乙型肝炎病毒总DNA、共价闭合环状DNA和HBsAg在各种慢性乙型肝炎病毒感染者中的定量检测

目的 定量检测慢性乙型肝炎(CHB)、乙型肝炎肝硬化(LC)、肝细胞癌(HCC)患者HBV总DNA(tDNA)、HBV共价闭合环状DNA (cccDNA)和HBsAg,并探讨其特点.方法 荧光定量PCR检测21例CHB、23例LC和25例HCC患者外周血和肝组织标本HBV tDNA、HBVcccDNA,化学发光法定量检测外周血HBsAg.正态数据采用ANOVA分析和t检验,相关性分析采用Pearson检验,非正态数据采用秩和检验.结果 在CHB、LC和HCC患者中,外周血HBVtDNA分别为(5.38±2.08)、(4.96±1.65)和(4.18±0.91)lg拷贝/mL,肝组织HBV tDNA分别为(7.18±1.91)、(6.51±1.87)和(5.87±1.47)lg拷贝/μg,肝组织HBV cccDNA分别为(3.53±2.03)、(2.63±2.13)和(0.58±1.40)lg拷贝/μg,外周血H BsAg分别为(3.30±0.65)、(3.12±0.52)和(2.60±1.03)lg IU/mL,CHB与HCC患者比较,差异均有统计学意义(t=2.446,P=0.013;t=2.562,P=0.014;t=5.799,P＜0.01;t=2.709,P=0.003),LC与HCC患者肝组织HBVcccDNA及HBsAg定量比较,差异有统计学意义(t=-3.894,P＜0.01;t=-2.237,P=0.023).外周血均未检出HBV cccDNA.HBsAg定量与外周血HBV tDNA(r=-0.290,P=0.016)、肝组织HBV tDNA(r=0.372,P=0.002)及肝组织HBV cccDNA(r=0.378,P=0.001)均有关.结论 HBV tDNA、HBV cccDNA、HBsAg在CHB、LC、HCC患者呈逐渐降低趋势,HBsAg定量与外周血HBV tDNA、肝组织HBV tDNA及肝组织HBV cccDNA有关.     

原发性肝细胞癌患者乙型肝炎病毒表面抗原与肝组织HBV cccDNA水平的相关性

目的检测乙型肝炎相关性原发性肝细胞癌患者（hepatocellular carcinoma,HCC）HBV tDNA、HBVcccDNA,并探讨其与乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）定量的相互关系。方法应用实时荧光PCR方法对37例HCC患者癌组织和癌旁组织HBV tDNA、HBV cccDNA及血清HBV tDNA进行定量检测;采用雅培化学发光法进行HBsAg定量检测。结果癌组织HBV tDNA、HBV cccDNA与HBsAg定量无相关性（r=0.146,P=0.388;r=0.151,P=0.371）;癌旁组织HBV tDNA、HBV cccDNA与HBsAg定量无相关性（r=0.323,P=0.051;r=0.186,P=0.271）。癌组织HBV tDNA、HBV cccDNA及HBV cccDNA占HBV tDNA比例与癌旁组织比较差异均无统计学意义（6.61 lg拷贝/μgvs6.26 lg拷贝/μg,P=0.067;0.96 lg拷贝/μgvs1.33lg拷贝/μg,P=0.438;14.23%vs19.65%,P=0.501）;HBV复制指标间相关性弱,仅癌组织HBV cccDNA与外周血HBV tDNA存在相关性（r=0.382,P=0.020）,癌旁组织HBV tDNA与HBV cccDNA存在相关性（r=0.327,P=0.048）,癌与癌旁组织HBV tDNA存在相关性（r=0.665,P〈0.001）。结论 HCC患者病毒复制水平减低,癌与癌旁组织病毒复制水平无明显差异,且与血清HBsAg水平亦无明显相关性。     

