γ-H2AX分析用于检测电离辐射致HepG2细胞DNA双链断裂的研究

目的 应用γ-H2AX分析检测电离辐射导致肝癌细胞株HepG2基因组DNA双链断裂的情况，并检测在不同细胞周期时相中的表达差异，从而了解不同时相HepG2细胞株的辐射敏感性。方法利用胸腺嘧啶核苷（TdR）阻断HepG2细胞于G1期末，于不同时间点分别得到同步化的S期和G2/M期细胞，用60Coγ射线照射细胞，建立DNA双链断裂模型，采用免疫荧光法和Westemblotting检测γ-H2AX的表达。结果TdR阻断后继续培养至34和40h，分别得到了较高同步化程度的S期和G2／M期HepG2细胞；受照后的HepG2细胞中Y-H2AX表达较照射前显著增高，处于S期的细胞γ-H2AX表达增加更为突出。结论不同周期时相的HepG2细胞受照后均检测出不同程度的DNA双链断裂，其中S期细胞尤为敏感。γ-H2AX对DNA双链断裂快速敏感的反应使γ-H2AX分析在检测早期DNA双链损伤中具有广泛的廊用前景。     

老年人便秘的辨证施护

便秘是老年人最常见的消化道运动功能紊乱性病症 ,且多数病程长 ,患者常随意应用导泻药或灌肠方法来排便 ,致使肠道应激力减弱 ,加重便秘。我们对便秘患者实行辨证分型施护 ,取得良好的效果 ,现将体会报告如下。1　临床资料便秘患者 78例 ,男 42例 ,女 36例 ,年龄 60～84岁。符合以下条件 :①胃肠道均无器质性改变 ;② 3日内无自发排便 ;③病程均 1年以上 ;④随访观察 3个月以上。其中辨证施护组 39例 ,常规护理组 39例。2　辨证分型护理2 1　热秘2 1 1　证候　素体阳亢或胃热、肝胆郁热者 ,嗜酒、喜食辛辣食物或热病之后。表现大便干结 …     

结核抗体IgG在小儿肺结核诊断中的价值

目的：通过检测小儿肺结核人群结核抗体IgG，探讨结核抗体在小儿肺结核诊断中的应用价值。方法：采用ELISA法对50例患者进行检测分析。结果：阳性47例，阳性率88．7％。结论：结核抗体IgG对肺结核诊断有一定价值。     

AFP启动子调控PNP载体的构建及分析

目的分别构建三种启动子调控的大肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)基因表达载体,检测、分析三者的表达差异.方法构建三种启动子调控的PNP基因表达载体.将三个PNP基因载体转染不同细胞株,检测PNP基因在各细胞株中表达,分析三者表达的特点.结果AF 0.3和[HRE]AF调控的PNP基因在AFP阳性肝癌细胞中实现了靶向性表达,而且后者在AFP阴性肝癌细胞中也实现了靶向性表达.结论三种PNP基因表达载体的成功构建为利用PNP/MeP-dR系统进行肝癌的靶向性基因治疗打下坚实的基础.     

Screening of Efficient siRNA Target Sites Directed against Gatekeeper Genes for DNA Repair

DNA double-strand breaks (DSBs) are common le-sions that occur in cells. They are caused by exogenous sources such as ionizing radiation, and by endogenous sources such as radicals generated during metabolic processes[1]. In mammalian cells, DSBs are repaired ei-ther by the homologous recombination (HR) pathways or by the non-homologous end joining (NHEJ)[2] pathways to maintain the fidelity of human genome. The basic mechanism and factor requirements of the two pathways are different. V…     

