Sunrivin靶向小干扰RNA诱导大肠癌细胞凋亡的作用

本研究拟用基因克隆技术构建Survivin靶向的小干扰RNA(SiRNA)重组表达载体,探讨用RNA干扰的方法下调大肠癌细胞中Survivin基因的表达,从而抑制肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡,为大肠癌的基因治疗提供理论依据.     

血吸虫重组卡介苗--Sj26GST疫苗的有关毒性研究

由于BCG免疫效果不够理想 ,以及结核分枝杆菌耐药性的产生 ,促使人们开始研制新的结核病疫苗。利用BCG独特的安全性和免疫佐剂作用和日本血吸虫中相对分子量为 2 6× 10 3 的谷光甘肽S转移酶 (Sj2 6GST)的良好免疫原性 ,已经构建出了一种重组卡介苗———Sj2 6GST(rBG Sj2 6GST)。我们就这种疫苗对小鼠的毒性进行了研究 ,从而为疫苗的安全性提供实验依据。将rBG Sj2 6GST疫苗及BCG、含质作者单位 :华中科技大学同济医学院病原生物学系 (蔡昌学 ,叶嗣颖 ,常燕子 ) ;湖北药检专科学校检验系微生物学及免疫学教研室 (胡佳杰 )通讯…     

survivin靶向SiRNA协同5-FU对结直肠癌细胞的化疗增敏作用

目的 探讨survivin靶向SiRNA重组表达载体对人结直肠癌细胞生长的抑制作用和对5-氟尿嘧啶(5-FU)的化疗增敏作用.方法 构建survivin靶向SiRNA重组表达载体并转染结肠癌细胞,通过RT-PCR和western blot方法检测survivin的表达;采用MTT法和流式细胞仪检测SiRNA对不同浓度5-FU的化疗增敏作用.结果 经酶切鉴定和测序结果证实survivin靶向SiRNA重组表达载体构建成功;其对结直肠癌细胞survivin mRNA和蛋白的表达抑制率分别为36.33%和44.65%,可以协同增强5-FU对结直肠癌细胞生长的抑制作用.结论 survivin靶向SiRNA重组表达载体能有效抑制survivin基因表达,并能协同增强5-FU对结直肠癌细胞的杀伤作用和诱导凋亡作用.     

三氧化二砷对人胃癌细胞增殖的影响

目的探讨三氧化二砷（As2O3）抑制人胃癌细胞株MKN-28生长及诱导其凋亡的生物学效应。方法采用光镜观察、溴化二甲噻唑二苯四氮唑（MTT）还原法、流式细胞仪（FCM）检测法、琼脂糖DNA凝胶电泳法检测As2O3在不同作用时间、不同给药浓度时对MKN-28细胞生长的影响。结果MKN-28细胞经As2O3作用后，细胞增殖受到明显抑制，而且呈浓度-作用时间依赖关系。流式细胞仪检测结果显示DNA直方图上出现典型的亚二倍体凋亡峰，细胞周期分析发现药物作用后MKN-28细胞的生长周期受到明显阻滞。琼脂糖DNA凝胶电泳检测到细胞发生凋亡时由于DNA的规律性降解而形成的梯状条带。结论As2O3既能有效地抑制人胃癌细胞株MKN-28的生长，又能诱导该细胞凋亡，而且呈浓度依赖性和作用时间依赖性。     

DNA修复基因hOGG1多态性与HIV-1易感性的关系研究

目的探讨我国汉族人群中8-羟基鸟嘌呤糖苷酶1（hOGGl）基因Ser326Cys多态性与HIV感染间的关系。方法采用病例-对照的流行病学方法,运用PCR-限制性片段多态（restriction fragment length polymorphism,RFLP）技术,对126例HIV血清学阴性者和154例HIV血清学阳性者hOGG1基因第326位点Ser／Cys多态性进行分析,并比较hOGG1不同基因型与HIV感染间的关系。结果HIV血清学阴性组中3种基因型频率分布与现报道的中国汉族人群结果相近,其Ser／Ser、Ser／Cys和Cys／Cys基因型分布频率分别为20．6％,46．8％和32．5％,HIv血清学阳性组分别为16．2％,51．9％和31．8％,两组间差异无统计学意义（χ^2=1．12,P〉0．05）。HIV血清学阳性组人群中,合并HCV感染者与未合并HCV感染者Ser／Ser、Ser／Cys和Cys／Cys基因型频率分别为：HCV阳性组20．0％、48．9％和31．1％;HCV阴性组14．7％、53．2％和32．1％,两组间差异无统计学意义（χ^2=0．68,P〉0．05）。结论本研究未发现hOGG1基因Ser326Cys多态性与HIV感染及HIV与HCV共感染间的相关性。     

