外周静脉血,收集唾液,进一步做血清学试验。1.2试剂试剂红细胞和标准抗血清(上海血液中心),鼠抗人单克隆抗-Lea、抗-Leb抗体(加拿大Titus公司)。1.3ABO定型正定型中增加抗-A1、抗-AB、抗-H,反定型增加自身细胞,血清学…     

96例血小板基因配型患者的HLA-Ⅰ类抗体特性分析及抗原免疫原性估算

目的 分析血小板基因配型患者的HLA-Ⅰ抗体特异性,并估算HLA抗原免疫原性。方法 标本来自医院送检本中心申请血小板基因配型的血小板输注无效(PTR)患者,共计96份。采用Luminex技术对患者标本进行HLA-Ⅰ抗体特异性检测,并根据MFI分析抗体表达水平。人群HLA抗原错配率、相对免疫原性根据HLA-A、-B位点等位基因频率分布和抗体检出频次分别进行估算。结果 96份患者标本均检出HLA-Ⅰ类抗体,但抗体种类分布较广。HLA-A、-B、-C磁珠包被抗原(共计97个)对应抗体的平均阳性检出率分别为0.38、0.47、0.28。在浙江人群中HLA-A和-B系统中,抗原频率较高的分别为HLA-A2、A11、A24和HLA-B60、B46、B58,其相对免疫原性分别为0.403、0.283、0.342和0.100、0.067、0.178。结论 PTR患者存在不同种类特性的HLA-Ⅰ抗体,证实不同HLA-A、-B抗原的相对免疫原性存在差异。     

血小板数字化配型信息体系构建及其应用

目的 构建血小板数字化配型信息系统。方法 设计血小板数字化配型管理信息框架,开发血小板基因库管理模块主要功能,并与已建成运行的临床申请、实验室检测、献血服务、血液库存与发放等模块对接,将信息系统进行初步的临床应用。结果 成功开发了血小板配型信息体系,入库HLA和HPA已分型数据单采献血者5 048例,完成306份搜寻报告。16.5%的搜寻报告即刻在库存血液中找到配合型血小板,所有配型的中位等待时间为3 d。自动血液锁定方式比手动方式的等待时间明显缩短(3.8±3.1 d和5.4±5.4 d)。结论 研发的血小板数字化配型信息系统实现了献血者和患者的全流程管理,有助于提高血小板配型水平。     

一例Bw亚型的糖基转移酶等位基因鉴定及蛋白结构分析

目的对1例Bw亚型个体进行分子遗传学及蛋白结构分析。方法采用血清学技术进行红细胞表面抗原和血清中抗体的测定,并用PCR-基于序列的分型(PCR-sequence-based typing,PCR-SBT)方法进行ABO基因的全编码区序列和第1内含子区红系特异性调控元件的分析。进一步对存在突变位点的第5~7外显子扩增片段进行T-A克隆分离单倍体和序列验证分析。应用Pymol软件对突变蛋白进行3D结构的模拟,分析氨基酸残基的变化对蛋白结构稳定性的影响。结果该样本血清学表现为B抗原减弱,血清中含有抗-B抗体。ABO基因全编码区测序初步确定其基因型为ABO*B.01/ABO*O.01.01伴有c.734C/T的杂合突变。第1内含子红系特异性调控元件区碱基序列无异常。通过单倍体克隆分离,确定突变位点c.734T位于ABO*B.01等位基因链,另一个等位基因为ABO*O.01.01。该突变将B糖基转移酶活性中心245位Thr置换为Ile。蛋白3D结构的模拟分析发现氨基酸置换后,与之结合的残基未发生改变而连接的氢键距离发生变化,同时增加了与远距离水分子之间的连接。结论B糖基转移酶基因c.734C>T突变导致酶活性中心氨基酸置换,影响了突变B糖基转移酶蛋白稳定性,引起酶活性减弱,从而产生了Bw变异型。     

罕见类孟买型AB_m~h的鉴定

目的　鉴定类孟买型ABhm。方法　检测先证者ABO、H血型,红细胞进行吸收放散试验,测定唾液中的血 型物质,测序分析并进行家系调查。结果　先证者血型为罕见的类孟买型ABhm,血清中有抗- H,家系调查提示其遗 传方式为常染色体隐形遗传。结论　鉴定出罕见的类孟买型ABhm,血清中含有抗- H。     

Rh阴性血型者Del表型和RhD基因的检测

目的初步探讨中国汉族人群Rh阴性血型者Del表型与RhD基因之间的关系.方法对67例血清学方法检测为Rh阴性的供血者样本进行吸收放散试验以检测Del型,并扩增RhD基因的外显子3,4,5,7,10,检测RhD基因存在情况.结果吸收放散试验表明67例样本中Del型22例,占32.8%,非Del型45例,占67.2%.在所有表型为ccee,ccEe的38例RhD(-)个体中,Del试验均为阴性,RhD基因完全缺失;而在表型为Ccee或CcEe的29例RhD(-)个体中,22例Del试验阳性,其中20例携带完整的RhD基因,2例有部分RhD基因;7例Del试验阴性,其中6例携带部分RhD基因,1例D基因完全缺失.结论中国汉族人群中Rh阴性血型者RhD基因的存在及多态性多由Del引起.     

双碱基缺失型等位基因复合杂合导致的类孟买型个体1例

本研究探索1例类孟买型血型的分子机制,为稀有血型的筛选和鉴定提供理论基础。以血型血清学方法鉴定该个体红细胞的ABO和H表型,利用聚合酶链反应扩增类孟买表型个体的abo基因第6、7外显子和α1,2岩藻糖基转移酶基因(fut1)编码区,并对PCR产物直接测序分析。对纯化的fut1扩增产物进行TOPO克隆和测序,对2处变异位点进行单倍体序列分析。结果表明:血清学分析确认该个体为罕见的类孟买表型;直接测序发现先证者fut1基因第547位和880位附近存在碱基缺失或插入变异;TOPO克隆测序法证实,fut1基因1条单倍体存在第547-552位两碱基AG缺失,另1条单倍体存在880-882位两碱基TT缺失。这2种变异均导致移码突变,并提前形成终止密码。结论:在献血人群中发现1例罕见的类孟买表型,其分子机制为双碱基缺失型fut1等位基因复合杂合所致的α1,2岩藻糖基转移酶活性减弱。