抑癌基因PTEN真核表达载体的构建及其在人舌鳞癌SCC-4细胞系中的表达

［摘要］ 目的：构建抑癌基因PTEN真核表达载体pEGFP-PTEN,并观察其在人舌鳞癌scc-4细胞系中的表达,为舌鳞癌的基因治疗提供理论依据。方法：提取人HeLa细胞总RNA,采用RT-PCR法获取PTEN全基因,克隆至pMD18-T载体,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后与真核表达载体pEGFP-N1连接,构建pEGFP-PTEN重组质粒。双酶切及测序鉴定后,经脂质体介导转染至体外培养的人舌鳞癌SCC-4细胞系,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白在细胞内的表达;Western blotting法检测细胞内PTEN蛋白的表达。结果：pEGFP-PTEN重组质粒双酶切,克隆的目的基因片段约为1 200 bp,测序结果与GenBank上PTEN序列完全一致;荧光显微镜下观察到pEGFP-PTEN在SCC-4细胞系中成功表达;Western blotting结果,转染组PTEN蛋白表达强度为1.07±0.15,与空转染组（0.62±0.11）和未转染组（0.57±0.08）比较差异有统计学意义（P<0.05)。结论：成功构建pEGFP-PTEN重组真核表达载体,该载体能在人舌鳞癌SCC-4细胞系中表达。     

紫草素对涎腺腺样囊性癌SACC-83增殖和凋亡的影响

目的探讨紫草素对人腺样囊性癌SACC-83增殖和凋亡的影响。方法甲基塞唑蓝检测紫草素对SACC-83体外生长抑制作用;吖啶橙-溴化乙锭荧光染色观察细胞形态变化;流式细胞仪测定细胞周期和凋亡率。结果紫草素以剂量和时间依赖的方式抑制SACC-83细胞生长,以剂量依赖的方式使SACC-83细胞周期阻滞在S期,诱导细胞凋亡;染色可见细胞呈明显凋亡特征。结论紫草素对SACC-83细胞具有明显增殖抑制及诱导凋亡作用,且具有浓度和时间依赖性。     

抑癌基因PTEN对舌鳞状细胞癌侵袭性及上皮-间质转化相关蛋白表达的影响

目的：探讨第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因（PTEN）对舌鳞状细胞癌侵袭性的影响,阐明PTEN与舌鳞状细胞癌上皮间质转化（EMT）的关系。方法：舌鳞状细胞癌SCC-4细胞株分为未转染组（SCC-4细胞）、转染组（稳定转染了PTEN的SCC-4细胞）和空载体组（转染了空载体的SCC-4细胞）。用Transwell侵袭实验测定3组SCC-4细胞的侵袭能力;Western blotting法检测与EMT相关的E-cad、vimentin和snail蛋白的表达。结果：未转染组、空载体组和转染组SCC-4细胞在Transwell侵袭小室中培养36 h后穿膜细胞数分别为82±5、80±4和42±5,其中未转染组与空载体组比较差异无统计学意义(P>0.05),转染组与未转染组比较差异有统计学意义(P<0.001)。与未转染组比较,转染组SCC-4细胞中E-cad、vimentin和snail蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05),E-cad表达上调, vimentin 和snail表达下调;空质粒组与未转染组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论： PTEN可能是通过抑制舌鳞状细胞癌SCC-4细胞株的EMT过程来降低其侵袭能力。     

一次性根管治疗感染根管的短期疗效观察

目的观察感染根管采用一次性根管治疗的短期临床效果。方法选取临床诊断为不可复性牙髓炎、牙髓坏死及急慢性根尖周炎的单根管患牙120颗,随机分成实验组（64颗）与对照组（56颗）。实验组采用一次性根管治疗,对照组采用传统根管治疗。随访6个月,比较两组患牙的治愈率及术后疼痛情况。结果根管治疗术后,两组疼痛差异无统计学意义（P〉0．05）。实验组治疗有效率为93．8％（60／64）,对照组有效率为94．6％（53／56）,两组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论一次性根管治疗能取得与传统根管治疗同等的疗效,具有一定的临床可行性。     

多西他赛联合奥沙利铂和5-氟尿嘧啶诱导化疗对口腔鳞癌的疗效观察

目的观察多西他赛（TXT）联合奥沙利铂（L-OHP）和5-氟尿嘧啶（5-Fu）诱导化疗对口腔鳞癌的治疗疗效和毒副作用。方法 53例经病理组织学证实为口腔鳞癌的患者,给予多西他赛联合奥沙利铂和5-氟尿嘧啶治疗,TXT 75mg/m2,L-OHP 130mg/m2,5-Fu 500mg/m2静滴,21天为1个疗程,连用2个疗程后评定近期疗效,用药结束后1-2周对患者施行手术根治术,随访3-5年评定远期疗效。结果近期疗效中,完全缓解（CR）11例,部分缓解（PR）29例,无效（NR）13例,总有效率（CR＋PR）为75.47%（40/53）,未出现严重不良反应;远期疗效中,患者术后3、5年生存率分别为64.15%（34）、50.94%（27）。结论多西他赛联合奥沙利铂和5-氟尿嘧啶用于口腔鳞癌术前诱导化疗,疗效明显,毒副反应可以耐受,与手术治疗结合可提高患者生存率。     

显微超声技术处理钙化根管及根管内台阶的疗效观察

目的探讨根管显微镜联合超声器械治疗钙化根管及根管内台阶的临床疗效。方法选取因根管钙化及根管内台阶造成的阻塞根管65个为研究对象,在根管显微镜下采用专用的超声器械进行根管再通畅。结果 65个阻塞根管中,成功再通畅的根管有56个,成功率为86.2%。其中钙化根管再通畅率为88.6%,根管内台阶去除率为83.3%。结论根管显微镜和超声技术的结合,为处理钙化根管和根管内台阶提供了有效的方法。     

药物相关性颌骨坏死的病因特点和临床治疗初探

目的:对17例药物相关性颌骨坏死患者的发病因素特点和临床治疗效果进行初步总结和分析。方法:回顾2016年7月至2019年12月晋中市第一人民医院口腔颌面外科收治的17例药物相关性颌骨坏死患者临床资料,其中男性9例,女性8例,年龄（63.6±9.6）岁（43~82岁）。对其原发疾病、发病因素、发病部位、临床表现、治疗方法...     

PTEN基因转染对人舌鳞癌细胞系SCC-4凋亡的影响及其作用机制

目的 探讨PTEN基因转染对人舌癌细胞系SCC-4凋亡的影响及其作用机制.方法 将转染PTEN的SCC-4(pEGFP-PTEN-SCC-4)细胞作为实验组,以SCC-4和pEGFP-SCC-4作为对照,流式细胞仪检测3组细胞凋亡情况;应用Western blotting法检测3组中Akt、p-Akt、Bim的表达情况.结果 流式细胞仪检测结果显示,实验组细胞凋亡率比对照组明显增高(P＜0.01);Western blotting结果显示,各组细胞间总Akt水平差异不明显;p-Akt在实验组中表达明显低于对照组;Bim在实验组中表达明显高于对照组.结论 PTEN转染能够诱导SCC-4的凋亡,可能机制是负调控PI3K/Akt信号通路并上调Bim的表达.