H1N1流感与H7N9禽流感感染BALB/c小鼠发病特点初步研究

目的本实验旨在初步探讨A/Shanghai/4664T(H7N9)和A/Puerto Rico/8/34(H1N1)病毒感染BALB/c小鼠的发病特点,为H7N9致病机制与防治的研究提供数据支持。方法将同等剂量(5×103TCID50)流感病毒滴鼻感染BALB/c小鼠,分析其在感染后体重、肺指数、病毒载量和肺组织病理的变化情况。结果 H1N1PR8感染组和H7N9感染组小鼠在7 d内体重均持续减低,H1N1 PR8组较H7N9组降低更为明显;在感染后3 d H7N9组与PBS组肺指数无显著差异(P0.05),但感染后7d H7N9组与PBS组相比显著增高(P0.05);H1N1PR8组比H7N9组感染后3 d肺指数显著增高(P0.05),但感染后第7天无显著差异(P0.05)。H1N1 PR8组和H7N9组病毒载量在感染后第3天均显著升高,但两组无显著差异;第7天两组病毒载量均有所降低,但H7N9组病毒载量显著高于H1N1 PR8组(P0.05)。H1N1 PR8在感染后3 d主要病理变化为炎症细胞浸润和水肿,而H7N9组主要轻度炎症细胞浸润;在感染后7 dH1N1 PR8组可见大量炎症细胞浸润,出现大面积肺水肿;H7N9组表现为大量炎症细胞浸润。结论 H7N9和H1N1 PR8感染BALB/c小鼠均可发病,但发病特点有所差异,H7N9病毒对鼠的适应性比H1N1 PR8差。     

高等级生物安全实验室隔离系统的建立

目的：建立高等级生物安全实验室隔离体系。方法：根据高等级生物安全实验室承担的高危病原体侦检工作的实际实验流程设计并实现整个隔离系统及其相关的传递链、消毒链。结果：建立并实现了隔离器技术性能指标,利用双门转移切换装置实现了不同类型隔离器之间物品的无泄露传递链,通过负压排风橱,实现了隔离器与其他生物安全功能设备之间物品的中转传递。利用过氧乙酸、过氧化氢熏蒸实现了不同类型隔离器的有效消毒灭菌,较好地保护了隔离器内置设备的性能。建立了适合隔离器内操作的病原体形态学检测技术,免疫荧光显微分析技术,实验动物饲养、免疫、攻毒、毒性检测及解剖分析技术。结论：高等级生物安全实验室的隔离系统充分发挥了隔离器的安全防护、高效检出功能,为受病原体感染的动物实验提供了安全防护硬件支撑。     

使用Glo Germ开展生物安全教育初探

为提高生物技术专业本科学员生物安全基本技能,在教学过程中引入Glo Germ作为可视化教学工具,直观生动地让学员在设定的实验场景中了解模拟"病菌"的传播过程,学习污染控制技术。该举措通过师生的互动,提高了本科生的生物安全意识。     

鼠伤寒沙门菌对巨噬细胞内过氧化物酶体与诱导型一氧化氮合酶结合的诱导作用

目的 探讨鼠伤寒沙门菌感染早期巨噬细胞内过氧化物酶体及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的作用.方法用pTassC-GFP质粒转染鼠巨噬细胞RAW 264.7,以观察标记了绿色荧光蛋白的靶向沙门菌分泌的SpiC蛋白(TassC)在胞内的存在形式.用pDsRed2-Perxi和pTassC-GFP质粒共转染RAW 264.7...     

