AMPK调控不同强度电刺激引起的C2C12肌管线粒体氧化应激

目的研究不同时间电刺激模拟不同强度运动对C2C12肌管线粒体氧化应激水平的影响,并进一步探讨5′-磷酸腺苷活化 蛋白激酶（AMPK）信号通路在不同运动强度过程中所发挥的作用。方法C2C12肌管分化7 d后给予1次电刺激,刺激强度为 15 V,30 ms,3 Hz,刺激时间分别为0、60、120和180 min。实验共4组,对照组（Con）;电刺激60 min组（E60）,120 min（E120）和 180 min（E180）。细胞电刺激处理后于倒置显微镜观察肌管形态;试剂盒法检测脂质过氧化产物（MDA）和活性氧自由基 （ROS）;流式细胞技术检测线粒体ROS和膜电位;免疫蛋白印迹法检测PGC1、AMPK-Ser485、AMPK-Thr172、AMPK的蛋白表 达。结果不同时间的电刺激后,C2C12肌管的形态无显著差异;电刺激60 min,MDA、ROS、AMPK-Ser485和AMPK-Thr172显 著上升（P<0.05）;电刺激120 min和180 min,MDA、ROS、线粒体ROS、AMPK-Ser485、PGC1显著上升（P<0.05）,线粒体膜电位 显著下降（P<0.05）。结论电刺激导致肌管氧化应激,且随时间延长,线粒体氧化应激程度越强烈,线粒体损伤越严重;AMPKThr172 调控中长时间电刺激引起的氧化应激,而AMPK-Ser485及PGC1调控超长时间电刺激引起的氧化应激。     

Rictor/mTORC2调节小鼠睾丸血睾屏障与精子发生

目的 研究Rictor/mTORC2在睾丸血睾屏障形成、睾丸发育和精子发生中的作用及相关机制.方法 采用Cre-loxP重组酶系统,构建睾丸支持细胞中rictor基因敲除小鼠.比较敲除鼠和对照鼠的生殖器官外观和质量.HE染色观察睾丸和附睾的组织形态.采用流式细胞技术检测生精小管的细胞周期.采用免疫荧光技术检测增殖蛋白(Ki-67)和分离酶蛋白的表达.采用免疫组化和Western blot技术检测血睾屏障相关蛋白表达.结果 相比对照鼠,敲除鼠的睾丸和附睾体积和重量都明显变小(P<0.01);敲除鼠的生精细胞中二倍体细胞显著上升(P<0.01),单倍体细胞显著下降(P<0.01),而四倍体细胞、Ki-67和分离酶蛋白无显著差异;血睾屏障相关蛋白出现严重的位置错乱,而蛋白表达量不受影响.结论 睾丸支持细胞中rictor基因的正常表达,在血睾屏障结构完整性维持和功能发挥以及精子正常发生中起着至关重要作用.     

补中益气汤在转移性乳腺癌他莫昔芬耐药中的作用及机制

目的研究补中益气汤在转移性乳腺癌他莫昔芬(TAM)耐药(R)中的作用及机制。方法实验分为5组,MCF-7、MCF-7+TAM、MCF-7+补中益气汤、MCF-7/TAM-R、MCF-7/TAM-R+补中益气汤。TAM培养液持续培养6个月以上,即诱导产生耐TAM人乳腺癌细胞系MCF-7/TAM-R,TAM用量为5μg/ml。补中益气汤用量为1. 5μg/μl。MCF-7细胞平均种于35 cm培养皿,细胞贴壁后药物处理18 h,MTT比色法检测细胞的存活率; Western印迹法检测雌激素受体(ER)、血管内皮生长因子受体(EGFR)、人类表皮生长因子受体(HER)-2、Akt蛋白含量; q RT-PCR法检ER、EGFR、HER-2、Akt的m RNA表达。结果与MCF-7组相比,MCF-7+TAM和MCF-7+补中益气汤组细胞存活率、ER、EGFR、HER-2、Akt的基因表达及蛋白含量显著下降(P0. 05); MCF-7/TAMR组无显著差异(P0. 05); MCF-7/TAM-R+补中益气汤组显著下降(P0. 05)。结论补中益气汤通过下调ER、EGFR、HER-2及下游Akt的基因表达及蛋白含量,而逆转了MCF-7细胞对TAM耐药,从而进一步促进乳腺癌细胞的凋亡,达到控制乳腺癌的效果。