以形态与组织学为基础筛选诱导胎鼠腭裂的四氯二苯二噁英最适剂量

目的观察在不同四氯二苯二噁英(TCDD)剂量的作用下,胎鼠腭裂形成过程中的形态学、组织学变化,以筛选TCDD诱导腭裂模型的最适剂量。方法C57BL/6J孕鼠于妊娠第10天随机分为对照组和实验Ⅰ～Ⅳ组,每组6只;对照组以玉米油0.1ml灌胃,实验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别以TCDD32、28、24、20μg/kg灌胃。妊娠第17.5天处死孕鼠,称量孕鼠及胚胎体重,记录活胎鼠数、腭裂数、吸收胎及死胎鼠数。另取15只C57BL/6J孕鼠随机分组同前,处理方法同前;各组分别于妊娠第13.5、14.5和15.5天剪取胎鼠头部,解剖显微镜下观察;并行苏木精-伊红染色(HE染色),观察。结果各组孕鼠增加的体重及活胎鼠的体重差异均无显著性。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组较对照组双侧腭突发育瘦小,上抬延迟;Ⅳ组双侧腭突发育及上抬与对照组相比无明显差异。Ⅰ～Ⅳ组胎鼠腭裂发生率分别为97.37%、93.02%、65.12%、56.82%,对照组未见胎鼠腭裂形成。结论 TCDD28μg/kg是建立C57BL/6J胎鼠腭裂模型的最适剂量。     

二噁英诱导胎鼠腭裂组织中TGF-β3表达变化

目的 探讨转化生长因子( TGF-β3)在2,3,7,8-四氯二噁英(TCDD)诱导C 57 BL/6 J胎鼠腭裂发生中的作用.方法 在小鼠怀孕第10 d(GD 10),二噁英组以TCDD 64 μg/kg灌胃,对照组以玉米油16 mL/kg灌胃,于GD 18.5解剖显微镜下观察胎鼠腭裂发生率,并于GD 13.5、14.5、15.5剪取胎鼠腭突组织提取RNA及蛋白,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和western blot分别检测腭突组织中TGF-β 3 mRNA和TGF-β 3蛋白表达情况.结果 二噁英组腭裂发生率为100% (39/39),对照组无腭裂发生(0/42);在GD 13.5、14.5、15.5时,二噁英组TGF-β 3 mRNA相对表达量分别为(0.392±0.056)、(0.467±0.064)、(0.192±0.032),明显高于对照组(0.081±0.020)、(0.178±0.011)、(0.113±0.016)(P＜0.05);二噁英组TGF-β 3蛋白相对表达量分别为(0.046±0.009)、(0.089±0.015)、(0.028±0.003),明显高于对照组(0.017±0.001)、(0.039±0.003)、(0.005±0.001) (P ＜0.05).结论 TCDD可诱导C 57 BL/6 J胎鼠形成腭裂,并明显上调胎鼠腭突组织中TGF-β3表达.     

四氯二苯二噁英致胎鼠腭裂作用机制的初步探讨

目的 探讨四氯二苯二噁英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)致胎鼠先天性腭裂的可能作用机制.方法 12只C57BL/6J孕鼠于妊娠第10天随机分为实验组和对照组,每组6只,实验组以TCDD 64 μg/kg灌胃,对照组以等量玉米油灌胃,于妊娠第18.5天在解剖显微镜下观察胎鼠腭裂的发生率.另取18只C57BL/6J孕鼠,于妊娠第10天随机分为实验组和对照组,每组9只,处理方法同前,根据标本采集时间不同,每组又分为妊娠第13.5、14.5和15.5天3个亚组,每个亚组3只,分别于妊娠第13.5、14.5和15.5天剪取胎鼠腭突组织提取RNA和DNA,采用RTPCR检测Smad 2～4及Smad 7 mRNA的表达情况、甲基化特异性PCR(methylmion specific PCR,MSP)检测转化生长因子-β3(transforming growth factor-β3,TGF-β3)基因启动子甲基化水平.两样本间均数比较采用t检验.结果 TCDD成功诱导建立C57BL/6J胎鼠先天性腭裂模型,实验组腭裂发生率为100％,对照组无腭裂发生.在妊娠第13.5、14.5和15.5天,RT-PCR显示实验组Smad 2mRNA的相对表达值分别为0.263±0.088、0.296±0.016和0.159±0.027,对照组为0.180±0.042、0.282±0.029和0.165±0.018,差异无统计学意义(t=- 1.474、- 0.762、0.321,P＞0.05);实验组Smad 3 mRNA的相对表达值分别为0.453±0.153、0.551±0.160和0.328±0.049,对照组为0.375±0.126、0.510±0.145和0.259±0.035,差异无统计学意义(t=-0.678、- 0.336、-2.005,P＞0.05);实验组Smad 4 mRNA的相对表达值分别为0.675±0.174、0.577±0.070和0.396±0.066,对照组为0.557±0.138、0.587±0.080和0.441±0.054,差异无统计学意义(t=- 0.926、0.161、0.927,P＞0.05);实验组Smad 7 mRNA的相对表达值分别为0.283±0.050、0.320±0.068和0.169±0.045,对照组为0.207±0.043、0.288±0.051和0.155±0.040,差异无统计学意义(t=-2.003、-0.651、-0.391,P＞0.05).MSP显示实验组和对照组TGF-β3基因启动子均处于非甲基化状态.结论 TCDD可致C57BL/6J胎鼠发生先天性腭裂,其机制不是通过经典的TGF-β/Smad信号通路和TGF-β3基因甲基化修饰而发生作用.     

TGF-β3基因与腭裂发生的相关性研究进展

先天性唇腭裂是常见的先天性畸形,其发病率因地域、人种而异,一般为1:500～1 000[1].非综合征型唇腭裂(nonsydromic cleft of lip with or without palate,NSCL/P)是指排除了其他系统畸形和综合征的唇腭裂,其占唇腭裂的70%以上.     

2,3,7,8-四氯二苯二噁英诱导腭裂发生的差异蛋白筛选

目的:以蛋白质组学方法筛选2,3,7,8-四氯二苯二噁英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)致先天性腭裂发生的差异表达蛋白.方法:以TCDD诱导建立胎鼠先天性腭裂模型,行腭部的大体解剖及组织学检查.取实验组和对照组胎鼠的腭组织,分别提取组织总蛋白.通过双向电泳和质谱分析,...