外源性核酸对肝纤维化大鼠血浆中去甲肾上腺素和多巴胺的影响

目的 探讨外源性核酸对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化模型血浆中去甲肾上腺素(NE)和多巴胺(DA)的影响及其抗肝纤维化的可能机制.方法 将30只Wistar大鼠随机分为正常组、肝纤维化模型组、外源性核酸处理组.苏木精-伊红染色,光镜下观察肝组织病理学改变,Van Gieson(VG)染色分析肝纤维化程度,同时用高压液相色谱-电化学(HPLC-ECD)法检测大鼠血浆中NE和DA水平.结果 核酸组大鼠肝组织病理学改变较模型组有明显改善.模型组大鼠血浆DA含量[(0.39±0.19) ng/ml]显著低于正常组[(0.92±0.53) ng/ml](P<0.05),核酸组大鼠血浆DA的含量[(0.87±0.55) ng/ml]高于模型组(P<0.05).大鼠血浆NE含量模型组[(1.13±0.77) ng/ml]和核酸组[(1.38±0.71) ng/ml]低于正常组[(4.38±2.77) ng/ml] (P<0.05),核酸组与模型组NE的含量无明显差异(P>0.05).结论 外源性核酸对慢性肝损伤有一定的保护作用,可显著改善CCl4诱导的大鼠肝纤维化损伤.其可能的作用机制之一是通过调节肝纤维化大鼠血浆中NE的前体物质DA的含量,增加了交感神经的活性而起到抗纤维化的作用.     

miR-192负性调控人肝癌细胞株HepG2中RB1基因的表达

目的 探讨miR-192对人肝癌细胞株HepG2中RB1基因表达的调节作用.方法 运用生物信息学方法对miR-192进行靶基因预测并分析其潜在靶基因RB1;将含有miR-192结合位点的RB1 mRNA 3′端非编码区(3′UTR)片段和在miR-192结合位点进行突变的RB1 3′UTR突变片段克隆至报告基因载体pMIR-Report luciferase vector,重组质粒分别命名为pMIR-RB1和pMIR-RB1-mut;将重组质粒、Beta-gal内参质粒和microRNA共转染HepG2细胞,双荧光素酶报告基因系统检测各实验组中细胞荧光素酶的表达;SYBR Green荧光定量PCR和Western blot分别在mRNA和蛋白水平检测miR-192对内源性RB1表达的调节作用.结果 生物信息学分析筛选出89个miR-192的潜在靶基因,RB1基因是其中之一;测序验证重组质粒pMIR-RB1和pMIR-RB1-mut构建成功;过表达miR-192时,共转染pMIR-RB1质粒的细胞相对荧光素酶活性(4.80±0.36)较相应过表达miR-NC组(7.90±0.91)明显降低(P＜0.05),而共转染pMIR-Luc或pMIR-RB1-mut质粒的细胞相对荧光素酶活性[pMIR-Luc:(7.68±1.04);pMIR-RB1-mut:(7.56±0.99)]较相应过表达miR-NC组[pMIR-Luc:(7.86±0.73);pMIR-RB1-mut:(7.82±1.05)]无显著差异;上调miR-192水平显著降低HepG2细胞中内源性RB1 mRNA[(0.56±0.10)vs (1.05±0.13)]和蛋白(47% vs 100%)的表达.结论 RB1基因是miR-192的一个靶基因,在HepG2细胞中,miR-192通过直接结合RB1 mRNA 3′UTR而负性调控RB1基因表达.     

肝硬化高同型半胱氨酸血症与MTHFR基因C667T多态性的关系

目的研究肝硬化血浆同型半胱氨酸(HCY)水平及其与N5,N10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性的关系.方法采用柱前衍生化-HPLC方法检测112例健康对照者、87例肝硬化患者血浆同型半胱氨酸的水平,用多聚酶链反应-限制性内切酶片断长度多态性技术(PCR-RFLP)检测其MTHFR基因C667T多态性.结果健康对照组平均血浆HCY浓度为(8.34±3.59)μmol/L,肝硬化组平均血浆HCY浓度为(21.71±4.85)μmol/L.与健康对照组相比,肝硬化组血浆HCY水平显著升高,差异有统计学意义(P＜0.01).PCR-RFLP检测结果发现MTHFR基因型有3种,即纯合子突变TT(+/+)型,杂合子突变TC(+/)型,正常CC(-/-)型.肝硬化组中+/+型、+/型和/-型频率分别为29.9%、52.9%、17.2%;健康对照组分别为19.6%、33.9%、46.4%,两组差异有统计学意义.肝硬化组MTHFR基因突变无论是纯合子还是杂合子突变基因型,其血浆HCY水平均明显高于正常基因型.结论高同型半胱氨酸血症可能是肝硬化的一个危险因素,血浆HCY水平可作为肝硬化的一个辅助诊断指标,MTHFR基因C667T多态性可能是肝硬化高同型半胱氨酸血症的易感基因之一.     

RNA干扰在肝癌中的应用

近年来，RNA干扰(RNAi)技术已成为癌症基因治疗中令人关注的研究热点，以其高效，特异、应用广泛的特点，展示了诱人的临床应用前景。