荜茇酰胺抑制破骨细胞分化的机制研究

目的探讨荜茇酰胺对破骨细胞分化的影响及机制。方法通过CCK-8法评估荜茇酰胺对小鼠骨髓来源单核巨噬细胞（BMMs）增殖活性的影响,采用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色评估其对BMMs破骨分化的影响,利用OsteoAssaySurface骨细胞表面培养板研究其对破骨细胞骨吸收能力的影响,并采用qRT-PCR法验证荜茇酰胺处理下BMMs破骨分化过程中核心转录因子活化T-细胞核因子1（NFATc1）和相关破骨特征基因在转录水平的变化。结果2μmol/L及以下浓度的荜茇酰胺对BMMs增殖无明显毒性反应,并且荜茇酰胺可浓度依赖性地抑制BMMs破骨分化过程,在1μmol/L荜茇酰胺干预下几乎无成熟破骨细胞生成。与此同时,荜茇酰胺可显著抑制破骨细胞的骨吸收功能。在机制上,荜茇酰胺可通过抑制NF-κB受体活化因子配体（RANKL）刺激BMMs破骨分化过程中核心转录因子NFATc1的表达,从而下调下游耐酒石酸酸性磷酸酶（ACP5）、破骨细胞相关受体（OSCAR）、组织蛋白酶K（CTSK）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）等破骨特征基因的转录,抑制破骨分化过程。结论荜茇酰胺可通过下调RANKL刺激BMMs破骨分化过程中NFATc1的表达,抑制BMMs破骨分化过程及破骨细胞的骨吸收能力。     

双氯芬酸钠对大鼠骨髓间充质干细胞影响的浓度、时间效应

目的通过不同浓度的双氯芬酸钠干预体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),观察其对大鼠骨髓间充质干细胞增殖、凋亡及成骨分化能力的影响;不同药物干预时间对细胞成骨分化能力的影响。方法不同浓度的双氯芬酸钠(6.4、3.2、1.6、0.8、0.4mg/L)干预第4代(P4)BMSCs,通过MTS法检测细胞增殖活性;AnnexinⅤ-FITC法检测细胞凋亡;根据茜素红染色钙结节的数量,初步检测细胞成骨能力。并选取1.6mg/L的药物浓度,不同时间点和时长进行干预,检测细胞成骨分化能力的变化。结果随着双氯芬酸钠浓度的升高,BMSCs细胞增殖活性逐渐降低,细胞凋亡比率升高,钙结节数量减少。药物在第1~14天期间干预能够减少钙结节的形成,在第14~21天期间干预对钙结节的形成无明显影响。结论双氯芬酸钠可影响BMSCs的增殖、凋亡及成骨分化能力,且呈浓度和时间依赖性,短期的作用效果是部分可逆的。     

糖皮质激素受体在3种人成骨肉瘤细胞株MG63、U2-OS及HOS中表达及差异

目的 研究糖皮质激素受体（glucocorticoid receptors,GR）在人成骨肉瘤细胞株MG63、U2-OS及HOS的表达及差异.方法 人成骨肉瘤细胞株MG63、U2-OS及HOS购买于ATCC,常规方法培养细胞.待细胞株生长良好时,检测3种细胞株的细胞骨架、黏附力等细胞特性,通过realtime RT-PCR和Western blot法检测GR表达情况.结果 3种人成骨肉瘤细胞株有不同细胞特性,GR在3种人成骨肉瘤细胞株中表达存在差异.结论 GR在不同功能的人成骨肉瘤细胞株中表达不同.     

骨密度预测脊柱和髋部脆性骨折先后性的研究

目的 通过观察分析髋部(股骨颈)和脊柱(胸腰椎)脆性骨折患者的骨密度值,探讨骨密度预测髋部和脊柱脆性骨折风险.方法 采用回顾性研究方法 ,收集2017年1月至2018年12月浙江省台州医院符合纳入标准的股骨颈与胸腰椎脆性骨折患者的临床资料98例,按骨折史分为股骨颈组53例和胸腰椎组45例,比较两组致伤因素、骨密度及跌倒...     

