神经元特异性烯醇化酶光激化学发光免疫分析法的建立

研制检测人血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)的光激化学发光免疫分析(AlphaLISA)快速检测试剂盒。采用受体微球用一株NSE单克隆抗体包被,用生物素标记一株单克隆抗体,与链霉亲和素的供体微球共同组成检测试剂盒,优化反应体系并对试剂盒的各项性能指标进行评价。结果显示:自制NSE试剂盒灵敏度为0.149 ng/ml,线性范围为0.149~600ng/ml,分析内、分析间的精密度分别为3.7%~4.3%、3.9%~5.2%,与细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、非神经元性烯醇化酶(NNE)均无交叉反应,154份临床血清样本用本试剂盒与罗氏化学发光试剂盒检测,其相关系数为0.979。发现自制NSE-AlphaLISA试剂盒的各项性能指标均能达到临床检测要求,可用于临床血清样本NSE浓度的测定。     

伏马毒素B1时间分辨免疫荧光检测试剂盒的研制

目的： 为快速检测食品中的伏马毒素B1 (fumonisin B1,FB1),制备抗FB1的单克隆抗体并利用该抗体研制基于时间分辨免疫荧光分析方法的检测试剂盒。方法：在建立抗伏马毒素B1单克隆杂交瘤细胞株的基础上,采用小鼠腹腔注射法生产大量腹水,经Protein A亲和层析柱分离纯化、透析后得到单克隆抗体,利用所得抗体建立间接竞争性时间分辨免疫荧光分析试剂盒并优化各参数：线性范围、检出限及与黄曲霉毒素 (aflatoxins,AFB1)、呕吐毒素 (deoxynivalenol,DON)和载体蛋白BSA等的交叉反应性;对试剂盒稳定性采用37 ℃破坏实验;采用3个浓度的加标回收试验确定回收率;对19份样品及FB1玉米盲样进行检测,并同时用市售ELISA试剂盒进行验证。结果：所研制试剂盒的最低检出浓度为2 ng/mL,检测线性范围为2～512 ng/mL,线性方程为Y=-0.644X+12.872 (R2=0.998),50%抑制浓度为10.07 ng/mL,加标提取后,玉米样品3个加标水平的回收率在78.32%～116.76%之间,与AFB1、DON和BSA均无交叉反应性,试剂盒常温下可保存315 d以上。结论：本研究建立了快速、敏感检测FB1的时间分辨免疫荧光检测试剂盒。     

神经元特异性烯醇化酶(NSE)时间分辨荧光免疫分析试剂盒的临床性能评价

目的对自制的神经元特异性烯醇化酶时间分辨荧光免疫分析试剂盒进行临床应用研究及临床性能评价。方法用自制试剂盒检测采集到的血清1008例,Roche公司电化学发光试剂盒作为对照试验,WALLAC公司时间分辨荧光免疫分析试剂盒作为复核试验。操作按各试剂盒说明书进行,对自制试剂盒的符合率和相关性等指标进行计算分析。结果同Roche电化学发光试剂盒比较,自制试剂盒阳性符合率为98.04%,阴性符合率为98.39%;两者测定值接近,相关系数为0.973,相关性好,P=0.000。其AUCROC值为0.994。结论本试剂盒检测性能满足临床应用的需要。     

人血清补体C3、C4定时散射比浊分析检测试剂的研制

目的 建立人血清补体C3、C4定时散射比浊分析方法.方法 采用定时散射比浊分析法检测临床血清标本,并对试剂的各项性能指标进行评价.结果 补体C3试剂盒的测定范围为0.945～1.776 g/L,灵敏度为0.022 g/L,批内批间的精密度分别为2.5%～4.8%,5.4%～7.1%.样本中的游离血红蛋白、胆红素、甘油三酯等干扰物浓度达到10 g/L、600 mg/L、57 g/L时对检测结果无显著性影响,42份异常血样用自制试剂盒与进口Dade Behring试剂盒同时检测,其相关系数为0.985;补体C4试剂盒的测定范围为0.096～0.435 g/L,灵敏度为0.0014 g/L,批内批间的精密度分别为1.8%～2.2%,3.8%～5.2%.样本中的游离血红蛋白、胆红素、甘油三酯等干扰物浓度达到10 g/L、600 mg/L、24 g/L时对检测结果无显著性影响,42份异常血样用本试剂盒与进口Dade Behring试剂盒同时检测,其相关系数为0.991.结论 补体C3、C4散射比浊试剂盒各项指标均达到临床检测要求,与Dade Behring同类试剂测定结果有较好的相关性,在临床上有极大的应用前景,有望替代国外同类产品试剂盒.     

