重组鼠IL-28的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

目的: 获取重组鼠IL-28(mIL-28)纯化蛋白,制备多克隆抗体.方法: 用PCR技术扩增鼠IL-28成熟蛋白的编码序列,克隆入原核表达载体pET-30,构建融合表达载体pET-30a-mIL-28,转化大肠埃希菌BL21(DE3),以IPTG诱导表达IL-28融合蛋白,经镍柱亲和层析纯化,然后免疫6～8周龄鸡,制备多克隆抗体,采用ELISA 检测抗体效价.结果: 成功构建了表达载体pET-30a-mIL-28,DNA序列测定结果与预期结果一致.在37℃培养条件下,IPTG诱导表达的IL-28融合蛋白进行SDS-PAGE电泳分析,发现其与融合蛋白的理论计算值一致,免疫鸡后收获抗血清, ELISA 显示抗体效价具有高度特异性.结论: 获得了重组鼠IL-28纯化蛋白,制备了鼠IL-28多克隆抗体,为进一步深入研究IL-28的生物活性及其应用打下基础.     

鼠IL-28重组腺病毒体外抗肺癌活性研究

目的 将已成功构建的mIL-28A重组腺病毒载体转染至肺腺癌细胞LA795,并对其抗肺癌细胞生物学活性进行研究.方法 将Ad-pshuttle-cmv-mIL-28A转染至LA795细胞,用PCR、免疫细胞荧光、Tunel、Annexin V及MTT法等进行检测.结果 LA795细胞转染Af-mIL-28A后,MiL-28A的mRNA基因表达明显增加,且细胞内明显表达IL-28蛋白,LA795细胞凋亡增多,细胞生长明显抑制.结论 成功构建的mIL-28A重组腺病毒载体转染至肺腺癌细胞LA795后表达IL-28,且可能通过促进细胞凋亡而抑制其一定程度的生长.

Abstract：

Objective To transfect the recombinant mIL-28A adenovirus vector into lung adenocarcinoma cell line LA795 and research its anticancer activity. Methods Transfected the constructed mouse IL-28(mIL-28) recombinant adenovirus vector into LA795 cell line, detected with PCR, immunocytal fluorescence, Tunel, Annexin V and MTT. Results Transfected with rAd-mlL-28A into the LA795 cells, mIL-28A gene expression products mRNA increased obviously, IL-28 expression was detected in cells obviously,apoptosis cell number increased, and the growth of LA795 cells transfected with rAd-mIL-28A were inhibited obviously. Conclusion The recombinant miL-28A adenovirus vector we have constructed, which expresses IL-28 when transfected to lung adenocarcinoma cell line LA795, inhibits growth of carcinoma cell to some extent, and may work by promoting the apoptosis of cancer cells.     

鼠IFN-λ2 CHO细胞系建立及生物学活性的研究

目的 稳定表达鼠IFN-λ2并对其生物学活性进行研究.方法 用水疱口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)刺激小鼠脾脏细胞,克隆mIFN-λ2全长基因,构建真核表达载体PCAGG-EGFP-mIFN-λ2,并在CHO细胞稳定表达,且在小鼠黑色素瘤B16细胞上进行抗病毒活性测定;构建MDBK-Mxp-Luc细胞系诱导Mx1抗病毒蛋白产生.结果 pMD18-T-mIFN-λ2双酶切鉴定,出现582 bp大小的条带,成功构建了PCAGG-EGFP-mIFN-λ2真核表达载体;稳定表达mIFN-λ2 CHO的细胞株分泌的上清中mIFN-λ2蛋白在B16细胞上的抗病毒活性为10~4 AU/ml;mIFN-λ2蛋白诱导鼠Mx1抗病毒蛋白的表达,9～12 h达高峰,24 h后消失(P<0.05).结论 建立了稳定表达mIFN-λ2的CHO细胞株,其分泌型mIFN-λ2蛋白具有明显的抗病毒活性,且与诱导Mx1抗病毒蛋白密切相关.     