胸锁钩钢板治疗锁骨近端骨折

正2012年2月～2018年8月,我科采用胸锁钩钢板治疗17例锁骨近端骨折患者,疗效满意,报道如下。1材料与方法1. 1病例资料本组17例,男12例,女5例,年龄26～83岁。左侧10例,右侧7例。均为闭合骨折。骨折Edinburgh分型:ⅠB1型10例,ⅠB2型7例。伤后至手术时间为2～4 d。1. 2手术方法气管插管全身麻醉。     

甲床修补结合甲板原位缝合治疗儿童甲床损伤

目的回顾性分析儿童甲下血肿合并甲床裂伤的相关致伤因素以及行甲床修补结合甲板原位缝合术治疗儿童甲下血肿的的预后。方法对2010年2月一2012年3月期间在笔者医院急诊手术室接受甲床修补＋甲板原位缝合术的43个儿童病例进行回顾性分析。其中男性患儿28例,女性患儿15例,年龄1-13岁,平均年龄5．7岁。优势侧手致伤率约为48％（17／35）,有8名（19％）患者由于年幼无法明确优势手。右手受伤25例（58％）,左手18例（42％）。中指致伤率51％（22例）,小指27．8％（12例）,环指11．6％（5例）,示指6．9％（3例）,拇指2．7％（1例）。43名患者均由钝性伤所致,其中房门夹伤21例（48．8％）,车门夹伤13例（30．2％）,石块压伤9例（21％）。甲下血肿面积占25％-50％28例（65．1％）,50％-75％8例（18．6％）,〉75％7例（16．3％）。58％的甲床裂伤位于手指远节近端1／3,余位于手指远节远端2／3,其中单纯纵、横裂伤28例（65．1％）,放射状裂伤15例（34．9％）,16指合并远节指骨粉碎性骨折,但无一例出现骨折移位或骨折波及关节面。结果所有患者在术后均得到了随访,平均随访时间为7．3个月。术后随访过程中有5例发生并发症,2例患指新生指甲出现横向凹陷,3指出现新生甲体粗糙、肥厚,但手指功能未受影响。余患者或家长均对手指外形及功能满意。结论采用甲床修补结合甲板原位缝合治疗儿童甲下血肿合并甲床裂伤,方法简单、安全,疗效确切,手指外形和功能恢复满意。     

S100A4和S100A6在成骨细胞和破骨细胞分化中表达及意义

目的 探索S100A4和S100A6 mRNA在成骨细胞和破骨细胞分化中表达及意义。方法 将MC3T3-E1细胞分成成骨诱导组和对照组,在有或无成骨诱导液的培养基中培养3、7、14和21天时,分别检测各时间段的茜素红染色和碱性磷酸酶染色情况,使用TRIZOL法提取细胞总RNA,通过real time RT-PCR的方法检测S100A4、S100A6、碱性磷酸酶(ALP)、骨保护素(OPG)及核因子-κβ受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达情况。RAW264.7细胞分成破骨细胞诱导组和对照组,在有破骨细胞诱导液的培养基中培养1、3和5天时,收集各时间段细胞,通过real time RT-PCR的方法检测S100A4、S100A6及酒石酸抗酸性磷酸酶(TRAP) mRNA等表达情况。结果 与未加诱导液组作为对照,MC3T3-E1细胞诱导3、7和14天时,S100A4 mRNA表达逐渐减弱,而诱导21天时S100A4 mRNA表达比14天时要增加;S100A6 mRNA表达在诱导7天和14天时较低,在3天和21天时表达逐渐较高,两者在各时间段比较差异有统计学意义(P<0.05)。与未加诱导液对照,随着RAW264.7细胞逐渐分化,TRAP mRNA表达逐渐增加,S100A4 mRNA表达逐渐增加,S100A6 mRNA表达逐渐下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论S100A4 mRNA参与调控成骨细胞分化过程,而 S100A6 mRNA可能参与调控成骨细胞分化过程某个阶段。S100A4和S100A6 mRNA参与骨吸收过程。     

