加权重基因共表达网络分析识别慢性肾脏病 足细胞损伤关键节点基因MAGI 2

目的 通过加权基因共表达网络分析（WGCNA）识别慢性肾脏病（CKD）足细胞损伤相关的基 因模块与关键基因。方法 从基因表达综合数据库（GEO）中下载包含足细胞损伤体外模型及CKD 患者肾小 球组份的表达谱GSE66107、GSE93798、GSE30528、GSE32591 4 个数据集。利用R 软件包做数据预处理并选 取错误发现率（FDR）<0.05 及差异倍数≥ 1.5 作为差异表达基因（DEG）;结合数据集GSE993395（133 例 CKD 患者肾小球样本）用WGCNA 进行模块化分析并对模块内基因进行功能注释（GO）,根据GO 结果和 含有文献报道的足细胞标准基因（PSG ）情况确定足细胞损伤相关模块,根据模块内基因连接度（Kwithin） 挑选枢纽（hub ）基因;利用Cytoscape 软件及插件Cluego 构建足细胞损伤相关模块基因的加权共表达网络。 结果 4 个数据集共得到 趋势一致的DEG 7 957 个,其中15 个DEG 在4 个数据集中均有差异（coDEG）。 GSE993395 中包含的4 031 个DEG 被用于WGCNA 分析;最终得到12 个基因模块,其中green 模块包含最多的 coDEG 和PSG,进一步通过Kwithin 发现其中同时作为coDEG 和PSG 的MAGI 2 基因是其hub 基因之一。结论 WGCNA 表达网络分析方法是一个高效的系统生物学方法,应用该方法发现CKD 时关键节点基因MAGI 2 在 足细胞损伤中可能起到重要作用。     

白藜芦醇对嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 探讨白藜芦醇(RSV)对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)引起的足细胞氧化应激损伤的保护作用及可能机制.方法 将小鼠肾脏足细胞系MPC5分为空白对照组(A组)、PAN处理组(B组)和PAN+RSV处理组(C组).采用台盼蓝染色法和流式细胞术分别检测足细胞活力和凋亡情况,共聚焦显微镜下观察细胞骨架排列情况,DCFH-DA染色检测足细胞内活性氧(ROS)含量,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,羟胺法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)含量.结果 与A组相比,B组小鼠足细胞活力、SOD和GSH-Px活性降低(P＜0.05),足细胞凋亡以及ROS、LDH和MDA含量增加(P＜0.05),足细胞骨架出现紊乱、重组和降解,并向边缘聚集;而C组经RSV干预后各项观察指标均得到有效改善(P＜0.05).结论 RSV可以部分逆转PAN诱导的足细胞损伤,其保护作用可能与抑制氧化应激、改善线粒体功能障碍相关.     

微小RNA-130b在嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞损伤中的作用及机制

目的探讨微小RNA-130b(miR-130b)在嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside,PAN)诱导的足细胞损伤中的作用及机制。方法小鼠肾脏足细胞系MPC5予以PAN 25、50、100μg/mL干预,实时定量PCR检测MPC5细胞系内miR-130b及其宿主基因2610318N02Rik(RIK)表达;转染miR-130b抑制剂(miR-130b inhibitor)或对照(NC inhibitor)后予以PAN 100μg/mL刺激,24 h后采用Western blot检测足细胞裂孔膜蛋白Synaptopodin和Nephrin蛋白表达变化;采用鬼笔环肽染色检测足细胞骨架改变;采用流式细胞技术检测细胞凋亡变化;采用Targetscan 7.2预测miR-130b潜在靶基因,Western blot检测miR-130b模拟物(mimic)对于潜在靶基因PGC1α蛋白表达的影响;采用双荧光素酶报告基因系统检测miR-130b mimic对于荧光活性的影响。结果 PAN可以抑制足细胞内的miR-130b及宿主基因RIK表达;与转染NC inhibitor组比较,miR-130b inhibitor提高足细胞裂孔膜蛋白synaptopodin和nephrin表达;鬼笔环肽染色显示抑制miR-130b可以部分缓解PAN诱导的足细胞骨架紊乱及重组;流式细胞技术检测结果示干扰足细胞miR-130b表达可以减少PAN诱导的细胞凋亡;Targetcan 7.2分析显示PGC1α是miR-130b的潜在靶基因,Western blot结果显示,转染miR-130b mimic可以降低足细胞内PGC1α表达;双荧光素酶报告基因系统结果示,与NC mimic及突变的PGC1α3'-UTR共转染组比较,miR-130b mimic与野生型PGC1α3'-UTR共转染组荧光素酶活性降低。结论 miR-130b通过靶向抑制PGC1α表达参与PAN诱导的足细胞损伤。     

PPF方案和PF方案诱导化疗后局部晚期鼻咽癌放疗的近期疗效和毒副反应比较

目的比较PPF方案（平阳霉素8 mg/d,第1、3、5、7天-Fu 500 mg/m^2,第1～5天静脉滴注）和PF方案（顺铂20mg/m^2,第1～5天静脉滴注;5-Fu 500 mg/m^2,第1～5天静脉滴注）治疗初治局部晚期（T4N2～3M0）的鼻咽癌的近期疗效和急性毒副反应.方法67例初治鼻咽癌（T4N2～3M0）随机分成PF组（n=34）和PPF组（n=33）,完成2周期诱导化疗后进行常规外照射放疗.结果PPF组治疗后6个月内鼻咽腔肿物完全消退率为87.79%（29/33）,颈部淋巴结转移灶完全消退率90.00%（27/30）,PF组上述指标分别为64.71%（22/34）和66.67%（20/30）.PPF组疗效明显高于PF组（P＜0.05）.在急性毒副反应方面,2组血红蛋白下降、血小板减少、恶心呕吐、腹泻和口腔炎无明显差异（P＞0.05）,仅有脱发PPF方案组较PF组严重（P＜0.01）.结论初治局部晚期鼻咽癌的诱导化疗中,PPF方案比PF方案近期疗效明显提高,但还需扩大样本进行研究,另还需观察其远期生存率.