体外膜肺氧合治疗呼吸循环衰竭的输血情况及预后影响因素分析

目的分析体外膜肺氧合(ECMO)治疗呼吸循环衰竭的输血情况及预后影响因素。方法回顾性分析黄石市中心医院2016年3月至2021年7月治疗的呼吸循环衰竭患者80例的临床资料, 根据28 d的预后情况分为死亡组(n=44)和存活组(n=36), 比较两组患者的一般资料、ECMO治疗期间的输血情况、生命体征、实验室指标、通气时间、住院时间, 分析ECMO治疗呼吸循环衰竭死亡的影响因素。结果死亡组与存活组患者性别、年龄、体质量、并发症发生情况、呼吸循环衰竭病因、ECMO治疗方式等差异均无统计学意义(均P > 0.05);存活组术前急性生理学和慢性健康状况Ⅱ(APACHEⅡ)评分、肌酐(Cr)、降钙素原(PCT)、乳酸(Lac)分别为(22.36±3.71)分、(79.17±9.29)μmol/L、(2.77±0.79)ng/L、(2.74±0.36)mmol/L, 均低于死亡组的(34.27±4.98)分、(94.16±10.23)μmol/L、(3.69±1.10)ng/L、(5.18±0.42)mmol/L, 差异均有统计学意义(t=-11.89、-6.79、-5.62、-27.53...     

呼吸衰竭患者体外膜肺氧合治疗后心率、氧合指数改变及APACHEⅡ与SOFA评分对预后的预测价值

目的:探究呼吸衰竭患者体外膜肺氧合（ECMO）治疗后心率、氧合指数（PaO 2/FiO 2）改变及急性生理学及慢性健康状况评分系统（APACHEⅡ）与序贯器官衰竭评估（SOFA）评分对预后的预测价值。 方法:选取2016年2月至2021年2月在黄石市中心医院接受ECMO治疗的84例呼吸...     

体外膜肺氧合在危重症患者中的临床应用

目的分析体外膜肺氧合在危重症患者中的临床疗效及其预后危险因素。 方法选择2018年1月至2020年12月我院应用ECMO进行支持治疗的危重症患者35例。收集临床资料，记录ECMO相关并发症发生情况及转归。 结果35例危重症患者均成功上机，其中17例成功下机且存活出院，ECMO支持成功率为48.6%，平均支持时间为(158.4±67.3)h。ECMO支持治疗过程中，患者发生出血(40.0%)、缺血(14.3%)、感染(25.7%)、血栓(22.9%)、肾功能不全(31.4%)等。气管插管，置入ECMO，ECMO运作时间，ECMO支持治疗前的APACHEⅡ评分、MAP、Hb、Scr及乳酸水平为ECMO治疗后的影响因素(P<0.05)；性别，年龄，病因，ECMO支持治疗前的体温、HR、PaO₂、PaCO₂、WBC及PLT与患者ECMO治疗后的转归无相关性。 结论气管插管，置入ECMO时间，ECMO支持治疗前的APACHEⅡ评分、MAP及乳酸水平是ECMO转归的危险因素，临床可参考评估患者转归，严格把握上机适应症及时机，提高ECMO救治成功率。     

鼠IFN-λ2腺病毒载体的构建及鉴定

目的:构建鼠IFN-λ2重组腺病毒载体。方法:用人水疱口炎病毒诱导小鼠原代脾细胞表达IFN-λ2,通过RT-PCR获取IFN-λ2 cDNA,将其亚克隆至pShuttle-CMV载体,经PmeⅠ线性化后,与腺病毒的骨架载体pAdEasy在BJ5183菌中同源重组,转染293A细胞包装扩增,RT-PCR检测重组腺病毒的目的基因,TCID50法对构建的腺病毒进行滴度测定。用鼠IFN-λ2重组腺病毒感染小鼠肺腺癌细胞,蛋白质印迹法检测细胞中IFN-λ2蛋白的表达,倒置显微镜观察鼠IFN-λ2重组腺病毒对鼠肺腺癌细胞生长的抑制作用。结果:成功克隆鼠IFN-λ2的cDNA,序列与基因库公布序列完全一致;经酶切鉴定表明成功构建鼠IFN-λ2重组腺病毒载体;重组腺病毒载体在293A细胞中成功包装及扩增;包装成功的重组腺病毒中含有目的基因,病毒滴度为2×1010pfu/ml;蛋白质印迹显示感染细胞的上清中有鼠IFN-λ2蛋白的表达,倒置显微镜显示感染的鼠肺腺癌细胞生长受到抑制。结论:成功构建了鼠IFN-λ2重组腺病毒载体,并能介导鼠IFN-λ2蛋白的表达进而抑制鼠肺腺癌细胞的生长,为进一步开展抗肿瘤研究及基因治疗奠定基础。