嘌吗啡胺靶向激活Hedgehog信号 通路调控骨髓来源间充质干细胞 成骨-成脂分化平衡的机制研究

目的 探讨小分子药物嘌吗啡胺（PM）靶向激活 Hedgehog（Hh）信号通路后对骨髓来源间充质干细胞（BMSCs）成骨-成脂分化平衡的影响及其机制。 方法 通过细胞计数试剂盒-8 法评估 PM 对 BMSCs 增殖的细胞毒性,并通过检测 不同浓度 PM 处理下 BMSCs 细胞内 Gli1 转录水平,选择合适的 PM 处理浓度。随后通过诱导 BMSCs 成骨、成脂分化,检测 ALP 表达（ALP 染色）、钙结节（Von Kossa 矿化结节染色法）评估 PM 对 BMSCs 成骨诱导的影响,采用油红 O 染色检测 PM 对 BMSCs 成脂诱导的影响。最后通过 qRT-PCR 法验证 PM 干预下 BMSCs 成骨-成脂分化过程中相关核心转录因子、特征基因的变 化。 结果 10 μmol/L 及以下浓度的 PM 对 BMSCs 增殖无明显毒性反应,并且 2 μmol/L PM 即可显著激活 BMSCs 细胞内 Hh 信 号通路（P＜0.01）。在 2 μmol/L PM 干预下,BMSCs 成骨分化诱导时 ALP 表达、钙结节形成较对照组显著增强,而成脂分化诱 导时脂滴的形成受到了明显的抑制。在此基础之上,qRT-PCR 结果提示 2 μmol/L PM 可明显促进 BMSCs 成骨分化过程中核 心转录因子 Sp7 以及特征性基因 ALP、整合素结合唾液酸蛋白（Ibsp）的转录,并抑制成脂分化过程中核心转录因子过氧化物酶 体增殖物激活受体 γ（Pparg）、CCAAT 增强子结合蛋白 α（Cebpa）以及特征基因围脂滴蛋白 1（Plin1）、脂联素（Adipoq）、脂肪 酸转位酶（Cd36）的转录。 结论 PM 可通过激活 Hh 信号通路,调控成骨-成脂分化相关核心转录因子,促进 BMSCs 成骨分化 并抑制其成脂分化。     

塞来昔布对大鼠骨髓间充质干细胞增殖、成骨分化的影响

目的 观察不同浓度的塞来昔布对rBMSCs的增殖、成骨诱导分化的影响,探讨塞来昔布影响rBMSCs成骨诱导分化的可能机制。方法 采用全骨髓贴壁法获得rBMSCs;使用不同浓度的塞来昔布（0、12.5、25、50、100μmol/L）干预培养rBMSCs,检测不同浓度的塞来昔布对rBMSCs增殖的影响;采用较高浓度的塞来昔布（100μmol/l）诱导rBMSCs 成骨分化,进行ALP、茜素红染色,应用real-time PCR扩增ALP、OCN。结果 细胞增殖抑制实验表明100μmol/L塞来昔布对rBMSCs增殖抑制明显（P<0.05）;12.5、25以及50μmol/L塞来昔布对rBMSCs增殖抑制无影响。ALP染色结果表明,成骨诱导3天对照组以及实验组ALP染色均为阴性;诱导7天对照组ALP染色为阳性,而实验组染色为阴性;诱导14天对照组ALP染色为阳性,实验组染色阴性。茜素红染色结果表明,成骨诱导3天、7天对照组以及实验组染色均为阴性;诱导至14天对照组染色阳性,实验组染色呈阴性。荧光定量PCR结果表明,成骨诱导3天对照组以及实验组ALP mRNA、OCN mRNA表达均较低;成骨诱导7天对照组ALP mRNA表达明显升高,实验组ALP mRNA表达升高趋势较弱,对照组OCN mRNA表达与第3天相比基本无差异,实验组OCN mRNA表达下降明显;诱导14天对照组ALP mRNA表达出现明显下降,实验组ALP mRNA 表达与第7天相比无明显差异,对照组OCN mRNA表达进一步升高,实验组OCN mRNA表达与第7天相比基本无变化。结论 本实验发现,高浓度的塞来昔布（100μmol/L）对rBMSCs增殖具有显著抑制效应。高浓度的塞来昔布（100μmol/L）能够抑制rBMSCs成骨诱导分化过程。高浓度的塞来昔布（100μmol/L）能够抑制rBMSCs成骨诱导分化过程中ALP以及OCN mRNA表达,表明较高浓度塞来昔布抑制rBMSCs成骨诱导分化的效应可能通过抑制ALP以及OCN的基因表达实现,提示在应用NSAIDs时应注意剂量等问题,尤其是应避免使用高剂量甚至是超高生理剂量进行药物镇痛治疗。