抗Ig融合蛋白Fc段单克隆抗体的制备、鉴定与应用研究

目的：制备并鉴定抗Ig融合蛋白Fc段的单克隆抗体(mAb)，建立用于检测Ig融合蛋白的夹心ELISA法和纯化Fc融合蛋白的亲和层析法。方法：以hBCMA—Ig融合蛋白为抗原免疫BALB／c小鼠，通过细胞融合制备抗Fc段mAb，用ELISA等方法鉴定mAb的Ig亚类、表位以及种属特异性，建立用于检测Ig融合蛋白的夹心ELISA法;Western blot检测mAb对变性Ig融合蛋白的反应性。将mAb与Sepharose4B交联，制备亲和层析柱，对LAIR1-Ig融合蛋白进行纯化。结果：获得7株稳定分泌抗Fc段mAb的杂交瘤(FMUFcl-FMUFc7)。利用FMUFc4作为包被mAb，FMUFc5作为酶标记mAb，成功地建立了检测Ig融合蛋白的ELISA法，敏感度达到2μg／L；在7株mAb中，FMUFc6可用于Ig融合蛋白的western blot检测。用FMUFc 6mAb制备的亲和层析柱，可有效地纯化LAIRl—Ig融合蛋白。结论：成功地制备了抗Ig融合蛋白Fc段的mAb，建立了可用于Ig融合蛋白检测和纯化的方法，为Ig融合蛋白的应用提供了有力手段。     

复发性口腔溃疡患者外周血调节性T细胞和白细胞介素2水平的表达

目的研究复发性口腔溃疡(RAU)患者溃疡期外周血调节性T细胞和白细胞介素2(IL-2)的水平变化。方法收集RAU患者溃疡期和健康人外周血,采用流式细胞术分析其CD4+ CD25+ Foxp3+ T细胞比例的变化,ELISA检测IL-2的水平。结果 RAU患者外周血中调节性T细胞[(3.29±0.86)%vs.(5.67±0.99)%]和IL-2的水平[(31.12±4.71)pg/mlvs.(36.11±4.99)pg/ml]低于正常对照组(P<0.05)。结论调节性T细胞和IL-2在RAU患者外周血中表达下降,提示在RAU免疫发病机制中两者起到了重要作用。     

口腔扁平苔藓患者外周血IL-10和调节性T细胞上LAIR-1的表达

目的：研究LAIR-1和IL-10在口腔扁平苔藓（OLP）患者外周血中的表达情况,为OLP致病机制提供理论依据。方法采用流式细胞术检测LAIR-1在口腔扁平苔藓（n＝22）和健康人（n＝22）外周血Treg上的表达水平,ELISA检测外周血中IL-10水平的变化。结果口腔扁平苔藓外周血CD4＋Foxp3＋Treg上LAIR-1阳性率高于健康人,血浆中IL-10的水平亦高于健康人（P＜0.05）。结论 LAIR-1和IL-10在口腔扁平苔藓（OLP）患者外周血中表达上调,提示两者可能在OLP的免疫发病机制中起了重要作用。     

体素内不相关运动弥散加权成像参数与Luminal型乳腺癌Ki-67增殖指数相关性的探讨

目的 探讨体素内不相关运动弥散加权成像参数值(f值、D值和D*值)与Luminal型乳腺癌Ki-67增殖指数的相关性.方法 收集经病理及免疫组化证实的Luminal型乳腺癌患者51例(Luminal A型24例,Luminal B型27例).所有患者均在术前进行IVIM-DWI扫描,经MITK-Diffusion专用后处理软件获得IVIM-DWI各参数值.比较Luminal A型、Luminal B型各参数值是否具有统计学差异.采用pearson相关分析判断各参数值与Ki-67增殖指数间是否存在相关性.结果 Luminal A型组D值明显高于Luminal B组(P<0.05),且Ki-67增殖指数与D值间存在弱负相关(r=-0.451).f值和D*值在两组间无统计学差异(P>0.05),且与表达百分比间无明显相关性(P>0.05).结论 D值和Ki-67增殖指数存在相关性,对Luminal型乳腺癌的预后及治疗具有潜在价值.     

夹心ELISA检测可溶型LAIR-1方法的建立及其应用的研究

为了探讨血清可溶型白细胞相关免疫球蛋白样受体 1 (sLAIR 1 )的水平与疾病的关系 ,用生物传感器鉴定了 3种抗LAIR 1分子胞膜外区mAb识别的表位 ,并应用 2种识别不同LAIR 1表位的mAb首次建立了检测sLAIR 1的夹心ELISA方法 ,其检测灵敏度达到 1 5 μg/L。以此方法检测了活化的人PBMC培养上清以及正常人和肾综合征出血热 (HFRS )患者血清中sLAIR 1的水平。在经PMA、PHA、LPS和抗CD3mAb活化的人PBMC细胞培养上清中检测到sLAIR 1。 2 4例正常人血清sLAIR 1的平均水平为 (6 2± 3 3) μg/L ,6 2例HFRS患者血清sLAIR 1的平均水平为 (4 7 2± 35 9) μg/L。证明体内和体外存在天然sLAIR 1。HFRS患者血清sLAIR 1水平明显升高。为进一步研究LAIR 1分子的免疫调节功能及其在临床免疫中的应用提供了新的手段     

