saRNA激活ABCG2表达增强肾和肠细胞排泄尿酸的研究

目的 筛选、研究小激活RNA(small activating RNA, saRNA)增强ABCG2基因表达对肾、肠细胞排泄尿酸(uric acid, UA)的影响,探索促进UA排泄的全新一类治疗机制药物。方法 设计靶向小鼠和人ABCG2基因的saRNA,转染小鼠肾小管上皮细胞(TCMK-1)和人肾小管上皮细胞(HK-2)细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western Blot筛选强激活效果的saRNA;检测强激活saRNA增强TCMK-1和HK-2细胞排泄UA的作用。筛选的saRNA通过尾静脉注射高尿酸血症(hyperuricemia, HUA)模型小鼠,检测血尿酸(serum uric acid, SUA)、尿尿酸(urine uric acid, UUA)、肠道UA、血尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)和血清肌酐(serum creatinine, SCr)含量,以及肝脏黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase, XOD)活性,验证所选saRNA促进UA排泄的作用。苏木精-伊红染色法(H&E)染色观察小鼠肾脏和小肠病理改变。RT...     

脑蛋白水解物-Ⅰ对帕金森病小鼠肠道菌群的调节作用

目的 探讨脑蛋白水解物-Ⅰ(CH-Ⅰ)对1-甲基-4-苯基-1, 2, 3, 6-四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病(PD)小鼠神经保护的作用和机制。方法 成年健康雄性C57BL/6小鼠36只,按照随机对照原则,将小鼠分为对照组(Ctrl),模型组(MPTP)和CH-Ⅰ组,应用MPTP诱导小鼠PD模型。通过腹腔注射CH-Ⅰ干预治疗,爬杆实验检测小鼠的行为功能,免疫组织化学检测酪氨酸羟化酶(TH)表达水平,基因测序和生物信息学分析法检测肠道细菌群落的组成和多样性。结果 行为学结果显示,模型制作后与Ctrl组相比,MPTP可诱导PD小鼠出现行为学缺陷(P<0.05),经CH-Ⅰ处理后与MPTP组相比,PD小鼠的行为学缺陷有所改善(P<0.05)。免疫组织化学结果显示,MPTP使多巴胺合成中的限速酶TH表达水平降低,CH-Ⅰ处理后TH表达水平升高。微生物多样性结果显示,MPTP处理后小鼠肠道微生物多样性降低(P<0.05);在“门”水平上,ε-变形菌门及脱硫杆菌门的数量骤降,疣微菌门菌群的数量显著增加;在“科”水平上,弧菌科、毛螺菌科、螺旋杆菌科及理研菌科菌群的数量减少,而...     

人参皂苷Rg1对Aβ25-35致小鼠海马神经元损伤保护作用

目的探讨人参皂苷Rg1对β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)所致小鼠海马神经元损伤的保护作用及ICI182,780的阻断作用。方法 C57BL/6雌性OVX小鼠侧脑室注射Aβ25-35制备Alzheimer病(AD)小鼠模型,在有或无雌激素受体(ER)拮抗剂ICI182,780的情况下,腹腔注射Rg1。Morris水迷宫测试小鼠的空间学习记忆能力,RT-PCR技术检测海马bcl-2基因的表达情况。结果与对照组相比,Aβ25-35可导致小鼠的潜伏期和总路程增长(F=11.34、10.90,q=6.184、5.905,P<0.05),穿越平台次数减少(F=10.90,q=6.023,P<0.05),明显降低海马bcl-2基因的表达(F=18.47,q=6.082,P<0.05);与Aβ25-35组相比,Rg1可降低AD小鼠的潜伏期和总路程(q=5.478、6.097,P<0.05),提高其穿越平台次数(q=6.023,P<0.05),逆转Aβ25-35所致的bcl-2基因表达的降低(q=9.661,P<0.05);Rg1的这些作用可被ICI182,780完全阻断(q=5.360~7.482,P<0.05)。结论 Rg1可减弱Aβ25-35对小鼠海马神经元的损伤,其机制可能与雌激素受体途径的激活有关。     