癌胚抗原光激化学发光免疫分析法的建立

目的:利用光激化学发光免疫分析技术(Al-phaLISA)建立人血清癌胚抗原(CEA)的快速检测试剂。方法:1株CEA单克隆抗体(mAb)包被受体微球,另1株(mAb)用生物素标记,与链霉亲和素的供体微球共同组成检测试剂,优化反应体系并对试剂的各项性能指标进行评价。结果:自制CEA试剂分析灵敏度为0.11 ng/mL,线性测量范围为0.11～500 ng/mL,分析内和分析间的精密度分别为3.3%～6.8%、5.5%～8.1%,与AFP、CA12-5、CA19-9和人血清白蛋白均无交叉反应,100份临床血清样本用本试剂与罗氏化学发光试剂检测,其相关系数为0.976。结论:自制CEA Al-phaLISA试剂的各项性能指标均能达到临床检测要求,有望替代国外同类试剂应用于临床血清样本CEA浓度的测定。     

C肽光激化学发光免疫分析试剂盒的研制

目的:研制光激化学发光免疫分析技术(AlphaLISA)建立人血清C肽(C peptide)的快速检测试剂盒.方法:采用夹心法建立C peptide AlphaLISA试剂盒.结果:自制C肽试剂盒灵敏度为0.06ng/ml.,可测范围为(0.06～22)ng/ml.批内与批间的精密度分别为4.0%～4.8%,5.6%～...     

CA15-3定量测定试剂盒(时间分辨免疫荧光法)临床性能评价研究

目的对自制的CA15-3定量测定试剂盒(时间分辨免疫荧光法(TRFIA))进行临床性能评价,并为该试剂盒在临床的应用提供科学依据。方法用自制试剂盒检测采集到的血清1014例,以罗氏(Roche)的电化学发光(ECL)CA15-3定量测定试剂盒为试验对照方法。若结果判断有明显差异者,进而用雅培(ABBOTT)公司的微粒子免疫荧光定量测定药盒作为复核试验方法。操作按试剂盒说明书进行,最后对自制试剂盒的准确性和相关性等指标进行计算。结果本试剂盒以电化学发光法(Roche)为考核试验的对照试验,其阳性符合率为98.68%,阴性符合率为95.70%,总符合率为97.04%,检验无显著性差异;考核试剂盒的定量测定值在线性范围内与电化学发光法(Roche)的值相关性良好,相关系数r=0.922,P=0.000。在ROC曲线中的AUCROC值为0.989,检测性能优秀。结论本试剂盒检测性能满足临床应用的需要。     

HBeAb光激化学发光免疫分析试剂盒的研制

摘要：目的研制光激化学发光免疫分析技术（AlphaLISA）建立人血清乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)的快速检测试剂盒。
方法采用中和抑制法建立HBeAb AlphaLISA试剂盒。结果自制HBeAb试剂盒灵敏度为0.003 NCU/ml,可测范围为
0.003-16 NCU/ml。批内与批间的精密度分别为5.3%和6.8%,与HBcAb无交叉反应。使用自制试剂与罗氏化学发光试
剂盒同时检测136份临床血清样本,结果具有相关性（r=0.961）。结论自制HBeAb AlphaLISA试剂盒的各项性能指标能
够达到临床检测要求,可用于临床血清样本HBeAb浓度的测定。     

时间分辨荧光免疫法定量检测CA125试剂盒临床应用研究

目的对自制CA125定量测定试剂盒（时间分辨荧光免疫法）进行临床应用研究，为该试剂盒的临床应用提供科学依据。方法按照自制试剂盒操作说明书对收集的410份血清进行测定，以电化学发光CA125定量测定试剂盒（Roche公司）为对照试剂，微粒子酶联免疫定量测定药盒（ABBOTT公司）为复核试剂，对测定的结果进行统计学分析。结果以电化学发光法为对照试验，其阳性符合率为98．35％，阴性符合率为98．81％，检验差异无统计学意义（P〉0．05）；相关系数为0．937，相关性良好；ROC曲线下面积为0．998。结论本试剂盒检测性能能满足临床应用的需要。