白介素2与梅毒螺旋体膜蛋白Gpd双价核酸疫苗的免疫活性及保护作用研究

目的 探讨白介素2(IL-2)基因与梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)Gpd抗原编码基因融合构建双价核酸疫苗免疫新西兰兔后的免疫应答效果及感染Tp后的保护作用.方法 定向克隆构建真核表达重组体pcDNA3.1(+)/Gpd-IL-2,与先期构建的pcDNA3.1(+)/Gpd真核表达重组体分别设为两个疫苗实验组,同时设pcDNA3.1(+)空质粒对照组及PBS对照组,共4组,每组18只雄性新西兰兔,肌肉多点注射初次免疫,于初次免疫后第10周各实验组兔皮下接种Tp标准株进行感染实验,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测不同时间点免疫兔特异性抗体产生水平和脾细胞IL-2及干扰素γ(IFN-γ)诱导水平,噻唑蓝法检测兔脾淋巴细胞增殖水平.结果 用pcDNA3.1(+)/Gpd-IL-2融合双价疫苗和pcDNA3.1(+)/Gpd单基因疫苗在免疫期间和感染期间均能检测到高滴度的IgG特异性抗体,最高滴度分别可达1∶4096和1∶1024(P值均＜0.01);两疫苗组之间在免疫及感染期间不同时间点比较差异也有统计学意义(P值均＜ 0.01);免疫后第8周双价融合核酸疫苗组及单基因核酸疫苗组兔脾细胞培养上清中IFN-γ分别为(447±22.4)μg/L、(225±17.6)μg/L,IL-2分别为(167±15.7)μg/L、(110±12.6)μg/L,均高于空质粒对照组和空白对照组(P值均＜ 0.01);感染期间不同时间点兔脾细胞受相应蛋白刺激均有明显增殖反应,检测指标均显著高于空质粒对照组和空白对照组(P值均＜ 0.01).早期感染皮损观察显示双价融合核酸疫苗组较之单基因疫苗组有着更低的皮损Tp检测阳性率(17.5％)、溃疡病灶发生率(15％)以及更短的皮损愈合时间.结论 用pcDNA3.1(+)/Gpd-IL-2双基因融合疫苗在兔体内能更有效地诱导保护性体液免疫和细胞免疫应答.     

2014—2019年长沙市手足口病病原谱及流行病学特征分析

目的 了解2014—2019年长沙市手足口病(hand, foot and mouth disease, HFMD)病原谱构成及流行病学特征,为做好手足口病防控工作提供参考依据。方法 2014年1月至2019年12月长沙市手足口病临床诊断病例样本,使用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction, RT-PCR)方法检测标本中的病毒核酸。用Excel 2007软件分析统计结果。结果 2014—2019年共收集样本3 569份,手足口病核酸检测阳性样本2 463份(阳性率69.01%)。进一步分型结果显示柯萨奇病毒(coxsackievirus, CV)A组16型(CVA16)阳性538份(阳性率15.07%),肠道病毒(enterovirus, EV)A组71型(EV-A71)阳性345份(阳性率9.67%),其他型别肠道病毒阳性1 575份(阳性率44.13%),5例病例为CVA16和EV-A71共同感染(阳性率0.14%)。按照病例分类将手足口病样本分为散发轻症、散发重症和聚集性疫情三类,不同病例分类之间的核酸阳性检测结果差异有统...     

长沙人间布鲁菌分离株omp25基因扩增和系统进化分析

目的了解长沙地区人间布鲁菌omp25基因的序列特征并阐明其系统进化关系,为布鲁菌病防控以及omp25基因克隆与表达研究提供参考。方法根据Gen Bank公布的羊种布鲁菌16M的omp25基因序列设计1对PCR引物,采用PCR法从长沙地区布鲁菌分离株基因组中扩增omp25基因,产物用凝胶电泳进行分析后进行双向核苷酸序列测定,测序结果用DNAstar 7.1进行分析,将测序结果提交Gen Bank,并利用Mega 7软件构建布鲁菌长沙分离株系统进化树。结果 41株布鲁菌成功扩增出omp25基因片段,片段长度约640 bp,通过测序后Blast同源性分析,证实41株菌株均为羊种布鲁菌,长沙分离株与10株羊种布鲁菌序列100%相同,进化树显示长沙分离的布鲁菌和国内外羊种布鲁菌位于同一进化分支上,同广西的LA1105参考株亲缘关系最近。结论长沙地区人间布鲁菌分离株omp25基因序列与参考菌株序列同源性高,且与羊种布鲁菌在同一分支,表明omp25基因序列是一个保守序列。该研究结果可为布鲁菌的分子生物学鉴定和诊断试剂的研制提供参考。     