人参皂苷Rg1激活PI3K/Akt信号通路对6-OHDA毒性作用的影响

目的 探讨人参皂苷Rg1对抗6-羟基多巴胺(6-OHDA)毒性作用的信号通路.方法 MES23.5细胞常规培养,免疫印迹法观察人参皂苷Rg1预处理对6-OHDA诱导的磷酸化蛋白激酶B (Akt) 表达的影响,MTT法观察细胞的存活率.结果 6-OHDA可时间依赖性地降低MES23.5细胞磷酸化Akt的表达(F=24.51,P<0.01),人参皂苷Rg1预处理可明显增强磷酸化Akt的表达(t=471.60,P<0.01);人参皂苷Rg1预处理可明显降低6-OHDA对MES23.5细胞的损伤作用,此作用可以被磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)特异性抑制剂LY294002所阻断(F=25.12,P<0.01).结论 人参皂苷Rg1通过激活PI3K/Akt信号通路对抗6-OHDA对MES23.5神经细胞的毒性作用.     

褐藻胶对Wilson病小鼠的神经保护作用机制研究

目的：探讨褐藻胶对Wilson’s病（WD）小鼠基底节豆状核变性的神经保护作用和机制。方法：健康雄性昆明小鼠,应用铜负荷饮食法建立HLD模型。治疗组每天给予褐藻胶灌胃,对照组动物同步给予等体积的生理盐水灌胃,每日1次,连续28天周。电感耦合等离子体质谱法检测尿铜水平,血液分析仪计数血常规指标,生化分析仪检测肝肾功指标（ALT、AST、Urea、Crea）,甲苯胺蓝染色法观察豆状核神经细胞的病理变化,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化法检测核转录因子-κB（NF-κB）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达。结果：经褐藻胶干预后,高剂量组小鼠行为功能较模型组显著改善,尿铜水平较模型组显著降低（P<0.05）,血清ALT、AST活性较模型组均显著下降（P<0.05）,变性细胞指数和凋亡细胞指数较模型组均显著降低（P<0.05）,NF-κB和MMP-9表达水平较模型组均显著减弱（P<0.05）。结论：褐藻胶可能通过促进铜离子的排泄,抑制铜离子引起的氧化应激和炎症反应,对基底节豆状核神经细胞发挥保护作用。     

小白菊内酯对肝癌HepG2细胞凋亡作用及其机制

目的 探讨小白菊内酯(PN)对人肝癌HepG2细胞的抗肿瘤作用及其机制.方法 取对数生长期的HepG2细胞分成两组,DMSO组以换液形式加入含1/1000 DMSO的DMEM高糖培养基,PN处理组分别加入PN浓度为15.0、17.5、20.0、22.5、25.0、27.5μmol/L的DMEM高糖培养基,应用WST-8...     

吴茱萸碱对人胃癌BGC-823细胞增殖的影响及分子机制研究

目的:研究观察吴茱萸碱对胃癌BGC-823细胞增殖的影响及其可能的分子机制。方法:采用CCK-8法检测吴茱萸碱对胃癌BGC-823细胞的增殖抑制作用;采用倒置显微镜观察细胞形态学变化,PI单染、Annexin V/APC+7AAD双染流式细胞术分析吴茱萸碱对胃癌BGC-823细胞周期和细胞凋亡的影响;采用Western-blot检测细胞周期相关蛋白和凋亡相关蛋白表达变化。结果:CCK-8结果表明,与对照组相比,吴茱萸碱能显著抑制胃癌BGC-823细胞的增殖活性,并且呈时间-剂量依赖性;流式细胞术分析显示10μM吴茱萸碱处理细胞24h后,能显著地将其阻滞于G_2/M期,诱导BGC-823细胞凋亡,并且主要是早期凋亡。Westernblot结果显示,吴茱萸碱处理BGC-823细胞后能下调细胞周期,促进蛋白Cdc25C的表达,促进细胞周期抑制蛋白p53的表达水平上升,并能上调细胞凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、cleaved caspase-8、cleaved caspase-9和cleaved PARP-1的表达,且呈时间依赖性。结论:吴茱萸碱可能是通过下调Cdc25C的表达和促进p53的表达使细胞周期阻滞于G_2/M期,又通过上调cleaved caspase-3、cleaved caspase-8、cleaved caspase-9和cleaved PARP-1的表达诱导细胞凋亡,抑制胃癌BGC-823细胞增殖。