乙肝肝硬化患者血清乙肝病毒表面抗原定量水平的研究

目的 分析不同Child-pugh分级的乙肝肝硬化患者血清乙肝病毒表面抗原(HBsAg)定量检测水平及其在各组间与HBV DNA含量之间的相关性.方法 收集乙肝肝硬化患者血清,其中Child-pugh A级38例,B级46例,C级35例,采用雅培化学发光法进行HBsAg定量测定,采用荧光PCR定量法检测HBV DNA含量.结果 HBsAg定量值分别为Child-pughA级[997.70( 146.00～1717.12)IU/mL],Child-pughB级[1158.78(345.82～1889.93)IU/mL],Child-pughC级[613.76(120.78～1528.77)IU/mL],三组比较差异无统计学意义(P=0.464).HBsAg定量与HBV DNA相关性分析:HBsAg定量水平、HBV DNA含量在乙肝肝硬化患者总体中呈正相关(r=0.353,P=0.000),其中Child-pughA级相关性最高(r=0.410,P=0.011),Child-pughB级次之(r=0.366,P=0.012),Child-pughC级则无相关性(f=0.293,P=0.088).在各组中HBsAg定量水平与ALT、AST和TBIL均无相关性.结论 不同Child-pugh分级的乙肝肝硬化患者之间血清HBsAg定量水平无差异;HBsAg定量水平与HBV DNA在Child-pughA级、B级组具有正相关性,C级组无相关性.     

肝细胞癌患者血清胸腺素β4水平

目的检测肝细胞癌（HCC）患者血清胸腺素β4（Tβ4）水平及其影响因素。方法采用ELISA方法检测80例HCC患者血清Tβ4水平,并与40例健康人及30例肝硬化患者比较。同时比较不同肿瘤情况及肝功能对HCC组患者血清Tβ4浓度的影响。结果 HCC患者及肝硬化患者血清Tβ4水平均低于健康人,差异有统计学意义（χ2=81.228,P〈0.001）。按照BCLC分期或CLIP分期将HCC患者分别分为4个或6个亚组,血清Tβ4浓度差异均有统计学意义（χ2=8.669～13.675,P〈0.034）。HCC患者中有肝内转移组血清Tβ4浓度高于无肝内转移组,差异有统计学意义（Z=2.264,P=0.024）;有门脉瘤栓组血清Tβ4浓度高于无门脉瘤栓组,差异有统计学意义（Z=2.574,P=0.010）。无肝内转移而且无远处转移的HCC患者按照肝功能Child-Pugh评分分为A、B、C级3组,血清Tβ4浓度差异有统计学意义（χ2=6.467,P=0.039）。结论肝细胞癌患者血清Tβ4浓度低于健康人,且肝功能越差,血清Tβ4浓度越低。而发生肝内转移或门脉瘤栓的患者血清Tβ4浓度高于未发生者。     

乙型肝炎病毒前C区/BCP区变异与慢加急性肝衰竭的关系

目的 探讨乙型肝炎病毒前C区/BCP区变异与乙型肝炎相关性慢加急性肝衰竭(ACLF)的关系. 方法 收集44例ACLF患者和28例慢性乙型肝炎患者(CHB)的血清及临床资料,并对其中10例ACLF患者进行随访,每周收集血清1次.依据MELD评分对患者的病情进行判断.采用巢氏PCR方法扩增HBV DNA,扩增产物直接测序.序列比对采用BioEdit (7.0.9.0)生物分析软件.采用荧光定量PCR法检测HBV DNA含量.数据采用SPSS13.0软件分析,两组间比较采用t检验及t'检验. 结果 44例ACLF患者基因型均为C型,28例CHB患者中仅两例基因型为B型,其余均为C型.ACLF组患者A1762T、G1764A、T1753V、G1896A、G1899A变异频率分别为88.6％(39/44)、93.2％(41/44)、61.4％(27/44)、63.6％(28/44)和29.5％(13/44),CHB组分别为64.3％(18/28)、67.9％(19/28)、14.3％(4/28)、21.4％(6/28)和3.6％(1/28),两组比较,x2值分别为6.152、7.901、15.468、12.331和7.370,P值均＜0.05,差异均有统计学意义.ACLF组内MELD评分＜ 20、20 ～ 25、＞25组间差异均无统计学意义.CHB组前C区、BCP区均未发生变异的频率为17.9％ (5/28),ACLF组为2.3％ (1/44),CHB组前C区、BCP区均未发生变异的频率高于ACLF组,x2=5.440,P=0.020,差异有统计学意义.ACLF组前C区、BCP区同时发生变异的频率为79.6％(35/44),CHB组为39.3％(11/28),两组比较,x2=12.021,P＜0.01,差异有统计学意义.CHB组仅BCP区有变异的发生频率为42.9％(12/28),ACLF组为20.5％(9/44),x2=4.157,P=0.041,差异有统计学意义.两组均未出现单独的前C区变异.10例ACLF患者均出现3个或3个以上的联合变异位点.G1896A、T1753C、A1846T变异随着病情好转而恢复.结论 乙型肝炎病毒前C区/BCP区变异可能与ACLF的发生相关.