犬肾细胞培养流感病毒条件的优化

目的 对影响流感病毒细胞分离培养的因素进行优化,得到细胞分离培养流感病毒的最佳方案。方法 将4种型别流感毒株接种至犬肾上皮细胞（MDCK）,以不同接种量、吸附时间、培养时间以及TPCK胰蛋白酶浓度进行病毒分离培养,以流感病毒红细胞凝集实验的血凝滴度作为指标对流感分离培养结果进行评价分析。结果甲型H1N1流感病毒、季节性流感病毒H3N2、乙型Victoria系流感病毒、乙型Yamagata系流感病毒在培养过程中的最适条件分别为：接种量为200、200、250、300μL/孔,吸附时间为1.5、1.5、2.0、2.0 h,TPCK胰酶浓度为1.0、2.0、2.0、1.5 mg/mL,培养时间为96、72、120、120 h。结论 成功对4种亚型流感病毒在MDCK细胞中的培养条件进行了优化,在培养流感病毒时应按照不同型别选取不同的培养条件。     

梅毒螺旋体Tp0993重组蛋白的表达及鉴定

目的表达、鉴定梅毒螺旋体（Tp）重组蛋白Tp0993（rTp0993）,为进一步评价其在梅毒血清学诊断中的意义奠定基础。方法 PCR扩增去除信号肽核苷酸序列的Tp0993基因,构建原核重组体pET-28a/Tp0933并诱导表达蛋白;Ni-NTA法纯化重组蛋白,Western blot检测表达产物的抗原性。结果成功构建了原核重组体pET-28a/Tp0993,经诱导表达了一分子量大约为40 Ku的重组蛋白;Western blot结果显示纯化蛋白能被梅毒患者血清特异性识别。结论 rTp0993有较好的抗原性,为进一步研究其在梅毒血清学诊断中的作用奠定了基础。     

湖南省首例人感染H3N8亚型禽流感病例的病毒分离及分子进化分析

目的 本研究从流感样病例样本中分离出湖南省首例人感染H3N8亚型AIV毒株，并对该毒株进行了分子进化分析，为人感染H3N8亚型禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV)的防控提供实验室依据。方法 通过实时荧光RT-PCR方法检测甲型流感病毒核酸、接种MDCK细胞进行病毒培养并通过血凝试验进行初步鉴定，继而对分离到的AIV进行高通量二代基因测序，并将测序结果进行相似性比较、基因特征和进化分析。结果 鉴定出人感染H3N8亚型AIV分离株(A/Changsha/1000/2022(H3N8),相似性分析显示HA和NA基因序列与来自河南省的人感染AIV株A/Henan/4-10CNIC/2022(H3N8)相似性最高，6个内部基因(MP、NS、PB1、PB2、NP、PA)均来源于H9N2亚型AIV。HA蛋白裂解位点为PEKQTR/GLF,未出现连续重复碱性氨基酸，符合低致病性AIV的特征，NA基因出现了耐药位点I312V突变，可能对奥司他韦有耐药性改变。PB2基因出现E627V宿主适应性突变，M2蛋白出现S31N金刚烷胺耐药性位点突变。分子进化显示HA基因属于欧亚分支，...     

2013—2021年长沙市流感样病例暴发疫情流行病学特征及病原学特点分析

目的 分析2013—2021年长沙市流感样病例暴发疫情的流行病学特征及病原学特点，为制定流行性感冒(以下简称“流感”)防控策略提供科学依据。方法 收集长沙市2013年1月1日—2021年12月31日流感样病例暴发疫情流行病学及病原学资料，对疫情的规模、发生时间、地区、场所和病原监测结果进行描述性分析。结果 2013—2021年长沙市共报告163起流感样病例暴发疫情，报告发病病例8 504例，平均罹患率为2.60%(8 504/326 872)。2019年报告数量最多，共81起(49.69%)。2013—2021年报告病例主要集中在冬春季节(11月—12月和1月、3月),构成比为85.89%,浏阳市和长沙县病例数构成比分别为39.26%和23.93%。疫情暴发病例主要发生在中、小学校，共151起(92.64%)。检测病原学标本1 265份，阳性率为67.19%。2013—2021年流感阳性疫情154起，仅1种型别单独流行的年份为2015年的A(H3N2)型和2021年的B(Victoria)型，其他有流感疫情报告的年份均为A、B型别交替混合感染。结论 2013—2021年长沙市冬春季中、...