胚胎干细胞在心血管疾病治疗的初步研究

胚胎干细胞(ESC)是一种多潜能细胞,可在体外培养时保持未分化状态.并具有分化为特定体细胞的潜能.包括心肌细胞.ESC可提供大量分化的心肌细胞用于使受损的心肌层再生的治疗.目前ESC在心血管疾病治疗方面的研究仍处于基础环节,现将相关问题作一综述.     

结核感染T细胞斑点试验在结核性腹膜炎诊断中的临床研究

目的探讨T-SPOT-TB检测在结核性腹膜炎中的诊断价值。方法对我院28例临床和影像学可疑结核性腹膜炎的患者的腹腔积液实施T—SPOT-TB检测,对照组为30例无结核原发病灶的腹腔积液患者。结果28例可疑结核性腹膜炎患者中,26例T—SPOT．TB检测阳性（92．9％）,对照组4例阳性（13．3％）。T—SPOT-TB检测诊断结核性腹膜炎的敏感性为92．9％,特异性为86．7％,阳性预测值为82．1％,阴性预测值为95．2％。结论T—SPOT．TB检测是一种具有较高敏感性和特异性的检测结核感染的技术,对快速而准确地诊断结核性腹膜炎有较高的价值。     

与心肌细胞共培养的小鼠胚胎干细胞向心肌样细胞分化

目的 探讨心肌细胞促进胚胎干细胞（ESCs）分化为心肌样细胞的诱导作用。方法 收集小鼠3.5d胚龄的囊胚,将其培养在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上,4～5d后取内细胞团接种在饲养层上分离培养出ESCs。取3～5代ESCs,先将ESCs悬浮培养形成2～3d的拟胚体(EBs),再与新生大鼠心肌细胞共培养诱导向心肌细胞分化,相差显微镜下观察分化细胞的形态学变化,免疫细胞荧光技术检测心肌细胞特异性肌钙蛋白T(TnT)、α－肌动蛋白（α-Actin）的表达。结果 诱导第3天起可见自发性、有节律跳动的拟胚体出现,12d时第2组约有93%的拟胚体出现节律性收缩,显著高于其他各组,均表达心肌细胞特异性蛋白cTnT、а-actin,心肌细胞直接接触诱导组其分化比率达56.5%,高于其他各组,并且分化的细胞形态较单一。结论 心肌细胞和心肌细胞裂解液均可诱导ESCs向心肌细胞定向分化,且心肌细胞的诱导作用强于心肌细胞裂解液。     

结核感染T细胞斑点试验在支气管肺泡灌洗液中诊断活动性肺结核的应用价值

目的：研究T SPOT. TB试剂盒在支气管肺泡灌洗液中诊断活动性肺结核的应用价值。方法对临床和影像学怀疑为活动性肺结核的患者32例,对其在气管镜检查下获得的支气管肺泡灌洗液中实施T SPOT. TB检测。结果32例可疑肺结核患者中,23例明确诊断为活动性肺结核,其中22例中的支气管肺泡灌洗液中 T SPOT. TB 检测阳性（95．7%）。其中9例为非结核感染,9例中的支气管肺泡灌洗液T SPOT. TB检测阳性有1人（11．1%）。对支气管肺泡灌洗液进行T SPOT. TB检测以此诊断活动性肺结核的敏感性为95．7%,特异性为88．9%,阳性预测值为85．7%,阴性预测值为97．5%。结论 T SPOT. TB试剂盒在支气管肺泡灌洗液中用来诊断活动性肺结核有较高的应用价值。     

豨莶草的小鼠急性毒性及抗小鼠急性痛风性关节炎作用

目的 研究豨莶草醇提物和水提物的小鼠急性毒性及抗小鼠急性痛风性关节炎作用。方法 Bliss法计算豨莶草醇提物和水提物的LD50;以尿酸钠诱导建立小鼠急性痛风性关节炎模型,观察豨莶草醇提物和水提物的抗关节肿胀作用。结果 以豨莶草生药计,豨莶草醇提物的LD50为267.00 g·kg^-1,豨莶草水提物的LD50为147.91 g·kg^-1;小鼠急性痛风性关节炎模型组、给药24 h后豨莶草醇提物组和豨莶草水提物组的关节肿胀度分别为（0.134 8±0.049 3）,（0.098 0±0.034 0）和（0.117 2±0.024 0）mL。结论 豨莶草醇提物的急性毒性显著低于豨莶草水提物;豨莶草醇提物的抗尿酸钠诱导的小鼠急性痛风性关节肿胀作用优于豨莶草水提物。     