Livin基因和Survivin基因联合靶向siRNA抑制大肠癌细胞增殖的作用

采用1个载体编码2个shRNA技术, 构建Livin基因和Survivin基因联合靶向的siRNA重组表达载体, 研究其对人大肠癌细胞生长协同抑制的增效作用。构建Livin基因和Survivin基因联合靶向的siRNA重组表达载体并转染大肠癌细胞, 通过RT-PCR和Western blotting方法检测Livin基因与Survivin基因的表达, 利用流式细胞仪检测处理后细胞的凋亡效应。经酶切鉴定和测序分析证实Livin基因和Survivin基因联合靶向的siRNA重组表达载体构建成功, 它对大肠癌细胞Livin和Survivin mRNA的抑制率分别为27.90%和32.24%, 对Livin和Survivin蛋白表达的抑制率分别为22.28%和40.86%, 诱导肿瘤细胞凋亡率为 (11.69 ± 1.37) %, 但协同干扰作用比单独干扰Livin基因或Survivin基因弱。Livin基因和Survivin基因联合靶向的siRNA重组表达载体构建成功并能抑制Livin基因和Survivin基因的表达, 但协同抑制作用比单独干扰Livin基因或Survivin基因弱。     

多重聚合酶链反应用于检测、鉴定耐甲氧西林葡萄球菌的研究

目的 建立一种快速的多重聚合酶链反应(PCR)方法，用于检测葡萄球菌对甲氧西林的耐药性，同时对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌的种进行鉴定。方法 对临床分离的武汉地区金黄色葡萄球菌80株。表皮葡萄球菌70株，其余凝固酶阴性葡萄球菌60株，提取其基因组DNA，针对金黄色葡萄球菌独有的femA基因，表皮葡萄球菌的种特异性序列，决定葡萄球菌对甲氧西林耐药性的mecA基因，和细菌共有的16srRNA基因的保守序列设计四对引物。同时加入PCR体系中对相应片段进行扩增。结果 在210株葡萄球菌中，mecA基因检测结果与苯唑西林敏感试验结果的一致率为96．2％。mecA基因阳性但苯唑西林敏感的5个菌株，通过由低到高浓度的苯唑西林筛选培养后。均表现出耐药性。mecA基因阴性但苯唑西林耐药的3个菌株，经过对阿莫西林-克拉维酸敏感性试验后，被证明是β-内酰胺酶的高产株。结论 此多重PCR方法不仅可以对临床分离葡萄球菌菌株的甲氧西林耐药性作出判断。同时还可以对金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌做出种的鉴定，是一种高效、敏感、特异性高的检测技术。     

三氧化二砷抗胃癌作用机制的研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对人胃癌细胞株MKN-28抑制生长及诱导凋亡的生物学效应。方法采用光镜观察、溴化二甲噻唑二苯四氮唑(MTT)还原法、流式细胞仪(FCM)检测法检测As2O3在不同作用时间、不同给药浓度时对MKN-28细胞生长的影响。结果MKN-28细胞经As2O3作用后,细胞增殖受到明显抑制,而且呈浓度-作用时间依赖关系。流式细胞仪检测结果显示DNA直方图上出现典型的亚二倍体凋亡峰,细胞周期分析发现药物作用后MKN-28细胞的生长周期受到明显阻滞。结论As2O3既能有效地抑制人胃癌细胞株MKN-28的生长,又能诱导该细胞凋亡,而且呈浓度依赖性和作用时间依赖性。     

金黄色葡萄球菌肠毒素两种检测法的比较

金黄色葡萄球菌肠毒索(Staphylococcus Entero-toxin,SE)所致疾病日益引起国内外学者的重视,检测SE 并对其分型有助于临床诊断和预防.本文对反向间接血凝法(RPHA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测SE 并对其分型的结果进行比较,现报告如下。     

Livin靶向siRNA对结肠癌细胞的抑制作用

目的 构建Livin靶向siRNA重组表达载体,研究其对人结肠癌细胞生长的抑制作用.方法 构建Livin靶向siRNA重组表达载体并转染结肠癌细胞,通过RT-PCR和Western blot方法检测Livin的表达.结果 经酶切鉴定和测序结果证实Livin靶向siRNA重组表达载体构建成功,它对结肠癌细胞Livin mRNA和蛋白的表达抑制率分别为30.18%和28.88%.结论 Livin靶向siRNA重组表达载体构建成功并能显著抑制Livin基因的表达.