羊驼抗H5N1血凝素重链可变区-人IgGFc段嵌合抗体的制备和鉴定

本研究旨在制备羊驼抗H5N1禽流感病毒的重链抗体可变区-人Fc段嵌合体抗体制备,对所得嵌合抗体进行制备和功能鉴定,为临床应用奠定基础。用pET-22b表达载体构建抗H5N1禽流感病毒羊驼重链可变区(VHH)-人IgG1Fc嵌合基因,以包涵体形式表达VHH23-hFc嵌合抗体蛋白,采用优化的方法复性后,获得高纯度VHH23-hFc嵌合抗体,用ELISA法鉴定嵌合抗体亲和力、热稳定性和小鼠体内的半衰期。结果显示,透析复性后原核表达的抗H5N1禽流感病毒VHH23-hFc嵌合抗体亲和力为2.24×106 mol/L,具有较好免疫学活性,热稳定性也较好,小鼠体内半衰期达到35h,为下一步开展该抗体的体内外病毒中和试验奠定良好基础。     

开展防生演练 提高危险病原体检出技能

采用商品化益生菌模拟高危病原体组织教员和研究生开展防生演练,为本科生防生演练探索可操作流程。防生演练以生物安全防护、检出盲检样品中的病原体、理顺演练流程为主线,建立预案,持续改进,不断解决数次防生演练过程中出现的技术问题、人事问题,形成出版了演练教材,储备了侦检试剂,积累了演练经验,提高了检出技能,锻炼了应急处置心理素质,造就了一支防生演练生力军,为在本科教学中扩大防生演练规模敦实了基础。     

巨噬细胞感染鼠伤寒沙门菌后NO表达及与胞内菌增殖的关系

目的探讨鼠巨噬细胞RAW264.7在感染鼠伤寒沙门菌野生株（ATCC 10248）后细菌在细胞内的增殖过程。方法分别采用鼠伤寒沙门菌活菌和灭活菌（细菌：细胞比例为20∶1）感染鼠巨噬细胞,于感染1、4、8、12、24 h时采用实时定量RT-PCR检测iNOS mRNA变化;采用免疫荧光染色法计数感染细胞内细菌数量;采用0.1%Triton X-100 PBS裂解活菌,计数感染细胞活菌数量。结果活的鼠伤寒沙门菌感染后,在前12 h细菌细胞内持续增殖;活菌和灭活菌感染均能引起感染的巨噬细胞iNOS mRNA表达增加（P均〈0.05）,尤以灭活菌感染者为著;细菌感染后细胞内NO生成增加（P均〈0.05）。结论鼠伤寒沙门菌感染能有效促进鼠巨噬细胞iNOS表达,细胞内活的鼠伤寒沙门菌可抑制细胞iNOS表达及NO生成。     

H1N1流感与H7N9禽流感感染BALB/c小鼠发病特点初步研究

目的本实验旨在初步探讨A／shanghai／4664T（H7N9）和A／PuertoRico／8／34（H1N1）病毒感染BALB／c小鼠的发病特点,为H7N9致病机制与防治的研究提供数据支持。方法将同等剂量（5×10^3TCID50）流感病毒滴鼻感染BALB／c小鼠,分析其在感染后体重、肺指数、病毒载量和肺组织病理的变化情况。结果H1N1PR8感染组和H7N9感染组小鼠在7d内体重均持续减低,H1N1PR8组较H7N9组降低更为明显;在感染后3dH7N9组与PBS组肺指数无显著差异（P〉0．05）,但感染后7dH7N9组与PBS组相比显著增高（P〈0．05）;H1NlPR8组比H7N9组感染后3d肺指数显著增高（P〈0．05）,但感染后第7天无显著差异（P〉0．05）。H1N1PR8组和H7N9组病毒载量在感染后第3天均显著升高,但两组无显著差异;第7天两组病毒载量均有所降低,但H7N9组病毒载量显著高于H1N1PR8组（P〈0．05）。H1N1PR8在感染后3d主要病理变化为炎症细胞浸润和水肿,而H7N9组主要轻度炎症细胞浸润;在感染后7dH1N1PR8组可见大量炎症细胞浸润,出现大面积肺水肿;H7N9组表现为大量炎症细胞浸润。结论H7N9和H1N1PR8感染BALB／c小鼠均可发病,但发病特点有所差异,H7N9病毒对鼠的适应性比H1N1PR8差。