LAIR-1／LAIR-2（CD305／CD306）推定配体分布的研究

目的：研究LAIR-1（CD305）及LAIR-2（CD306）推定配体在多种细胞系上的分布，为鉴定LAIR-1／LAIR-2推定配体提供了实验依据．方法：建立稳定表达LAIR-1-Fc和LAIR-2-Fc融合蛋白的细胞系．以纯化的融合蛋白进行活细胞免疫荧光染色，用流式细胞仪检测LAIR-1及LAIR-2推定配体在多种细胞系膜表面的表达，并比较LAIR-1和LAIR-2推定配体的分布及可能结合的位点．结果：LAIR-1推定配体及LAIR-2推定配体均在人羊膜来源的上皮细胞系WISH上高表达，在人黑色素瘤细胞系C32、人胚肾上皮细胞系293T及人脐静脉内皮细胞系ECV304上有一定程度的表达．LAIR-1-Fc和LAIR-2-Fc融合蛋白与推定配体的结合，可分别被可同时识别LAIR-2和LAIR-1的单克隆抗体（mAb）FMU-LAIR-2．2和FMU-LAIR-2．1阻断．结论：LAIR-1推定配体及LAIR-2推定配体的分布基本一致，主要表达于WISH、C32、293T和ECV304细胞系．LAIR-1和LAIR-2可能拥有共同的配体．     

LAIR-1/LAIR-2(CD305/CD306)推定配体分布的研究

目的：研究LAIR-1（CD305）及LAIR-2（CD306）推定配体在多种细胞系上的分布，为鉴定LAIR-1／LAIR-2推定配体提供了实验依据。方法：建立稳定表达LAIR-1-Fc和LAIR-2-Fc融合蛋白的细胞系。以纯化的融合蛋白进行活细胞免疫荧光染色，用流式细胞仪检测LAIR-1及LAIR-2推定配体在多种细胞系膜表面的表达，并比较LAIR-1和LAIR-2推定配体的分布及可能结合的位点。结果：LAIR-1推定配体及LAIR-2推定配体均在人羊膜来源的上皮细胞系WISH上高表达，在人黑色素瘤细胞系C32、人胚肾上皮细胞系293T及人脐静脉内皮细胞系ECV304上有一定程度的表达。LAIR-1-Fc和LAIR-2-Fc融合蛋白与推定配体的结合，可分别被可同时识别LAIR-2和LAIR-1的单克隆抗体（mAb）FMU-LAIR-2．2和FMU-LAIR-2．1阻断。结论：LAIR-1推定配体及LAIR-2推定配体的分布基本一致，主要表达于WISH、C32、293T和ECV304细胞系。LAIR-1和LAIR-2可能拥有共同的配体。     

人LAIR-1/CD305基因启动子的生物信息学分析

目的:研究人LAIR-1/CD305启动子及其5′上游调控序列。方法:通过检索NCBI中的人类基因组数据库,获得LAIR-1的转录本序列及翻译起始位点上游2500bp的序列。利用Promoter2.0等软件预测LAIR-1的启动子序列,然后利用MatInspector等软件对启动子序列的转录因子结合位点和启动子功能模块进行预测。结果:LAIR-1基因的核心启动子区位于翻译起始密码子上游的600～200bp区域内。在转录调控区发现了一些重要的转录因子结合位点,并预测到13种启动子功能模块。结论:LAIR-1基因的表达可能受到多种转录因子和5′端上游调控序列的调控。     

IL-15和TGF-β对人PBMC上LAIR-1表达的调节作用

目的:研究细胞因子IL-15和TGF-β对人外周血单个核细胞(PBMC)上LAIR-1表达的调节作用.方法:以IL-15和TGF-β作用于人PBMC,流式细胞术(FCM)检测PBMC上白细胞相关免疫球蛋白样受体1(LAIR-1)的表达.结果:与单独PHA刺激组相比,IL-15刺激72 h后细胞免疫荧光强度明显减弱(P<0.05),阳性细胞百分率也有所下降;TGF-β刺激的PBMC上LAIR-1表达水平也有所降低.结论:IL-15和TGF-β都可以下调PHA活化PBMC上LAIR-1的表达.     

LAIR-2单克隆抗体的制备、鉴定和夹心ELISA方法的建立

为了制备LAIR 2单克隆抗体并建立夹心ELISA方法。应用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗LAIR 2单克隆抗体 (mAb )。采用间接免疫荧光染色和流式细胞术鉴定LAIR 2的细胞分布。辣根过氧化物酶 (HRP )标记LAIR 2mAb ,并建立检测LAIR 2的夹心ELISA方法。用重导向杀伤实验 (RCA )鉴定LAIR分子参与调节杀伤功能的关系。结果成功地制备了 3株特异识别LAIR 2的mAb ,1株mAb (3G4 )能够识别LAIR 1和LAIR 2的共同表位 ,但不能在重导向杀伤实验中抑制CD16诱导的杀伤功能。夹心ELISA方法检测LAIR 2的敏感性为 5ng/ml,为LAIR 2的分布及定量检测提供了方法