成熟心肌细胞诱导胚胎干细胞定向分化为心肌样细胞

目的： 拟证实成熟心肌细胞对胚胎干细胞（ESCs）定向分化的诱导作用。方法：分离培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,以DAPI（4’6-联眯-2-苯基吲哚）染核作为细胞标记。取昆明小鼠3.5-4 d的囊胚培养后分离出ESCs,以1和（或）2代的小鼠ESCs细胞团与心肌细胞共培养。录像动态观察ESCs向心肌细胞分化的情况;分别于共培养后3、7、14 d对ESCs行肌钙蛋白T（cTnT）免疫荧光染色检测。结果：1代或2代的ESCs和/或细胞团与心肌细胞共培养约7 d左右出现成节律搏动的心肌样细胞;最好实验批次,可计数到1/4以上的ESCs和/或ESCs细胞团出现节律性搏动。心肌细胞共培养体系中添加0.6% DMSO时,节律搏动的心肌样细胞分化率未见提高。心肌细胞诱导组,记录已搏动和未搏动ESCs诱导分化后心肌样细胞cTnT蛋白荧光染色阳性;ESCs与心肌成纤维细胞共培养诱导组,分化的细胞cTnT蛋白荧光染阴性;0.6% DMSO诱导组约3％的细胞cTnT蛋白荧光染色阳性;DMSO联合心肌细胞诱导组,结果与单纯心肌细胞诱导组相似。结论：未经建系操作的ESCs可直接诱导分化为节律搏动的心肌细胞;成熟心肌细胞与ESCs共培养状态下,成熟心肌细胞是ESCs定向分化较强的诱导因素。     

昆明小鼠胚胎干细胞的分离培养方法

背景:目前已经建立了数百个小鼠的胚胎干细胞系,这些细胞系大多数来源于129,C57BL/6J和BALB/C品系的小鼠,而昆明株小鼠的胚胎干细胞建系的成功率很低.目的:探寻昆明小鼠胚胎干细胞分离培养的方法,以期提高昆明小鼠胚胎干细胞建株的成功率.设计、时间及地点:以细胞为对象的观察性实验,于2006-04/2007-06在重庆市神经病学重点实验室完成.材料:昆明白小鼠3.5d和4d胚龄的囊胚.方法:分别将昆明白小鼠3.5d和4d胚龄的囊胚培养在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上,四五天后取隆起生长的内细胞团块分离后再培养,分别采用2.5g/L胰蛋白酶-0.4g/L乙二胺四乙酸与1g/L胰蛋白酶0.2g/L乙二胺四乙酸室温作用2～4min并辅以机械离散胚胎干细胞集落.主要观察指标:观察集落的生长情况,通过碱性磷酸酶染色、OCT-4染色、细胞核型分析等对细胞集落进行鉴定.结果:[1]4d胚龄胚胎的贴壁率、内细胞团出现率及克隆形成率高于3.5d胚龄(P<0.05).[2]采用1g/L胰蛋白酶-0.2g/L乙二胺四乙酸室温作用2～4min并辅以机械作用,分离克隆胚胎干细胞效果较好.[3]胚胎干细胞呈集落性生长,符合小鼠胚胎干细胞的一系列特性,悬浮培养胚胎干细胞能得到囊状胚体.结论:采用4d胚龄的囊胚和1g/L胰蛋白酶-0.2g/L乙二胺四乙酸室温作用2～4min,并辅以机械作用的消化方法,有助于提高昆明小鼠胚胎干细胞建株的能力.     

康复训练对出院后不同阶段老年冠心病患者的心功能改善效果观察

目的：探讨出院后不同阶段老年冠心病患者,实施康复训练对其心功能的影响。方法：选取84例老年冠心病患者,其中36例为早期组,48例为稳定组,同时安排接受康复训练,每周每周3次,每次40-60min,持续3个月；观测两组心功能指标及6min步行试验。结果：两组康复后与康复前比较,LVEF、E/A有显著升高,LVEDD、LAD、心胸比有显著下降(P<0.05)；但两组各项指标无明显差异(P>0.05)；两组康复后与康复期比较,6min步行试验有显著提升,且稳定组高于早期组(P<0.05)。结论：康复训练是一种具有安全可靠、方便易行、经济适用的方法,其可有效改善出院后不同阶段的老年冠心病患者的心功能指标,具有较高的临床应用价值。